二乙基己烯雌酚对成年仓鼠睾丸一氧化氮生成和生精细胞凋亡的影响

探讨了在二乙基己烯雌酚（DES）诱发成年动物生精细胞凋亡过程中睾丸一氧化氮（NO）生成和生精细胞一氧化氮合酶（eNOS和iNOs）表达的变化，以期为阐明DES诱发生精细胞凋亡机理的研究提供基础资料。成年雄性仓鼠皮下注射不同剂量DES（分别为0．01、0．1和1mg／kg体重），连续注射7d后取其睾丸，进行NO含量的测定和eNOS、iNOS免疫组化染色。电镜观察生精细胞超微结构的变化，并用TUNEL法检测睾丸中生精细胞凋亡的变化，苏丹Ⅲ染色法检测睾丸生精小管内脂滴分布的变化。结果显示：NO的生成与DES呈剂量依赖性。DES处理后，在1mg／kg体重剂量组，大量生精细胞表达eNOS和iNOS，并出现大量凋亡，退化的生精细胞胞浆内有大量髓样结构，并有大量脂滴分布于生精细胞内和细胞间。eNOS和iNOS阳性生精细胞与凋亡的生精细胞数量和类型基本一致，主要为精母细胞和圆形精子细胞。     

miR-188对小鼠乳腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

【目的】 探讨microRNA-188-5p （miR-188）在乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡过程中的调控作用，以期为乳腺癌相关治疗药物的研发提供理论依据。【方法】 培养小鼠乳腺癌细胞（4T1），建立4T1细胞小鼠移植瘤模型，分离肿瘤组织和瘤旁组织，用实时荧光定量PCR法检测miR-188的表达情况；在4T1细胞中分别转染miR-188的模拟物（miR-188 mimics）、模拟物对照（mimics-NC）、miR-188抑制物（miR-188 inhibitor）及抑制物对照（inhibitor-NC），不转染的细胞为空白对照（Con），用实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-188的表达水平，CCK-8法检测细胞增殖能力，细胞划痕试验检测细胞的迁移率，流式细胞术检测细胞的凋亡率，Western blotting检测细胞相关凋亡蛋白的表达情况。【结果】 瘤旁组织中miR-188的相对表达量显著高于肿瘤组织（P<0.05）；细胞转染结果表明，与Con组相比，miR-188 mimics组miR-188的相对表达量显著上调（P<0.05），而miR-188 inhibitor组显著下调（P<0.05），mimics-NC、inhibitor-NC组均无显著差异（P>0.05），因此后续试验分别以mimics-NC、inhibitor-NC为miR-188 mimics、miR-188 inhibitor的对照进行分析。细胞增殖和划痕试验结果表明，与mimics-NC组相比，miR-188 mimics显著降低4T1细胞的增殖速率和迁移速率（P<0.05）；细胞凋亡试验结果显示，与mimics-NC组相比，miR-188 mimics显著促进4T1细胞凋亡（P<0.05）；与inhibitor-NC组相比，miR-188 inhibitor显著抑制细胞凋亡（P<0.05）；Western blotting结果表明，miR-188 mimics显著降低基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白的表达水平（P<0.05），显著提高聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP1）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和Bcl-2-associated X蛋白（Bax）的表达、抑制抑凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）的表达（P<0.05）。【结论】 miR-188可显著抑制4T1细胞的增殖和迁移，促进4T1细胞凋亡，说明miR-188可以作为抑制乳腺癌进展和转移潜能的肿瘤调节子。     

氧化应激在亚慢性镉中毒引起的肝肾细胞凋亡中的作用

为了探明镉中毒时氧化应激与细胞凋亡的关系，以公鸡为试验动物，在日粮中添加CdCl2 150mg／kg，肝脏、肾脏和血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH～Px）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量以及肝、肾细胞凋亡的检测显示镉使鸡血清、肝脏和肾脏中GSH～Px和SOD活性降低，MDA含量增多，并诱导肝肾细胞凋亡的发生。结果表明。镉能够诱发鸡肝肾细胞发生氧化胁迫，并诱导细胞凋亡的发生。提示氧化应激与细胞凋亡存在一定的关系。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导血管内皮细胞凋亡及其凋亡相关因子的初步研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）是由镰刀菌属病原真菌产生的真菌毒素之一,在自然界广泛存在,可引起人畜中毒。为了解DON对血管内皮细胞的危害及其可能机制,本试验采用不同浓度的DON（0.25-10μg/mL）作用于猪髋动脉内皮细胞（PIEC）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）2种细胞24 h,倒置显微镜下观察其形态变化,MTT法测定细胞增殖的变化,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色方法测定细胞凋亡过程中Caspase-9和Bax表达的变化。结果显示,高浓度DON可明显改变细胞的形态;不同浓度的DON均可抑制细胞的增殖;TUNEL凋亡检测结果显示,不同浓度的DON对这2种细胞均有诱导凋亡的作用;对于PIEC细胞,在DON浓度为0.5μg/mL时,凋亡率达到最高（71.74%）;HUVEC细胞则在DON浓度为5μg/mL时,凋亡率达到最高（26.61%）,此后随浓度的升高,凋亡率下降,可能与凋亡细胞崩解脱离细胞片有关。根据试验结果初步推断,DON诱导PIEC凋亡可能与Caspases途径有关,Bax在其中起到了一定的凋亡促进作用;而在诱导HUVEC细胞凋亡的过程中未检测到Caspase-9和Bax的变化,故认为DON诱导HUVEC细胞凋亡与Caspases途径和促凋亡因子Bax均无关。     

米托蒽醌通过活性氧诱导大鼠肝癌RH35细胞凋亡的研究

试验旨在探讨米托蒽醌（mitoxantrone,MTN）对大鼠肝癌RH35细胞毒性及其作用机制。以MTT法检测MTN的细胞毒性,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生,Western blotting检测相关蛋白的表达。结果显示,MTN时间和剂量依赖性地抑制RH35细胞的生长;15 μmol/L MTN作用于细胞24、48 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性地诱导凋亡细胞比率的增加及ROS的产生;ROS清除剂NAC可以极显著降低MTN诱导的RH35细胞的ROS的产生和凋亡率（P<0.01）;15 mmol/L NAC可以下调MTN诱导的caspase-3、Bax及CytC表达增加,上调MTN诱导的Bcl-2表达降低。结果提示,MTN通过增加细胞内ROS而诱导RH35细胞发生凋亡。     

两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

为了研究H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导的细胞凋亡作用，我们将两株H5N1亚型禽流感病毒A／Duck／Guangdong／40／2000（H5NI）（简称DKGD／40／00）和A／Duck／Guangxi／35／2001（H5NI）（简称DKGX／35／01）的NSI基因克隆到真核表达载体plRES2-EGFP，转染Hela细胞后，应用荧光显微镜检测转染表达效率，应用TUNEL和流式细胞仪观察NSI基因产生的细胞凋亡作用。结果两株病毒NSI蛋白表达均能诱导Hela细胞凋亡，凋亡率无明显差异。表明单一的NS1并不能完全阐明凋亡的产生与病毒毒力强弱和病毒扩散之间的关系。     

猪流行性腹泻病毒通过miR-133c-3p/BCL2L2轴调控细胞凋亡

旨在探讨miR-133c-3p在猪流行腹泻病毒（PEDV）引起的细胞凋亡过程中所起的作用,并探讨其发挥作用的机制。以PEDV感染MARC-145细胞为模型,检测PEDV感染过程中细胞的凋亡情况以及6个与凋亡相关microRNAs的表达差异,RT-qPCR检测PEDV感染过程中与凋亡相关microRNAs的表达差异,合成miR-133c-3p的模拟物和抑制剂,转染MARC-145细胞,采用流式细胞术检测PEDV感染MARC-145细胞的凋亡情况,流式细胞术检测过表达和敲低miR-133c-3p后细胞的凋亡情况,采用生物信息学方法预测miR-133c-3p的靶基因,荧光素酶报告基因检测了miR-133c-3p和靶基因的结合情况,Western blot检测了过表达miR-133c-3p对BCL-w和PEDV蛋白表达水平的调控,用siRNA敲低BCL-w蛋白检测细胞凋亡情况。结果显示,PEDV的感染可以诱导MARC-145细胞凋亡（P<0.05）,与凋亡相关的microRNAs,如miR-133c-3p和miR-149-5p的表达上调（P<0.05;P<0.001）,miR-138-3p的表达下调（P<0.05）。其中,miR-133c-3p在病毒感染后升高了约5倍（P<0.01）。过表达miR-133c-3p后,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;敲低miR-133c-3p后,细胞凋亡率降低（P<0.05）。用生物信息学方法预测miR-133c-3p与BCL2L2的3'UTR区域有结合位点,荧光素酶报告基因试验显示miR-133c-3p可以和BCL2L2基因靶向结合（P<0.01）,过表达miR-133c-3p后细胞内BCL-w蛋白的表达明显下调,且病毒的感染可以降低BCL-w的表达水平,敲低BCL-w后细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。PEDV感染后可以通过上调miR-133c-3p的表达来下调BCL2L2的表达,从而促进细胞的凋亡。     

镉对小鼠生精细胞凋亡及bax和bcl-2基因表达的影响

将150只小鼠随机分成4个处理组和1个对照组，每组30只。给4个处理组小鼠分别一次性注射氯化镉1、2、4、6mg／kg（按体重给药），对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后第3、6和9d用原位末端标记法（TUNEL）测定睾丸内生精细胞的凋亡率，并用免疫组织化学方法检测bax和bcl-2基因的表达水平。结果显示，各染毒组小鼠的生精细胞凋亡率明显升高，与对照组相比差异显著（P〈0．05），并具有剂量-反应关系和时间-反应关系。bax基因的表达水平明显上升，而bel-2基因的表达水平明显下降。表明，镉可以诱导小鼠生精细胞凋亡，其机制可能与bax基因上调和bcl-2基因下调有关。     

线粒体损伤在阿维菌素致体外培养神经细胞凋亡中的作用

通过体外培养王鸽脑神经细胞，并按终浓度0、2．5、5和10μg／L阿维菌素（AVM）染毒，培养24h时，经透射电镜观察神经细胞超微结构，DNA断裂评价细胞凋亡，MTT法测定线粒体活性，酶标仪检测Caspase-3、Caspase-9活性，流式细胞术测定线粒体跨膜电位（△ψm），探讨线粒体损伤在AVM致体外培养神经细胞凋亡中的作用。结果显示，AVM可明显抑制神经细胞线粒体的活性，引起△ψm下降，Caspase-3和Caspase-9活性升高，神经细胞发生凋亡，存在明显的剂量效应关系。证实，线粒体损伤是AVM致体外培养神经细胞凋亡的机理之一。     

抗氧化酶在硝基苯中毒小鼠睾丸细胞凋亡中的作用

将10周龄雄性昆明小鼠随机分为硝基苯染毒组（26mg／kg、52mg／kg、105mg／kg）、花生油溶剂对照组、生理盐水对照组。对各组试验小鼠进行处理后，于第30d检测小鼠血清和睾丸中SOD、GSH-Px、CAT的活性及MDA含量，并通过DNA Ladder条带和透射电镜检测睾丸细胞的凋亡。结果，染毒组血清及睾丸中SOD、GSH—Px、CAT的活性显著或极显著（P〈0.01或P〈0．05）低于溶剂对照组，MDA含量显著或极显著（P〈0．01或P〈0，05）高于溶剂对照组，染毒组均显示DNA Ladder条带；电镜下细胞核皱缩，异染色质边聚，呈现典型凋亡现象。结果表明，硝基苯中毒能够诱使睾丸发生氧化应激，进而导致睾丸细胞发生凋亡，抗氧化酶在睾丸细胞凋亡中具有一定的作用。