猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻后的体外成熟

本研究旨在探索建立猪GV（Germinal visiele）期卵母细胞的冷冻保存方法。用抽吸法采集屠宰猪卵巢中直径为2—5mm及〉5mm的卵泡卵母细胞,再用切割法采集直径〈2mm的卵泡卵母细胞。结果表明,切割法所获卵母细胞数及每只卵巢平均采卵数均显著高于抽吸法（P〈0．05）;但切割法所获卵母细胞可用率仅为33．8％,显著低于抽吸法67．5％的可用率（P〈0．05）。用抽吸法采集直径为2—5mm的卵泡卵母细胞,进行体外成熟和玻璃化冷冻研究。4组成熟培养结果表明,卵母细胞在添加激素和猪卵泡液（pFF）的成熟培养液中培养24h后转入无激素、无卵泡液的基础培养液中继续培养20h,体外成熟率达78．9％,显著高于另外3组（P〈0．05）。以EFS40作为玻璃化冷冻液,比较细管法和OPS（Open pulled straw）法对猪GV期卵母细胞的冷冻效果,从冻后形态正常率来看,两种方法间无统计学差异（P〉0．05）;但OPS法冷冻猪GV期卵母细胞的冻后存活率和体外成熟率均显著高于细管法（P〈0．05）。     

促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

促黄体素对卵母细胞成熟有一定的促进作用。为研究不同浓度LH(促黄体素)对绵羊卵母细胞体外成熟及受精发育的影响,从屠宰场采集绵羊卵巢,切割法获取卵母细胞,于不同浓度LH成熟培养液中培养24 h,进行体外受精及体外胚胎培养。按照LH的添加浓度将试验分为5个组(A组,0μg/mL;B组,5μg/mL;C组,10μg/mL;D组,15μg/mL;E组,20μg/mL)。试验结果表明:LH的添加浓度为10μg/mL时,卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,均显著高于其它试验组(P0.05)。综上,本试验在含有10μg/mL FSH的TCM199成熟培养液中添加10μg/mL的LH时能显著提高绵羊卵母细胞的成熟率、卵裂率及桑椹胚率,这对建立稳定有效的绵羊卵母细胞成熟体外培养体系有着重要意义。     

秋水仙胺诱导牛卵母细胞显核的研究

为了观察秋水仙胺(demecolcine,DEME)诱导牛卵母细胞的显核效果,从吉林省长春市某屠宰场收集牛卵巢后采用抽吸法获取卵泡液,在体视显微镜下选择卵丘完整、胞质均匀的卵丘-卵母细胞复合体(COCs),微滴法体外成熟(in vitro mature,IVM)培养19~22 h,在0.3%透明质酸酶中旋涡振荡去除卵母细胞周围的卵丘细胞,挑选排出第一极体的卵母细胞随机分组,分别进行DEME浓度和作用时间诱导牛卵母细胞显核的研究。结果表明,DEME处理60、90、120 min组间显核率差异不显著(P0.05),但是60、120 min组的显核率显著高于DEME处理30 min组(P0.05)。当DEME浓度为0.5μg/m L时,显核率最高,为78.9%,显著高于0.3、0.4μg/m L组(P0.05),但是与0.6μg/m L组差异不显著(P0.05)。牛的COCs经IVM培养19、20、21、22 h,结果发现培养22 h组显核率最高,显著高于培养19 h组(P0.05),但是与培养20、21 h组差异不显著(P0.05)。可见牛卵母细胞经IVM培养20~22 h后,用0.5μg/m L DEME处理60 min可以有效诱导其显核。     

山羊卵泡卵母细胞的采集与体外成熟研究

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,研究了山羊卵泡卵母细胞的采集方法和采集获得的可用卵母细胞的体外成熟培养条件,结果表明:切割法能够获得较多的可用卵母细胞,且明显增加了用于体外成熟的卵母细胞数;卵母细胞在37.0℃下培养的成熟率显著低于在38.5℃、39.0℃下培养的成熟率(P＜0.05);卵母细胞培养18 h和培养20h的成熟率极显著低于培养24 h和培养26 h的成熟率(P＜0.01);此外,卵母细胞体外成熟培养时,培养液中的胎牛血清添加量以10%～15%为宜.     

小檗碱对猪卵巢卵母细胞体外成熟及其脂滴含量和分布的影响

[目的]探明不同形态的猪卵巢中卵母细胞体外成熟效果与脂滴的相关性,以及小檗碱对其的影响.[方法]将卵泡型卵巢GV期和黄体型卵巢GV期卵母细胞分别用添加小檗碱的成熟液体外成熟,观察体外成熟效果;用尼罗红染色的方法测定成熟前后的卵母细胞的脂滴含量,并观察成熟后各组卵母细胞脂滴的分布.[结果]卵泡型卵母细胞的颗粒细胞扩散率和第一极体排出率均显著高于黄体型卵母细胞(P＜0.05),小檗碱(Berberine,Ber)组卵母细胞的颗粒细胞扩散率显著高于对照组(P＜0.05),第一极体排出率极显著高于对照组(P＜0.01);体外成熟后,对照组卵母细胞中脂滴含量显著降低(P＜0.05),小檗碱组极显著降低(P＜0.01),且极显著低于对照组(P＜0.01).黄体型卵母细胞的脂滴含量则显著低于卵泡型(P＜0.05).猪卵母细胞成熟后的脂滴分布为分散型、外围型和不规则型,卵泡型卵母细胞脂滴主要呈分散分布,黄体型卵母细胞脂滴主要呈外围分布,并且黄体型卵母细胞脂滴呈不规则分布多于卵泡型.[结论]小檗碱能明显促进猪卵母细胞体外成熟,且卵泡型成熟效果显著好于黄体型;体外成熟后,卵母细胞脂滴逐渐减少,小檗碱组脂滴含量极显著减少,且黄体型卵母细胞脂滴含量明显减少;猪卵母细胞内脂滴的分布与卵巢所处的时期有关.     

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数。卵巢保存时间在 2 h 以内最好,最长不超过 6 h。30~39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于 2~8 ℃(16.7 %、0 %)和 20~29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的。采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为 69.2 %、64.3 %)。M199 是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17?-E2和 M199 + 50 IU/mL GnRH+1μg/mL 17?-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为 69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为 35.4 %、42.7 %)。     

牛卵巢的保存与卵巢内卵母细胞采集的研究

利用屠宰牛的卵巢,研究了卵巢内(Interior Ovary,IO)卵母细胞的回收方法与影响IO卵母细胞回收数量的因素,以及卵巢保存方法对卵母细胞体外受精后卵裂率与体外发育能力的影响.结果表明抽吸采取表面卵泡卵母细胞以后,用间隔1.6 mm的4个刀片平行排列构成的切割刀,纵横切割秦川牛卵泡期卵巢,其卵母细胞回收数量最高.两次回收平均每个卵巢可获得26.45个A、B级可用卵,较单纯抽吸采卵(5.15个)提高了约4倍.刀距增宽或缩小都会降低卵母细胞的回收数量.牛品种不同对IO卵母细胞的回收数量有显著影响,以中国荷斯坦牛最多(34.25个/卵巢),秦川牛次之(21.75个/卵巢),山丹牛最少(8.25个/卵巢).牛繁殖状态不同对IO卵母细胞的回收数量有显著影响,以卵泡期最多(21.75个/卵巢),黄体期和妊娠期次之(分别为11.75、10.75个/卵巢),老龄退化期最少(4.25个/卵巢).回收的IO卵母细胞直径和透明带外径分别达(126.9±9.98) μm和(151.85±10.39) μm,均较表面卵母细胞(分别为136.05±6.09 μm和160.80 μm±4.23 μm)要小的多(P＜0.01).卵巢保存温度25～29℃与30～37℃对IO卵母细胞体外受精后卵裂率与6～8细胞胚发育率无显著影响(P＞0.05),但保存时间则有显著影响,超过6 h会显著降低卵裂率和6～8细胞胚发育率(P＜0.05).     

绵羊卵母细胞体外受精培养体系的建立与优化

本试验对影响绵羊体外成熟和受精的因素进行了比较分析,以期建立并优化这一培养发育体系。从呼市屠宰场采集绵羊卵巢,抽吸卵巢表面2~6mm的卵泡卵母细胞,在体外进行成熟培养;成熟后的卵母细胞,与处理后的附睾精子共同培养进行受精。结果表明,添加10%~15%ESS,10μg/mL FSH,20μg/mL LH,1.5μg/mL 17-βE2,100IU青霉素,100 IU链霉素的TCM-199成熟培养液能较好地促进绵羊卵母细胞体外成熟。绵羊卵母细胞体外成熟培养22-24h,用附睾精液进行体外受精,用Sofaa,10%FBS Sofaa高糖组合或CM,BM组合的发育液培养,置于38.5℃、三气(5%CO2、5%O2、90%N2)、饱和湿度的条件下,可获得较高的卵裂率76.0%和囊胚率(31.1%)。     

亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响

收集屠宰场水牛卵巢卵母细胞,在卵子体外成熟和受精后胚胎体外发育过程中分别添加0(对照组),10,50,100和200μmol·L-1的亚麻酸,探究亚麻酸对水牛卵母细胞核成熟率、受精卵的分裂率和植入前胚胎体外发育的影响。结果显示:在水牛卵母细胞体外成熟液中添加亚麻酸,添加浓度50μmol·L-1组的核成熟率(74.18%)显著高于对照组和其他实验组(P0.05),囊胚率(33.24%)显著高于对照组和10μmol·L-1亚麻酸组(P0.05)。在胚胎培养液中添加50μmol·L-1亚麻酸组的囊胚率(34.52%)显著高于对照组和100μmol·L-1亚麻酸组(P0.05);同时在成熟液和胚胎培养液中添加亚麻酸,添加浓度200μmol·L-1组的分裂率显著高于对照组(P0.05),而各组间的囊胚率和D7囊胚比率均差异不显著。结果表明,单独在水牛卵母细胞体外成熟液和胚胎培养液中添加50μmol·L-1亚麻酸能有效促进水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育。     

辽宁绒山羊卵泡卵母细胞体外成熟的分析

为了获取高质量的卵泡卵母细胞,提高绒山羊体外胚胎生产的效率,采用切割法与抽吸法采集卵泡卵母细胞,并对获得的可用卵母细胞进行了体外成熟培养,表明结果:切割法获得的可用卵母细胞较多,明显增加了用于体外成熟的卵母细胞数。在温度37.0、38.0、39.0℃条件下对卵母细胞进行体外成熟培养,成熟率分别为67.74%、72.00%、75.38%,表明39.0℃适合辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟培养。在温度39.0℃条件下用10%胎牛血清(FCS)的TCM-199培养液培养卵母细胞的成熟率为78.57%,而在10g/LBSA的TCM-199培养液中培养卵母细胞的成熟率为74.07%,二者差异不显著。     

猪后躯被检淋巴结的形态学观察

观察测量屠宰肉尸452头,其中440头为有无腹股沟深淋巴结的形态学观察;10头为后躯被检淋巴结的形态学观察;2头为管道注射,观察引流区。结果:1.猪有腹股沟深淋巴结,在统计230头,460例肉尸中,有24头存在,占10.43％。腹股沟深淋巴结平均重0.88±0.38克,平均大小为2.82±0.70×1.64±0.36×0.47±0.13厘米;汇集股部内侧和下腹部的淋巴液,注入髂内侧淋巴结。2.髂内侧淋巴结平均重1.87±0.71克,平均大小为3.19±0.80×1.38±0.42×0.55±0.18厘米;输入管数为5—6条,管外径为0.09±0.04厘米,输出管数为1—3条,管外径为0.24±0.10厘米。3.髂内侧淋巴结收纳腘浅淋巴结,腹股沟浅淋巴结和髂下淋巴结引流区的淋巴液和部分盆腔内脏的淋巴液。管辖范围广,位置恒定,淋巴结较大,浅在胴体脏面,易找到,不破坏商品,不影响商品的外观,是屠宰肉尸后躯被检的主要淋巴结。     

舌感受器的比较组织学观察

本文用比较组织学方法,观察大量舌组织切片,初步发现:舌感受器随着动物进化发展在种类与形态结构上有较明显的差异,两栖类最为简单,只看到游离神经末梢;啮齿、偶蹄和食肉类较复杂,有游离神经末梢、丛束状神经末梢、味蕾和肌梭等;人类最为高级,结构最为复杂,增加了肌间结缔组织感受器、肌束膜感受器、血管旁感受器和肌腱感受器等。此外,本文还对上述感受器进行了生理机能、组织发生和生物进化方面的分析和讨论。     

鸡腿菇菌丝体的酯酶同工酶研究

选择碳源(玉米粉)、氮源(蛋白胨)、pH、温度、培养时间等培养条件,采用L27(55)五元二次回归正交试验,液态培养鸡腿菇菌丝体.同工酶分析结果表明,鸡腿蘑菌丝体酯酶(EST)同工酶在不同培养条件间存在差异.     

多发风险模型的负盈余持续时间分布的计算

本文对多发风险模型的负盈余持续时间进行了计算,从数值上对古典风险模型与多发风险模型的负盈余持续时间进行了比较,进一步说明了二者的不同之处。