非洲马瘟在东南亚的暴发及其对云南马属动物的威胁

非洲马瘟是目前已知对马属动物危害最大的一种传染病,马感染非洲马瘟后的死亡率可高达95％.2020年,非洲马瘟首次出现在泰国和马来西亚等东南亚国家,该病经由邻国传入云南的风险越来越大.为提高兽医管理和技术人员、马属动物相关行业从业人员对该病的认识,从非洲马瘟的病毒特征、流行病学特征、临床症状、实验室诊断技术、疫苗免疫和预...     

非洲马瘟病毒VP7蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立非洲马瘟病毒(African Horse Sickness Virus,AHSV)的血清学诊断方法,本研究构建了非洲马瘟病毒VP7蛋白的原核表达质粒pET-32a-VP7,诱导表达后使用Ni-NTA对可溶性VP7蛋白亲和纯化,以重组VP7蛋白作为包被抗原,优化建立检测血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行敏感性、特异型和重复性验证,表明该方法的检测效果良好。本研究为非洲马瘟的血清检测试剂盒的开发提供的相关参考。     

用胶固补体吸收试验诊断非洲马瘟

在目前的研究中,胶固补体吸收试验不仅已用于对非洲马瘟的实验性诊断,而且也用于对非洲马瘟野外病例的诊断。本试验统一使用的抗原,是由实验感染马采集的感染脾脏的悬液,并以马制备高免血清。作为抗原/抗体对照,发现本试验是特异的。用不是死于非洲马瘟的马的脾脏制备抗原,从来都没有发现阳性结果。本研究所获得的结果表明,这个试验可以成功地用于非洲马瘟的快速诊断。     

非洲马瘟疫苗的研究进展

非洲马瘟(African horse sickness,AHS)由非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)感染马科动物而引起的一种非接触性传播的虫媒病毒病,为世界动物卫生组织法定报告的动物疫病,目前主要流行于亚撒哈拉非洲等地区。库蠓(Culicoides midges)是非洲马瘟的主要媒介昆虫,其在疫区的生长繁殖直接影响着该病的流行状况。非洲马瘟弱毒苗和灭活苗已经商品化并得到广泛地应用,新型基因工程疫苗,如亚单位疫苗、活病毒载体疫苗等,正在研发当中并有望将来进入疫苗市场,作者着重对ASH疫苗的研究现状进行了评述。     

微量血凝抑制试验操作中常见问题及解决办法

随着人们对动物源性食品质量卫生安全要求的日益提高和动物防疫检疫工作的需要 ,实验室检验成为基层动物防疫检疫机构的必要技术手段。血凝抑制试验是化验室中简便、快速、灵敏、准确且最常用的血清学诊断方法。但不规范的操作经常会发生一些问题 ,影响试验的精确性。下面就我局动检站化验室在实验中的一点体会与大家探讨。微量血凝抑制试验可以用来发现和鉴定病毒 ,诊断病毒性疾病 ,测定免疫机体抗体效价 (抗体检测 ) :常用于禽新城疫、禽流感、禽减蛋综合症、狂犬病、日本乙型脑炎、非洲马瘟、犬病毒性肠炎 (犬细小病毒病 )、兔病毒性出血…     

要闻

正农业农村部要求做好非洲马瘟防范工作4月22日,农业农村部办公厅发布《农业农村部办公厅关于做好非洲马瘟防范工作的通知》农办牧[2020]22号(以下简称《通知》)。《通知》指出,非洲马瘟是由非洲马瘟病毒引起的马属动物的一种急性传染病,通过库蠓等吸血昆虫叮咬传播,主要症状为发热、皮下水肿和病毒血症,严重时伴有组织和脏器出血。马属动物中马最易感,病死率可高达95%,骡驴次之。     

非洲马瘟疫苗研究进展

本文对非洲马瘟的病毒特性、临床症状和检测方法进行概述,重点对非洲马瘟的传统疫苗和新型疫苗的研究进展进行了详细综述,以期为非洲马瘟疫苗的相关研究提供参考。     

非洲马瘟流行病学特征

非洲马瘟是由非洲马瘟病毒引起的马属动物的急性或亚急性传染病. 1 流行特点 1.1 传染源 感染的马属动物是本病的主要传染源,其内脏和血液含病毒.病毒血症期间感染马的精液、尿液等都存在病毒. 1.2 传播途径 非洲马瘟的传播媒介主要是库蠓,其次是伊蚊、蜇蝇等吸血昆虫,拟蚁库蠓是该病最重要的传播媒介.     

非洲马瘟概况综述

介绍了非洲马瘟病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断及疫苗研究情况,分析了非洲马瘟防控现状,提出了防控非洲马瘟的目标及措施,为我国防范非洲马瘟疫情提供依据。     

狂犬病的实验室诊断

狂犬病是由弹状病毒科、狂犬病病毒属的嗜神经病毒引起的一种世界性的人兽共患病.一旦出现症状,病死率近100％.由于该病无特征性大体病变,因而建立敏感、快速、准确的实验室诊断方法对狂犬病的防控工作至关重要.实验室诊断通常需要采集来自中枢神经的脑组织样本.通过病理组织学染色观察内基小体(Negri)是一种经典的实验室诊断方法,但是由于方法敏感性低,易受样本自溶的干扰,而已趋向于淘汰.抗原检测技术中首推的是荧光抗体试验(FAT):丙酮固定的脑组织切片在用荧光抗体染色后,可在荧光显微镜下观察是否有病毒包涵体或者病毒颗粒.此外,随着胶体金免疫层析法(GICA)在病原及小分子物质检测领域的快速发展,近年还出现了该技术用于狂犬病抗原检测的研究,且取得了较好效果.此外,小鼠颅内接种(MIT)和细胞培养分离(CIT)除了可用于狂犬病病毒培养外,还可单独作为诊断手段,或者配合FAT进行病原诊断.新鲜材料得到的单份阴性结果往往需要进行以MIT和CIT来进行再确认.此外巢式逆转录-聚合酶链式反应(Nested RT-PCR)可通过检测狂犬病病毒核酸来诊断病原,并进行分型.狂犬病的血清学试验在抗原诊断方面价值不大,多用于动物体内保护性抗体的检测.血清学试验中,荧光抗体中和试验(FAVN)及快速荧光抑制灶试验(RFFIT)是国际贸易规定的病毒中和试验.酶联免疫吸附试验(ELISA)也是一种快速、灵敏的血清学抗体检测方法,且如今已有包被狂犬病病毒G蛋白的间接ELISA试剂盒销售.     

动物病原微生物分类名录

根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》第七条、第八条的规定,对动物病原微生物分类如下:一、一类动物病原微生物口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒、猪水泡病病毒、非洲猪瘟病毒、非洲马瘟病毒、牛瘟病毒、小反刍兽疫病毒、牛传染性胸膜肺炎丝状支原体、牛海绵状脑病病原、痒病病原。二、二类动物病原微生物猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、狂犬病病毒、绵羊痘/山羊痘病毒、蓝舌病病毒、兔病毒性出血症病毒、炭疽芽孢杆菌、布氏杆菌。三、三类动物病原微生物多种动物共患病病原微生物:低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、…     

动物病原微生物分类名录

根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》第七条、第八条的规定,对动物病原微生物分类如下:一、一类动物病原微生物口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒、猪水泡病病毒、非洲猪瘟病毒、非洲马瘟病毒、牛瘟病毒、小反刍兽疫病毒、牛传染性胸膜肺炎丝状支原体、牛海绵状脑病病原、痒病病原。二、二类动物病原微生物猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、狂犬病病毒、绵羊痘/山羊痘病毒、蓝舌病病毒、兔病毒性出血症病毒、炭疽芽孢杆菌、布氏杆菌。三、三类动物病原微生物多种动物共患病病原微生物:低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、…     

HoBi瘟病毒一步法荧光定量PCR检测方法的建立

为建立快速检测HoBi瘟病毒的方法,根据GenBank提交的HoBi基因序列,使用软件设计2对引物和1条探针,通过体外转录获得定量标准品RNA。通过对荧光定量PCR将各反应条件进行优化,建立了HoBi瘟病毒一步法荧光定量PCR检测方法。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,对牛病毒性腹泻病毒-1(BVDV1)-NADL、BVDV2-JN、猪瘟病毒(CSFV)、羊边界病毒(BDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、牛轮状病毒(RV)和伪狂犬病病毒(PRV)核酸检测为阴性;最低核酸检测量为103拷贝/μL;组内变异系数和组间变异系数均小于2%。结果表明,所建立的HoBi瘟病毒一步荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好和快速等特点,可用于HoBi瘟病毒感染的流行病学调查和早期诊断。     

狂犬病病毒磷蛋白单抗的制备与应用

以灭活的狂犬病病毒CVS株细胞毒免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA法和Western-blot筛选获得针对磷蛋白的单克隆抗体4株：1C9、4B10、2G12、4G5,其中1C9针对氨基端保守表位。以亲和层析法纯化1C9单抗腹水,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体。以1C9磷蛋白荧光抗体与本实验室研制的狂犬病核蛋白免疫荧光抗原检测试剂盒,对本实验室收集的501份疑似狂犬病鼬獾、蝙蝠、犬和黄鼬的脑组织样品进行直接免疫荧光平行检测。结果显示,两种检测手段对基因1型狂犬病毒的检出结果完全一致,而蝙蝠源Irkut病毒仅能以磷蛋白单抗1C9检出。本研究成功获得了与我国现有不同基因型狂犬病毒良好反应的抗狂犬病磷蛋白单抗,并应用于狂犬病的直接免疫荧光检测,为狂犬病诊断提供了敏感性和可靠性良好的诊断试剂。     

非洲马瘟病毒可视化RT-LAMP现场检测方法的建立

为建立非洲马瘟病毒(AHSV)可视化RT-LAMP检测方法,本研究根据AHSV外衣壳蛋白(VP7)基因保守序列设计2对特异性引物,通过反应条件优化建立了AHSV可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,本实验所建立RT-LAMP方法的最佳反应条件为62℃1 h;利用该方法检测进口灭活冻干疫苗中的9个血清型AHSV以及马流感病毒、马传贫病毒、马动脉炎病毒和蓝舌病病毒的RNA,结果显示所有血清型AHSV RNA检测均为阳性,其它病毒RNA检测为阴性,该方法特异性较强;该方法最低可检测到3.2×10~(-9)ng/μL的RNA,敏感性是普通RT-PCR方法的1 000倍。利用建立的RT-LAMP方法和普通RT-PCR方法对35份马血和5份驴血样品同时进行检测,结果显示二者阳性和阴性符合率均为100%。本研究在国内外首次建立了AHSV 9种血清型的可视化RT-LAMP检测方法,其具有特异性强、敏感性高、快速和高通量检测的优点,为非洲马瘟(AHS)快速的可视化现场诊断提供可行方法。     

牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)保守基因gB和gE序列,分别设计两对引物及其相应的TaqMan探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释的病毒进行扩增以检测其灵敏度,同时对伪狂犬病病毒(PRV)、马立克病病毒(MDV)、鸭瘟病毒(DPV)进行特异性检测.结果显示,建立的扩增gB和gE基因的荧光PCR可用于检测IBRV,其灵敏度为0.02 TCID50,而与PRV等非IBRV无交叉反应.本研究所建立的荧光PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可用于IBRV的检测.     

环状病毒的流行与传播

环状病毒是牲畜常见的重要病原体,主要包括有蓝舌病病毒、非洲马瘟病毒、马器质性脑病病毒和流行性出血热病毒等。这些病毒能够通过吸血性的库蠓传播。本文主要介绍了这几种病毒在世界各地的流行与传播情况。     

非洲马瘟病毒VP7蛋白研究进展

非洲马瘟(African horse sickness, AHS)是由非洲马瘟病毒(African horse sickness virus, AHSV)引起的一种通过库蜢等昆虫传播的、主要感染马科动物的传染病。我国是世界动物卫生组织认可的非洲马瘟无疫国,随着AHS疫情在东南亚的传播,增大了疫情传入我国的风险。AHSV编码了7种结构蛋白(VP1～VP7),其中VP7是病毒内衣壳蛋白的主要组成部分,在AHSV 9个血清型中高度保守,常作检测的靶标。此外,VP7蛋白的自组装特点对于AHSV亚单位疫苗和病毒样颗粒疫苗(VLP)的研究有基础性作用。对当前AHSV VP7蛋白相关研究进展进行了综述,以期为AHSV检测方法及疫苗等研究提供参考。     

小鹅瘟免疫荧光抗体的制备及检测方法研究

本试验建立有效的小鹅瘟检测方法。通过利用鹅细小病毒免疫实验鹅,提取抗体（IgG）,并利用异硫氰酸荧光素（FITC）染色。利用制备的荧光抗体来对小鹅瘟病例进行直接免疫荧光诊断。经实验,制备出的鹅IgG荧光抗体敏感性较高、特异性较强,并建立较为高效的小鹅瘟直接免疫荧光检测方法。     

基于重组酶介导扩增技术诊断鸭瘟方法的建立

以具有种属特异性的鸭瘟病毒gC基因为靶基因,设计引物和荧光标记探针,使用重组酶介导扩增方法(Recombinase aid amplification assay,RAA),39℃恒温扩增,建立了检测鸭瘟病毒的普通和荧光RAA方法。该方法具有良好特异性,仅对鸭瘟病毒检测结果为阳性,而与番鸭细小病毒、小鹅瘟病毒、禽传染性喉气管炎病毒、马立克氏病毒、鸭源沙门菌、鸭源大肠杆菌O157无交叉反应。普通和荧光RAA方法的灵敏度分别为100 copies/μL和10 copies/μL,对28份留存的鸭瘟阳性组织样本和84份疑似鸭瘟临床样品检测结果表明建立的方法与商业化PCR试剂盒的符合率为100%。结果表明,RAA方法实现常温扩增、操作简单、费用低廉、无需热循环过程,是一项具有广泛前景的方法。