柑橘黄龙病RAA-LFD检测方法的建立

本研究基于柑橘黄龙病菌50S核糖体亚基基因的保守片段设计并合成引物和探针,通过对反应条件的优化,建立了柑橘黄龙病菌RAA-LFD检测方法。该方法可快速高效地完成柑橘黄龙病菌检测,灵敏度可达到10 copies/μL;特异性试验结果显示,除柑橘黄龙病菌基因组呈阳性外,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌、单核细胞增生李斯特菌、支气管败血波氏杆菌、沙门氏菌均为阴性,特异性良好。利用该方法检测102份柑橘叶样本,结果显示,56份样本核酸为阳性,46份样本核酸为阴性;与荧光定量PCR法、RAA荧光法比较,RAA-LFD检测法弱阳的检出率偏低,但是RAA-LFD检测法摆脱了仪器依赖,操作更简便快速,无需电泳检测,避免了核酸扩增产物开盖污染的风险,适用于柑橘黄龙病菌的快速检测,适合在基层使用。     

柑橘黄龙病分子生物学检测方法研究进展

柑橘黄龙病是世界范围内极具破坏性的危险性病害,可防可控但不可治,加强黄龙病早期诊断,探索快速、准确、高灵敏度、高特异性的检测技术对防止该病害的传播蔓延具有极其重要的意义。综述了国内外关于柑橘黄龙病分子生物学检测诊断方面的研究进展,介绍了该领域各检测方法的特点和存在问题,主要介绍了PCR检测技术,提出了大批量黄龙病样品检测适宜选用巢式PCR检测方法。     

柑橘黄龙病检测方法研究进展

黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害,该病在北美、南美、西亚、东亚和南亚的一些国家和地区时有发生,造成巨大的经济损失,严重威胁着世界柑橘产业。柑橘黄龙病的传统检测方法有病害田间诊断、指示作物鉴定、病原显微镜观察、血清学、DNA-DNA杂交和PCR检测等方法。近年来,美国一些科学家把高光谱图像技术应用在柑橘黄龙病检测领域,提高了检测速度,降低了检测成本。综述了国内外关于柑橘黄龙病检测诊断方面的研究进展,介绍了该领域传统检测方法的特点和存在问题以及高光谱图像检测技术的主要特点,着重介绍了高光谱图像技术在黄龙病检测方面的最新应用技术、设备和实例。提出了柑橘黄龙病诊断领域,在实现无损检测的前提下,降低成本、提高检测实时性和诊断速度的发展趋势。     

柑橘黄龙病碘—淀粉法快速检测技术优化

为使一种柑橘黄龙病碘—淀粉法快速检测技术更好地应用于大田检测,以砂糖橘为试验材料,研究无需冷冻和缩短叶片脱色时间的技术.结果表明,磨掉叶片正反面表面蜡质层后,直接脱色,可以省去冷冻处理步骤,且不影响检测结果;检测结果与常规PCR检出结果的一致率为92.5%;同时,叶片脱色时间缩短7.17~8.47 h.优化后,冬季样品叶绿素脱除所需时间均值为5.0 h,其他季节叶片脱色时间均值为3.7 h.     

柑橘黄龙病检测技术研究进展

冠以“柑橘（Ｃｉｔｒｕｓ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃｏ．）癌症”之称的黄龙病暂被认为是由韧皮部难养细菌引起的对柑橘产业造成严重威胁的毁灭性病害,它给柑橘产业的健康发展造成了严重的威胁．鉴于柑橘黄龙病检测技术对柑橘黄龙病防治的重要性,文章对柑橘黄龙病及其病原、黄龙病的检测技术进行了综述,并对柑橘黄龙病的检测技术未来发展进行了展望.     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

柑橘植物组织中富含多糖、酚类、单宁、色素等物质,它们的存在严重干扰了柑橘黄龙病PCR检测的准确性.因此有必要筛选出一种能得到纯度高、结构完整的柑橘总DNA(含黄龙病病原DNA),且操作简便的提取方法.本研究对比试验了3种柑橘总DNA提取方法,方法1采用Sandrine等人的提取法;方法2采用CTAB法;方法3采用试剂盒法.实验研究表明,方法2提取柑橘黄龙病病原DNA的PCR检测准确率最高.     

日本柑橘黄龙病病原体电镜观察及PCR检测

对日本柑橘黄龙病病原体的形态结构进行了电镜观察,结果发现柑橘黄龙病病菌日本株系绝大多数是球形和短椭圆形,极少观察到棒状形态,直径为100～500nm,外被一层胶状物质包围,厚约10～50nm,这与其他地区发现的柑橘黄龙病病原体形态不同．PCR检测表明,以硅藻土法提取的DNA为模板,利用Ready-To-Go^TM PCR bead法可以得到理想结果。     

一种快速鉴定柑橘黄龙病耐性种质材料的方法

【目的】研发一种快速鉴定柑橘黄龙病耐性种质材料的方法,为加快柑橘黄龙病耐性育种进程和提高育种效率打下基础。【方法】以收集的36份疑似对柑橘黄龙病具有耐性的柑橘种质为材料,采用直接高接于感染黄龙病菌柑橘树上的方法(高接染毒鉴定法),通过田间症状观察结合定量PCR检测对试验材料的耐病性进行鉴定评价。【结果】春季高接供试材料1个月后接芽萌发,3个月后(2018年6月5日)首次在KH-14上出现典型的叶片斑驳型黄化症状,4个月后(2018年7月5日)观察有23份种质材料的叶片出现斑驳型黄化症状,另外11份种质材料未表现症状;6个月后(2018年9月4日)观察发现KH-18、KH-12、KHY-4、KHY-5和KHY-6等5份种质材料的生长虽然较正常,但叶片已出现黄化症状,只有KH-21的枝梢生长良好,无黄梢和斑驳型黄化叶,初步判定为对黄龙病具有耐性的种质材料。对6份种质材料的定性PCR检测结果表明,KH-21为阴性,其他5份材料为阳性;实时荧光定量PCR检测结果,KH-21的平均黄龙病菌含量为1870.0个细胞/μg DNA,对照材料平均黄龙病菌含量为372285.5个细胞/μg DNA,表明KH-21对柑橘黄龙病具有耐性。【结论】高接染毒鉴定法鉴定周期在6个月左右,具有通量大、时间短、效率高、成本低及结果准确等优点,能达到快速鉴定柑橘品种对柑橘黄龙病耐性的目的,可在柑橘黄龙病耐性鉴定中推广使用。     

湘南地区柑橘黄龙病的PCR检测

针对近年湘南部分柑橘产区出现叶片黄化、果实畸形及全株矮化、橘树枯死等柑橘黄龙病疑似症状,应用多聚酶链式反应(PCR)技术对湘南8个柑橘产区的柑橘进行了检测,结果发现6个柑橘产区有柑橘黄龙病为害.同时建立了一套快速、准确的柑橘黄龙病PCR检测技术体系.     

应用PCR和测序技术诊断吉安和抚州两地区的柑橘黄龙病

柑橘黄龙病是国内植物检疫对象,明确其地理分布对控制黄龙病扩散具有重要意义.于2008年10～11月赴吉安和抚州可疑黄龙病桔园采集30份病样,其中吉安地区19份,抚州地区11份,采用PCR方法对这30份样品进行柑橘黄龙病菌检测,结果从吉安地区4个病样(遂川县1个、万安县2个、泰和县1个)和阳性对照中扩增到预期的长约700 bp的DNA片段,其他样品和阴性对照中则没有预期的DNA片段产生.选择遂川双桥1号、万安窑头1号和泰和文田4号3个分离物的PCR产物进行纯化、测序,从中各获得一段长为654 nt的序列.经同源性比较发现,这3条DNA序列不仅完全相同,而且它们与已报道的柑橘黄龙病菌亚洲种国内外所有分离物的对应序列的同源性也均为100%,但它们与已报道的柑橘黄龙病菌非洲种核苷酸序列同源性只有79.6%,结果表明上述3个柑橘黄龙病菌分离物均属于亚洲种.柑橘黄龙病菌亚洲种在吉安地区遂川、万安和泰和县存在的发现,希望能引起有关部门足够的重视.     

基于调制荧光检测技术的柑橘黄龙病诊断

【目的】实现柑橘黄龙病的及时诊断,防止病情扩散、保障柑橘生产。【方法】运用基于调制荧光检测技术的超便携式调制叶绿素荧光仪MINI-PAM获取柑橘Citrus reticulata叶片荧光参数,通过概率神经网络对荧光数据进行建模及分类处理,以鉴定并区分健康的、非黄龙病黄化的以及黄龙病的柑橘植株。【结果】该方法对所有类别的诊断准确率均高于76.93%,有些类别分类准确率甚至可达100%。【结论】基于概率神经网络的柑橘黄龙病调制荧光检测技术用于鉴别柑橘黄龙病病情具有一定的可行性和推广性。     

柑橘黄龙病菌 RAA-LDF 方法的建立

本研究基于柑橘黄龙病菌50S核糖体亚基基因的保守片段设计并合成引物和探针,通过对反应条件的优化建立了柑橘黄龙病菌重组酶聚合酶-侧流层析试纸条RAA-LDF检测方法,该方法可用于快速高效完成柑橘黄龙病菌检测,试验结果表明该方法灵敏度可达到100copies/uL,特异性试验结果显示除柑橘黄龙病菌基因组呈阴性外, 大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌、单核细胞增生李斯特菌、 支气管败血波氏杆菌、沙门氏菌均为阴性,特异性良好。利用该方法检测102 份柑橘叶样本,提取核酸后经过 RAA-LDF 检测法,结果显示 53 份样本核酸为阳性,49 份样本核酸为阴性,与PCR,RAA方法比较,弱阳的检出率偏低,但是 RAA-LDF 检测法摆脱仪器依赖,操作更简便快速,无需电泳检测,避免核酸扩增产物开盖污染的风险,适宜于柑橘黄龙病菌的快速检测,适合在基层使用。     

柑橘黄龙病病原培养及分子检测技术研究进展

柑橘黄龙病（Huanglongbing）由韧皮部杆菌属细菌（Candidatus Liberobacter sp.）侵染引起,是柑橘生产上的毁灭性病害,当前正在世界柑橘产区迅速蔓延,已成为制约柑橘产业健康发展的关键因素之一。介绍了柑橘黄龙病的症状以及病原的分离培养研究进展,阐述了病原的分子检测技术,包括PCR、双重PCR、实时荧光定量PCR和LAMP快速检测技术,并对病害的防控进行展望。     

柑橘黄龙病的防治措施

介绍了永春县介福乡柑橘黄龙病的发生情况、症状和防控技术。     

广东梅州柑橘黄龙病和病毒病的发生调查及其黄龙病菌原噬菌体多样性

【目的】调查柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)和病毒病在广东省梅州市柑橘主产区的危害情况,分析该地区柑橘黄龙病菌(CLas)的原噬菌体多样性。【方法】以16S rDNA为模板设计引物,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测梅州市不同抽检地在2017—2019年3年间柑橘黄龙病的发病情况;同时分别采用已报道的柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)、柑橘裂皮病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)、柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDa V)、柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)和柑橘黄脉病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)的特异性检测引物,提取样品的RNA,反转后以样品的c DNA为模板,通过普通PCR的方法分析梅州市抽检地区柑橘病毒病的发生情况。此外,以基于2种原噬菌体类型(SC1和SC2)对应的超变异基因区域设计的2对引物(Lap-TJ-F/Lap-TJ-R1和La...     

丰顺县柑橘黄龙病防控技术推广

柑橘黄龙病是世界柑橘生产上的毁灭性病害,丰顺县积极学习借鉴广西经验,因地制宜探索出本地"以防治田间柑橘木虱为首结合砍伐病树"的防控策略,有效地控制了当地柑橘黄龙病的危害,极大地挽回了农民损失。     

柑橘黄龙病对柑橘产量和品质的影响

通过对不同发病程度黄龙病的柑橘进行单株产量、含糖量(可溶性固形物)和单果果重的测定,并结合柑橘外观的观测,结果表明,柑橘黄龙病不同病情级别均降低柑橘的产量、单果果重、品质和经济价值,但对柑橘的含糖量影响不大。     

黄龙病植株感染对柑橘果实品质的影响

以不感染黄龙病植株的柑橘果实作对照,测定轻感染、中感染、重感染黄龙病植株柑橘果实的单果重、可食率、总糖、总还原糖、总酸、Vc、胡萝卜素等理化和营养指标,探究植株黄龙病感染程度对其果实品质的影响。结果表明:植株黄龙病感染对柑橘果实的单果重、可食率无明显影响,黄龙病感染植株其果实中度感染程度的总糖、蔗糖、还原糖含量有所提高,Vc含量随感染程度加深则降低,且均低于对照;重感染植株柑橘果实胡萝卜素含量明显低于对照,而中感染植株果实总酸含量也明显低于对照。这可能与黄龙病感染影响植株和果实糖代谢有关的酶活性、植株叶果比及其所处位置的受光条件等有关。     

柑橘黄龙病的防治

柑橘黄龙病是危害我国广东、广西、福建柑橘产区的主要病害,在江西南部、云南、四川、浙江等省的局部地区也有发生。     

基于激光诱导击穿光谱的柑橘叶片黄龙病检测

采用激光诱导击穿光谱(LIBS)结合化学计量学的方法对柑橘叶片黄龙病进行定性检测.试验结果显示:柑橘叶片中营养元素P(Ⅱ)、Mn(Ⅰ)、Si(Ⅰ)和Fe(Ⅰ)的LIBS信号强度与柑橘叶片的健康程度有直接关系,其中健康、中度感染黄龙病和重度感染黄龙病的柑橘叶片中P(Ⅱ)、Mn(Ⅰ)、Si(Ⅰ)和Fe(Ⅰ)的特征光谱强度呈...