发酵牛肉火腿中ACE抑制肽的稳定性研究

研究了发酵牛肉火腿中提取的ACE抑制肽的热处理、室温储存和模拟胃肠道消化稳定性。结果表明,发酵牛肉火腿中提取的ACE抑制肽,在50、72、85和100℃下处理5 min和100℃下5、10、20和40 min处理后,处理组和对照组ACE抑制活性无显著差异。在室温下储存2 d,处理组和对照组ACE抑制活性无显著差异(P0.05),但储存至3 d,它的ACE抑制活性显著低于对照组(P0.05),其后储藏时间对提取物的ACE抑制活性无显著影响。ACE抑制肽经体外模拟胃肠道消化后,其活性与对照组无显著差异。     

黑豆ACE抑制肽的分离纯化与稳定性研究

利用大孔吸附树脂DA201-C、超滤和Sephadex G-15凝胶色谱对ACE抑制肽进行分离纯化,并对其稳定性进行研究。结果表明,经过分离纯化后,得到的4个组分均有一定的ACE抑制作用,其中组分ⅢACE抑制率最高为90.78%,其分子量主要集中在145~468 Da;ACE抑制肽具有较好的p H(2~10)、金属离子(Ca2+、K+和Mg2+)和温度(40℃)稳定性,但发现其抗消化稳定性不强,属于底物型ACE抑制肽。该结果可为进一步研究和开发黑豆的ACE抑制肽提供参考。     

醋蛋中ACE抑制肽的分离及其活性保护的研究

ACE抑制肽在体内稳定性的研究对于其功能活性的保护具有重要意义。采用凝胶色谱层析法对经酶解后的醋蛋液进行分离纯化,收集具有较高抑制活性的多肽组分。再将其与卵磷脂结合形成复合物,目的是利用卵磷脂的乳化性保护多肽活性。利用FT-IR、XRD对复合物的结合效果进行验证分析,结果发现卵磷脂与活性肽结合后,活性肽的ACE抑制活性在体外模拟前后相较于未经结合处理得到明显的升高。红外光谱研究发现复合物中活性肽与卵磷脂发生相互作用。通过XRD进一步验证并推断是活性多肽被卵磷脂吸收后以无定形或分子态的形式存在。因此,可认为经过卵磷脂复合的多肽可以很好保留ACE抑制活性且可以降低其被胃肠道酶降解的风险。     

挤压协同酶法制备高粱蛋白ACE抑制肽及其稳定性

【目的】 利用挤压协同酶法制备高粱蛋白ACE抑制肽,为提高高粱蛋白资源的利用效率提供参考。【方法】 以高粱粉为原料,先经挤压处理,再经淀粉酶酶解,最后通过碱性蛋白酶酶解,获得高粱蛋白ACE抑制肽。研究物料水分、挤压温度和淀粉酶活力对高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制活性的影响,并探讨高粱蛋白ACE抑制肽的稳定性。【结果】 随着物料水分含量和挤压温度的增加,挤压过程中单位机械能耗（SME）逐渐降低。在挤压环境下,高粱中淀粉和蛋白质的相互结合变得松散,淀粉-蛋白质包埋体系被破坏;同时高粱中球形蛋白质体被打破,提高所获得高粱蛋白的酶敏感性,在碱性蛋白酶的作用下生成更多具有抑制活性的短肽。挤压过程中物料水分含量和挤压温度以及α-淀粉酶活力对高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制率有显著影响。随着物料水分的增加,蛋白质分子的聚合程度下降,使得高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制率随之增加,当物料水分增加至19%后,挤压过程对蛋白质周围的淀粉分子的破坏作用降低,水解度和ACE抑制率的上升趋势趋于平缓;当挤压温度从120℃增加至180℃时,高粱内部的蛋白质-淀粉包埋体系破坏加剧,同时蛋白质的空间结构在高温作用下的变性程度加大,高粱蛋白酶解液的水解度由7.42%增加至11.06%,同时高粱蛋白ACE抑制肽的抑制率也由46.57%增加至53.41%;挤压后高粱粉经α-淀粉酶处理,进一步去除包裹在蛋白质周围的淀粉,发现随着α-淀粉酶活力的增加,高粱内部的蛋白质-淀粉包埋体系破坏程度加剧,为制备高粱蛋白ACE抑制肽提供更多原料,导致高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制率随之增加,当α-淀粉酶活力增加至2.0 U·g ^-1时,淀粉酶与淀粉结合达到饱和状态,水解度和ACE抑制率趋于稳定。高粱蛋白ACE抑制肽经温度和酸碱处理后,ACE抑制活性在68.1%—71.31%,保持了良好的抑制活性;高粱蛋白ACE抑制肽在体外经胃肠道酶系消化酶解后,ACE抑制活性均高于73%,依然保持了较强的ACE抑制活性,说明挤压协同酶法制备的高粱蛋白ACE抑制肽具有长期保存有效性,同时能够在胃肠道消化后保持生物活性。 【结论】 采用挤压协同酶法可以显著提高高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制肽的活性,同时制备的高粱蛋白ACE抑制肽具有良好的稳定性,为拓宽高粱的利用和制备功能性食品配料提供了一条新途径。     

昆仑雪菊中血管紧张素转化酶活性抑制成分的分离鉴定

[目的]从昆仑雪菊中分离纯化抑制血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)活性成分,鉴定其化学结构,并评价其对ACE的抑制活性.[方法]以抑制ACE活性为指标,筛选出最佳的昆仑雪菊萃取溶剂,提取得到粗提物,活性跟踪分离纯化粗提物中的单体化合物,并对单体化合物的活性进行评价.[结果]最佳的提取溶剂为甲醇,利用常压硅胶柱层析和Sephedex LH-20柱层析从粗提物中分离得到5个单体化合物,采用核磁共振(NMR)和电喷雾质谱(ESIMS)鉴定其化学结构:化合物1为咖啡酸甲酯;化合物2为脱镁叶绿素a;化合物3为β-香树脂;化合物4为异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷;化合物5为对香豆酸甲酯.活性测试结果表明:化合物1、4和5都表现出了较强的抑制ACE活性,其中化合物4对ACE的抑制活性最强,IC50为(167.02±4.32) μmol·L-1,其次为化合物1和5,IC50分别为(237.74±5.82) μmol·L-1和(331.57±4.69) μmol ·L-1,提示这些化合物可能为昆仑雪菊中潜在的降血压物质.[结论]本研究结果为深入研究昆仑雪菊的降血压作用机制提供了物质基础.     

植物源ACE抑制肽研究进展

目前治疗高血压药物均存在一定副作用,而植物源ACE抑制肽成本低、资源丰富、安全性好等优点,成为研究关注的焦点.该文综述了植物源ACE抑制肽作用机制、制备方法、活性评价方法和国内外最新研究进展,旨在为植物源ACE抑制肽的进一步开发和利用提供参考.     

儿茶素EGCG对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用研究

试验对Caco-2细胞膜上蔗糖酶和麦芽糖酶这两种α-葡萄糖苷酶活性进行不同培养时间检测,并以儿茶素单体EGCG作为抑制剂,探究其对Caco-2来源的蔗糖酶和麦芽糖酶的抑制效果。结果表明,Caco-2细胞培养18 d后膜表面具有较高活性的蔗糖酶和麦芽糖酶,可用于进行α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选。儿茶素EGCG具有蔗糖酶和麦芽糖酶抑制活性,抑制IC50分别为31.08μg/m L和36.44μg/m L。     

改进的分光光度计法测定食源性多肽血管紧张素转化酶的抑制活性

在传统检测食源性多肽血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽体外活性方法的基础上,结合纸层析测定马尿酸的方法对其进行改进,建立了一种新的分光光度法用于测定样品中ACE的抑制活性.结果表明:该方法确定的显色反应吸收波长为459 nm;最佳显色温度为40℃;最佳显色时间为30 min;最佳显色剂质量分数为0.5%;用卡托普利和有ACE抑制活性的棉籽蛋白肽作为样品进行检测验证,结果表明,此方法简便、灵敏、准确、重复性好,可用于筛选食源性ACE抑制肽.     

重组人乳铁蛋白对原代肝、肾细胞的毒性研究

[目的]通过模拟肝、肾毒性的体外细胞试验,研究重组人乳铁蛋白是否对小鼠原代肝肾细胞具有毒性作用,为其进一步的安全性评价提供依据。[方法]采用模拟体外消化试验所得的重组人乳铁蛋白消化产物及重组人乳铁蛋白为受试物,牛乳铁蛋白为对照,以小鼠原代肝、肾细胞为平台,用MTT法检测受试物对细胞活性的半数抑制浓度（IC50）,研究细胞毒性剂量-反应关系。[结果]在设定的试验条件下,未发现重组人乳铁蛋白对肝肾细胞存在靶毒性,结果能与已进行的亚慢性毒性试验相互印证。[结论]为对重组人乳铁蛋白的进一步安全性评价及其他转基因食品的安全性评价方法提供了参考。     

可用于功能性成分研究的Caco-2细胞中空纤维反应器的构建

为了构建一种新型的Caco-2细胞中空纤维膜反应器,探究该模型应用于研究功能性成分吸收转运的可行性,利用体外细胞培养技术,将Caco-2细胞接种于聚醚砜(polyethersulfone,PES)和聚偏氟乙烯(polyvinylidenefluoride,PVDF)中空纤维膜上,与经典的Transwell单层培养模型进行比较,探讨不同材料对细胞模型的影响;同时,利用光学显微镜和扫描电镜观察细胞形态学特点,通过细胞功能表征方法,包括用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法绘制细胞生长曲线,荧光免疫染色观察验证细胞单层的完整性和通透性,测定细胞的碱性磷酸酶和谷氨酰转肽酶活性来验证细胞的刷状缘酶系活性,从而对Caco-2细胞在3维中空纤维反应器与2维模型中的增殖分化状况进行对比和评价.细胞形态学观察结果表明:Caco-2细胞于接种10d后铺展良好,轮廓清晰,逐渐融合形成细胞单层和完整的紧密连接;刷状缘酶系活性检测表明:Caco-2细胞于接种后8~14d内完成功能分化并且活性水平高于在Transwell模型上培养的细胞.因此,聚醚砜和聚偏氟乙烯中空纤维膜能有效促进细胞增殖,缩短细胞分化周期,从而形成高效稳定的3维细胞模型;同时,中空纤维膜Caco-2细胞3维反应器已经具备甚至高于传统的Transwell单层模型所具有的功能.     

牛磺酸对预防大鼠发生高血压的影响

通过检测补充不同水平牛磺酸和β-丙氨酸(牛磺酸转运抑制剂)大鼠血液中血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ATⅡ)含量和血管紧张素转换酶(angiotensinconvertingenzyme,ACE)活性及一氧化氮含量,探讨牛磺酸对高血压发生的预防作用。试验结果证明补充牛磺酸可使大鼠血中ATⅡ含量、ACE活性降低(P<0.05)和提高了NO的含量(P<0.01)。     

乳酪蛋白源抗高血压活性肽的制备及其生理活性

本文研究乳酪蛋白源抗高血压活性肽(Antihypertensive peptides of casein)的制备及其在体内与体外对高血压的影响.乳源酪蛋白酶解产物经过大孔树脂DA201C脱盐处理,并采用RP-HPLC的分离纯化,检测了脱盐酶解产物与活性肽产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性,并用活性肽产品与酶解物灌胃SHR,观察SHR血压的影响.结果显示,活性肽(02mg·mL-1)与酶解产物(1 mg·mL-1)对ACE的活性有很强的抑制作用,抑制率分别为75.5%、80.1%;活性肽(5 mg·kg-1)与酶解产物(500mg·kg-1)均对自发性高血压大鼠(SHR)有较显著的降血压作用.     

鲢头酶解物对ACE的抑制活性

通过测定鲢Hypophthalmichthys molitrix头酶解物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率(I),确定了蛋白酶酶解鲢头制取ACE抑制肽(ACEI)的酶种及其最佳酶解工艺条件,并用Sephadex G-15凝胶柱对酶解物进行分离,测定酶解物中ACE抑制肽的相对分子质量分布。结果表明：在胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和复合风味蛋白酶5种酶中,胃蛋白酶为酶解鲢头制备ACE抑制肽的理想蛋白酶;其最佳酶解工艺条件为温度37℃、pH2．0、酶解时间3h、酶的质量分数为1．4％、底物浓度ω(原料)：ω(水)=1：3,在该条件下得到的酶解物对ACE的抑制活性最强,其I=83．58％;在最佳酶解工艺条件下得到的酶解物经层析分离,在最大洗脱峰处得到的ACE抑制肽抑制活性最高,其I=86．72％,相对分子质量为1096。     

小肽转运载体(PepT1)及其活性的调控

近来发现蛋白质的消化产物在动物肠道内有相当一部分是以小肽的形式吸收和利用。克隆和分析两个结构相似的小肽转运载体 (Pep T1和 Pep T2 )揭示了哺乳动物和禽类的小肽转运机制。这些小肽转运载体识别二肽和三肽 ,其活性受日粮蛋白质水平和各种激素的调控。目前对人、猪、鸡、大鼠、小鼠、兔子、绵羊等的 Pep T1的基因结构和蛋白质结构已有了系统的认识。就其生理特性、分布、基因和蛋白质的结构和日粮及各种因子对其活性调控等进行综述     

重组人乳铁蛋白对原代肝·肾细胞的毒性研究

[目的]通过模拟肝、肾毒性的体外细胞试验,研究重组人乳铁蛋白是否对小鼠原代肝肾细胞具有毒性作用,为其进一步的安全性评价提供依据。[方法]采用模拟体外消化试验所得的重组人乳铁蛋白消化产物及重组人乳铁蛋白为受试物,牛乳铁蛋白为对照,以小鼠原代肝、肾细胞为平台,用MTT法检测受试物对细胞活性的半数抑制浓度（IC50）,研究细胞毒性剂量一反应关系。[结果]在设定的试验条件下,未发现重组人乳铁蛋白对肝、肾细胞存在靶毒性,结果能与已进行的亚慢性毒性试验相互印证。[结论]为重组人乳铁蛋白的进一步安全性评价及其他转基因食品的安全性评价方法提供了参考。     

荞麦降血压肽的结构、功能及作用机理

植物源降血压多肽能通过抑制血管紧张素I转换酶(ACE)的活性调节肾素-血管紧张素系统(RAS)的生理功能达到降血压的效果。本文综述了荞麦蛋白酶解产物中降血压肽的结构、功能及作用机制。     

食用菌ACE抑制肽制备及其功能活性研究进展

高血压疾病严重危害人类健康,ACE抑制肽易被人体吸收且降血压效果好,现正逐渐应用于该类疾病的调控。我国食用菌资源丰富、种植量大,其中提取得到的ACE抑制肽毒副作用小、安全性高,现已成为重要研究热点领域。本研究从食用菌ACE抑制肽的作用机制、提取与分离鉴定、活性检测以及构效关系等方面进行综述,以期为进一步开展研究奠定基础。     

抗高血压活性肽GAP-B的结构及生理功能

本文研究新型乳酪蛋白源抗高血压活性肽GAP—B的分子量与一级结构,并检测其对体内外降血压效果。研究过程采用高效液相与质谱联用、基质辅助激光解吸离子化一飞行时间串联质谱和N端蛋白质序列检测仪等实验方法检测活性肽GAP—B的分子量与氨基酸序列;检测了活性肽产物GAP—B对血管紧张素转化酶（ACE）的抑制活性,并用活性肽GAP—B灌胃自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）和SD大鼠,观察对SHR和sD大鼠血压的影响。结果显示：抗高血压活性肽GAP—B分子量为M1,氨基酸序列为A1-A2;GAP—B在体外对ACE有很强的抑制活性,抑制率为84.4％;GAP—B对SHR有显著的降血压作用,而对血压正常的SD大鼠的血压没有影响。     

羧肽酶A/B水解虾副产物制备ACE抑制肽

为了获得血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,使用α-胰凝乳蛋白酶对虾副产物进行预酶解,再选择羧肽酶A/B进行酶解,通过透析和凝胶层析纯化后,测定分离肽的ACE抑制活性。通过检测水解度,确定α-胰凝乳蛋白酶的最优水解时间为4h,羧肽酶A/B最优水解时间为6h。两步酶解产物的ACE半抑制浓度(IC50)值为6.39mg/mL。通过透析,得到500Da和500~1 000Da 2个抑制活性更高的组分,IC50分别为1.69和2.87mg/mL。进一步通过Sephadex G-15凝胶层析分离,得到4个IC50值小于0.2mg/mL的组分,其中组分F8最低,为0.134mg/mL,显示了较高的ACE抑制活性。该结果验证了羧肽酶A/B酶解可制备出高活性ACE抑制肽。     

乳铁蛋白肽的作用机制及其转基因研究进展

近年来抗菌肽由于自身的优点已成为抗生素的替代品,并已成为研究与开发的热点 ,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)就是其中的一种,它是乳铁蛋白(LF)经胃蛋白酶在酸性条件下降解所产生的小肽,它构成了完整乳铁蛋白主要功能区的大部分,当它被降解下来后不仅仅保持了原来完整乳铁蛋白的活性甚至比原来完整乳铁蛋白的活性更强,因其具有广谱的抗细菌、抗病毒、抗真菌等多种独特的生物学活性而备受关注.对其结构、作用及作用机制、转基因研究这几方面的最新国内外研究动态进行综述.