猪伪狂犬病病毒gE基因缺失苗免疫试验

为了掌握猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗免疫效果,并制定合理的免疫程序,选用国产和进口的猪伪狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗,用4种不同的免疫程序,对250头母猪和1000头仔猪进行了免疫试验。试验期间,按比例定时采集免疫猪的血液,用ELISA试剂盒进行抗体检测,证明猪伪狂犬gE基因缺失疫苗,无论国产苗或进口苗都可以产生良好的免疫效果;无论跟胎免疫、1年2次普免,每隔4个月定时免疫,效果均良好。种猪免疫抗体合格率达100%,仔猪49日龄前抗体合格率达100%,75日龄后抗体逐渐降低,120日龄后基本消失。为了使猪体免疫力更强,不给野毒入侵的机会,建议仔猪在首免后,适当时间进行二次加强免疫。而只给公猪、母猪春秋两季免疫,不给仔猪免疫组,仔猪在35日龄后抗体降为阴性,不能抵抗野毒的侵袭,这种免疫方法不宜推广。     

国产与进口猪伪狂犬病gE基因缺失苗免疫对比试验

为比较国产与进口猪伪狂犬病娅基因缺失疫苗免疫效果,并制定合理的免疫程序,笔者选用国产和进口的猪伪狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗,用3种不同的免疫程序,对240头母猪和1200头仔猪进行免疫试验。试验期间,定时随机采集免疫猪的血液,用ELISA试剂盒进行抗体检测。结果表明,母猪和仔猪无论免疫国产或进口猪伪狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗,免疫效果均良好。母猪免疫抗体合格率达100％,仔猪49日龄前免疫抗体合格率达100％,免疫效果差异不显著。但免疫猪群在75日龄后抗体逐渐降低,120日龄后基本消失。为维持猪体免疫力,不给野毒入侵的机会,建议仔猪首免后,在适当时间进行二次加强免疫。     

猪伪狂犬病gE基因的研究进展

猪的伪狂病是猪的重要疾病之一。近年来，随着分子生物学的研究深入，对伪狂犬病病毒的研究也取得了显著的进展，本文着重对毒力基因gE基因的特性，基因的结构特点，在基因工程疫苗中的重要性以及在根除计划中的作用作了较详细的综述。     

伪狂犬基因缺失疫苗滴鼻免疫对商品猪群gE抗体的影响

伪狂犬病是严重危害规模化养猪的重要疾病之一。猪只一旦感染伪狂犬病毒,将会终身带毒,成为猪场的隐患。通过本次试验可以发现,如果使用合适的疫苗,并按照正确的操作方法,滴鼻免疫伪狂犬gE基因缺失疫苗,可以有效阻止野毒对商品猪群的感染,降低商品猪群的野毒阳性率。     

伪狂犬病基因缺失疫苗研究进展

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的家畜及野生动物的急性传染病,其特征为发热、奇痒及脑脊髓炎。本病广泛分布于世界各国。近年来,猪、牛及绵羊发生本病逐年增加,我国不少省区也有本病发生,尤其是猪的发病有扩大蔓延趋势。 许多西方发达国家早在20世纪80年代就制定和启动了猪伪狂犬病的根除计划,并通过广泛使用基因缺     

猪伪狂犬病病毒gE基因的研究进展

猪伪狂犬病是猪的重要疾病之一。近年来 ,随着分子生物学研究的深入 ,对伪狂犬病病毒的研究也取得了显著的进展。本文着重对毒力基因gE基因的特性 ,基因的结构特点 ,在基因工程疫苗中的重要性以及在根除计划中的作用做了较详细的综述     

猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗免疫效果试验探究

猪伪狂犬基因缺失疫苗免疫可以与自然感染相区分,可以结合相应的鉴别诊断方法,进行猪伪狂犬净化计划,达到较理想的结果。近年来,一些国家已经推广应用基因缺失疫苗来免疫猪群。笔者使用酶联免疫吸附试验和中和抗体试验对引种猪群伪狂犬抗体水平进行检测和分析,作为猪场使用伪狂疫苗的理论依据,对猪场猪伪狂犬病抗体水平和野毒感染情况进行评估,从而来验证猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗C株在用于我国防治和根除猪伪狂犬病的适用性。     

猪伪狂犬病病毒gE基因核酸探针的制备

伪狂犬病（pseudorabies,PR）又称Aujeszky氏病,是由伪狂犬病病毒引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽及野生动物的一种以发热、奇痒（猪一般除外）、呼吸和神经系统疾病为特征的重要传染病。控制和消灭伪狂犬病所面临的主要困难是伪狂犬病病毒的潜伏感染问题。目前,OIE推荐使用基因缺失疫苗,我国农业部已决定只生产和使用基因缺失疫苗。已有的商业化基因缺失疫苗普遍缺失了啦基因。随着基因缺失疫苗的广泛使用,迫切需要一种有效的检测强毒及其潜伏感染的诊断方法与之配套,因此进行了利用缺失的gE基因制备核酸探针的研究。     

闽西地区猪伪狂犬病病毒变异株gE基因新变异序列鉴定

为了解2013-2014年我国闽西地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,收集闽西不同地区的15株PRV分离株,并对其g E基因进行遗传变异分析。结果表明,15株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的14株PRV变异株核苷酸及氨基酸序列的同源性较高,分别为98.7%~99.9%和97.1%~99.8%;而与15株PRV经典株的核苷酸及氨基酸序列的同源性相对较低,分别为97.0%~99.6%和94.6%~99.3%。氨基酸多序列比对发现,g E氨基酸序列最具特征性的变化是第48位和第496位各有1个天冬氨酸(D)的插入,该插入特征为PRV变异毒株的重要标志。同时,抗原性分析发现这2个位点还位于g E蛋白的抗原表位区内。遗传进化树分析结果表明,15株PRV分离株与近3年国内不同省份分离的PRV株位于一个相对独立的分支中,而与经典毒株处于不同的分支中,亲缘关系相对较远。以上结果表明PRV变异毒株已成为我国闽西地区主要的流行毒株。     

伪狂犬病病毒的囊膜糖蛋白gE的研究进展

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽及野生动物的一种重要的急性传染病,又称Aujeszky氏病[1,2].PRV属于疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科(Alphaherpesviridae of Alphaviridae)的猪疱疹病毒I(Suid herpesvirusI) [1].     

猪伪狂犬病毒H株gE基因的克隆及序列分析

参照已发表的扩增伪狂犬病毒gI和gE部分基因的PCR方法,合成了一对引物,以PRV H株细胞毒为模板,扩增出一条约850 bp的片段,并进行克隆和测序。然后与GenBank上国内外其它毒株gE基因进行核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性分析,构建了遗传进化关系图。结果表明,PRV H株与其他15株PRV核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.0%~99.2%和93.2%~98.5%,其中与SH株最近,分别为99.2%和98.5%;进化树分析表明,该毒株与目前国内流行的毒株在同一进化分支内,与国外毒株分属不同分支,说明分离的H毒株与目前国内流行的毒株一致。     

伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定

根据已经发表的伪狂犬病病毒（PRV）Rice株的gE基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号肽以外的全部编码区段,并克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌XL1-blue菌株,重组质粒pMD18-T-FL经酶切和PCR鉴定证实后,进行了序列测定。结果表明,重组质粒pMD18-T-FL含有PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号除信号肽以外的全部编码区段,长1674bp。序列比较分析表明,此区段与PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为97．5％,氨基酸序列同源性为94．8％。     

伪狂犬病病毒广西B、W株gE基因的扩增、克隆及序列分析

在已鉴定了的伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus，PRV）11种糖蛋白中，gE是其中十分重要的一种非必需糖蛋白，是伪狂犬病病毒重要的毒力基因，它在介导感染细胞的融合，病毒在细胞间的扩散，病毒粒子的释放等方面均起着十分重要的作用，尤其是在影响伪狂犬病病毒神经嗜性和毒力方面的作用。利用PRV gE基因缺失疫苗，结合血清学方法可以区分疫苗接种猪和野毒感染猪。     

Cloning and Sequence Analysis of gE and gI Genes of Pseudorabies Virus NP Isolate

According to published gE and gI gene sequences of pseudorabies virus (PRV) in GenBank, we designed two pairs of primers for PCR amplification of gE and gI genes of PRV NP isolate, after PCR products recycling, cloning and sequencing, the sequencing results were consistent with expectations of PRV gE and gI genes.Homology comparison analysis results revealed that compared with the domestic PRV strains, the homologies of gE and gI amino acids of PRV NP isolate were 95.7% to 99.8% and 89.9% to 99.5%, respectively.Phyogenetic tree analysis and amino acid sequence alignment results found that the gE amino acid sequence site changes of PRV NP isolate were the same with the PRV strains which were isolated from domestic in 2012, thus we could speculate that PRV NP isolate had mutanted.This study had laid the foundation for the epidemiological investigation and analysis of PRV, also provided the scientific basis for the development of scientific, effective and new pseudorabies vaccine.     

猪伪狂犬病病毒GXBB株的分离鉴定及gE基因的克隆分析

从广西玉林博白某猪场采集的发病仔猪大脑和内脏病料中分离到一株病毒。病毒接种家兔后引起典型的奇痒、神经症状,接种PK-15细胞出现典型的细胞病变,病毒效价（TCID₅₀）为10^-7.22/0.1 ml。设计扩增PRV gE胞外区基因的引物,能扩增出约947 bp的特异性片段,将扩增出的目的片段进行克隆、测序,并与国内外不同PRV毒株进行分析比较,发现该毒株与国内MinA株、Ea株、SH株、LA株、GXB株、GXW株核苷酸同源性在98.7%～99.4%之间,氨基酸同源性在98.1%～99.1%之间,上述结果证实该分离毒株为伪狂犬病病毒,命名为GXBB株。GXBB株与国内流行毒株同源性很高,说明目前广西PRV流行株变异不大。这为下一步广西伪狂犬病的预防和净化工作提供科学的理论基础。     

猪伪狂犬病病毒NP株gE、gI基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV) gE、gI基因的序列设计了2对引物,对PRV NP株的gE、gI基因进行了PCR扩增、回收、克隆、测序,测序结果与预期的PRV gE、gI基因片段相符。同源性比对分析结果显示,PRV NP株gE、gI基因推导的氨基酸序列与国内分离的PRV毒株的同源性分别为95.7%~99.8%、89.9%~99.5%。遗传进化树分析和氨基酸序列比对结果发现PRV NP株的gE氨基酸序列发生变化的位点与2012年国内分离到的PRV流行株相同,从而推测NP株为PRV变异毒株,本研究为PRV的流行病学调查分析奠定了基础,也为开发科学、有效的新型猪伪狂犬病(PR)疫苗提供科学依据。     

伪狂犬病基因缺失疫苗的研究进展

文章就伪狂犬病主要的毒力基因,以及不同的基因缺失苗的特性进行了综述,并对今后的发展进行了展望。     

伪狂犬病病毒FS-2015株gE和gB基因序列分析

为了解猪伪狂犬病病毒（porcine pesudorabies virus,PRV）gB和gE基因变异及遗传演化情况,本研究针对PRV FS-2015野毒株,应用"蚀斑法"对组织病料中病毒进行三轮纯化,应用全长扩增引物对FS-2015株gB和gE基因进行全基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示,PRV FS-2015株的gB、gE基因与国内外PRV参考毒株的核苷酸同源性分别为97.0%~100.0%和97.5%~99.7%,氨基酸同源性分别为96.4%~100.0%和95.3%~99.7%。氨基酸变异位点分析表明,FS-2015株的gB和gE基因均有位点突变和缺失。遗传进化分析表明,FS-2015株与国内近几年分离的PRV变异株GY、ZJ01、HB1201、HN1201、JS2012、BJ-YT和BP属于同一分支,同源性较高,亲缘关系较近;与PRV经典株Kaplan、Becker、NIA3、Kolchis、Bartha和Yangsan株属于不同分支,同源性较低,亲缘关系较远。从PRV FS-2015毒株与国内外经典毒株和当前国内流行的变异毒株的分析结果可知,PRV FS-2015毒株发生了一定的变异,属于当前国内流行变异毒株。本研究结果为广东省伪狂犬病分子流行病学调查、伪狂犬病的防控和疫苗株挑选工作提供参考数据。     

Isolation and Identification of Variant HeNZK-2014 of Pseudorabies Virus and Sequence Analysis of gE Gene

In order to learn the situation of pig pseudorabies virus (PRV) variant in this study, tissue samples such as lymph nodes which were collected from clinical pigs with suspected PRV infection were identified by PCR. PRV positive sample were inoculated on PK-15 cells after grinding and degerming, with further experiment including virus isolation, plague purification, PCR and IFA identification, TCID₅₀ confirmed by Reed-Muench method, inoculation test and observation of clinical symptoms in mice. The gE gene of purified PRV and brain tissue samples of dead mice were identified by sequencing analysis. The results showed that the virus grown on PK-15 cells could produce typical cytopathic effect (CPE) after 24 h; After three rounds of plaque purification,the isolate was PRV positive identified by PCR and IFA, and nominated as HeNZK-2014; The TCID₅₀ of the isolate was 10^-9.77/0.1 mL; The virus in 1×10⁸ TCID₅₀ inoculation was able to cause itching, tearing, death in infected mice, and PRV could be detected in tissues of dead mice; The molecular genetic variation analysis of gE gene by PCR amplification and clone sequencing indicated that the gE gene from brain tissue of infected mice shared 100.0% homology with HeNZK-2014, and located in a relatively independent branch with newly pandemic isolates in recent years after 2011, but was far from the classical strains before 2011, and both had two insertion of aspartic acid (D) at sites of 48 and 496 amino acids, which were considered to be the typical characteristics of PRV variants. This study successfully isolated a PRV variant, which laid a foundation for further research on vaccine development, prevention and control against PRV variants.