生长抑素(SS)基因在pET-32表达系统中的高效表达

分别将SS基因克隆至pET 32a和pET 32c表达系统中 ,得到重组质粒SS N/X和SS N/S。实验结果表明 ,SS N/X Thioredoxin (硫氧还原蛋白 )和SS N/S Thioredoxin融合蛋白在IPTG (异丙基硫代 β D半乳糖苷 )诱导 3h后(37℃ )表达产量最高 ,约占菌体总蛋白的 30 %左右。 0 0 5～ 1mmol·L-1IPTG对SS融合蛋白表达产量的影响并不太大 ,0 0 5mmol·L-1IPTG即可达到有效的诱导效果 ,但单位体积内的表达产量以 0 5mmol·L-1时为最高。乳糖诱导 4h(37℃ )的效果明显低于IPTG ,但当培养时间延长至 8h时 ,2 0mg·mL-1的乳糖可达到与IPTG同样的诱导效果 ,10和 5mg·mL-1的乳糖也可接近IPTG的诱导效果。SS N/X融合蛋白在 2 6℃表达时 ,主要以可溶性形式存在 ,占75 8% ,包涵体仅占 2 4 2 % ;而SS N/S融合蛋白则主要以包涵体形式存在 ,占 6 0 2 % ,可溶性蛋白仅占 39 8%。SS可溶性融合蛋白具有良好的SS抗原性。     

延边奶山羊-绵羊体细胞重构胚融合条件的研究

采用延边奶山羊耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,绵羊卵母细胞为核移植受体,构建了山羊-绵羊异质重构胚,探讨了不同融合电场强度、脉冲次数对重构胚融合率及重构胚体外发育率的影响.结果表明,融合电场强度为1 200～1 400 V/cm、融合脉冲次数为2次,是延边奶山羊-绵羊体细胞克隆的适宜融合条件.     

离子注入在高粱育种上的应用研究初报

以 30keV氮离子辐射高粱种子 ,M1成苗率有所降低。M1出现不同类型变异 ,变异率为6 .8%。变异性状在M3 趋于稳定。从稳定株系中选出一批变异材料 ,同时选出高频率无融合生殖系N+ SSA - 1。自主结实率比CK(SSA - 1)提高 87.8%。     

利用成年母兔耳部皮肤上皮细胞生产克隆胚胎的研究

以成年母兔耳部皮肤上皮细胞为核供体,对家兔体细胞核移植技术中融合、激活以及不同来源受体卵母细胞的选择等环节进行了研究,比较了不同电场强度对重构胚胎融合率、分裂率的影响。结果表明,200V/mm电场强度时重构胚胎的融合率(82.53%)显著高于160V/mm(59.73%),但与240V/mm(79.56%)无显著差异;200V/mm时重构胚胎的分裂率(71.43%)显著高于160V/mm(49.43%)和240V/mm(57.80%)。来源于输卵管卵母细胞组成的重构胚胎的融合率(84.71%)和裂解数与来源于卵巢大卵泡(78.75%)的无显著差异;但来源于输卵管的重构胚胎分裂率(73.68%)显著高于来源于卵巢大卵泡的(56.35%)。将646枚2~4细胞期重构胚移植到38只同期化及非同期化的受体后无幼仔出生。     

延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究

以体外成熟培养22-24h的延边黄牛卵母细胞作为受体,颗粒细胞为供核细胞,挤压法去核,注入供体颗粒细胞到卵黄周隙中,甘露醇融合液中施加20μs时长的电脉冲刺激使之融合,复合化学方法激活,从融合前恢复培养时间、融合电场强度、甘露醇浓度等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜融合条件．结果表明,2．5h处理组的融合率（70．9％）显著高于4．0h处理组（58．2％,P〈0．05）,2．5h处理组重组胚的卵裂率（77．9％）显著高于其它4组（P〈O．05）,其它各组间差异不显著（P〉0．05）;融合电场强度1100V／cm处理组的融合率（86．4％）显著高于900V／cm处理组（67．1％）和1200V／cm处理组（75．2％,P〈O．05）,重组胚的卵裂率（84．6％）显著高于900V／cm处理组（69．6％,P〈O．05）,囊胚发育率（26．1％）显著高于900V／cm处理组（10．0％）,1200V／cm处理组（8．0％,P〈O．05）;不同浓度的甘露醇对融合率和重组胚的卵裂率没有明显的影响,但是0．28mol／L组囊胚发育率（25．3％）显著高于0．25mol／L组（15．3％,P〈0．05）．因此,适合延边黄牛体细胞克隆的融合条件为融合前恢复培养2．5h,0．28mol／L甘露醇作为融合液,电场强度1100V／cm．     

利用细胞电融合技术选育的融合子的解磷解钾性能

采用以磷矿粉、钾长石为唯一磷、钾营养的培养基接种固氮菌 (N1 1 ,K1 0 - 2 )、磷钾细菌(N1 7,K1 6)及它们的融合子 (N1 1 -N1 7,K1 0 - 2 -K1 6) ,于 2 8℃恒温振荡培养 2d后 ,测其上清液中磷、钾含量。结果表明 ,融合子N1 1 -N1 7的解磷能力和融合子K1 0 - 2 -K1 6的解钾能力较相应亲本菌株有明显的提高。由利用细胞电融合技术选育的融合子所形成的新菌株组合 ,其解磷解钾的效能可大幅增强。     

氮梯度加载下闽楠幼苗生长与叶绿素荧光变化

为了解氮梯度加载对闽楠幼苗生长及叶绿素荧光特性的影响,对2年生闽楠幼苗进行模拟试验。在7个氮水平:N0(0 g·m~(-2)·a~(-1)1)、N1(5 g·m~(-2)·a~(-1)1)、N2(10 g·m~(-2)·a~(-1)1)、N3(15 g·m~(-2)·a~(-1)1)、N4(20 g·m~(-2)·a~(-1))、N5(25 g·m~(-2)·a~(-1)1)、N6(30 g·m~(-2)·a~(-1)1)培养6个月后,测定闽楠幼苗的生长指标和叶绿素荧光参数变化。结果表明:随着氮浓度增加,闽楠幼苗苗高、地径和全株生物量均呈现增→减→增的变化规律,苗高在N1时达到峰值(142.41 cm)、地径和全株生物量在N2时达到峰值(15.31 mm、192.22 g),较对照处理分别提高48.33%、28.55%、114.58%;不同氮梯度加载处理一定程度促进了闽楠幼苗叶片叶绿素总量的增长,其中N2、N3组幼苗叶绿素总量显著高于N0(P<0.05),而N6组幼苗叶绿素总量值显著低于N0(P<0.05);随氮强度增加,闽楠的最大光化学效率(F_v/F_m)、潜在光化学活性(F_v/F_o)、实际光化学效率(Yield)呈现增→减→增的变化趋势,而光化学猝灭系数(q_P)、非光化学猝灭系数(qN)呈现减→增→减的变化趋势,从叶绿素荧光参数的角度出发,N3～N4为最佳施氮浓度区间,适当增加供氮水平可显著提高闽楠幼苗的光合效率。     

牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养

1997- 12～ 2 0 0 1- 0 8共进行了 97批牛卵母细胞体外成熟试验 ,总成熟率为 70 .75 % (35 6 1/ 5 0 33)。其中培养液为 TCM199+0 .12 g/ L 丙酮酸钠 +10 mm ol/ L Hepes+体积分数 8% NCS+10 mg/ L FSH+10 mg/ LL H+1mg/ L E2 (培养液 1组 )组进行 5 0批试验 ,成熟率为 6 5 .75 % (14 15 / 2 15 2 )。培养液 1组有 5批次未添加 Hep-es 盐 ,其成熟率为 75 .2 1% (88/ 117) ;另 4 5批次添加 Hepes盐 ,成熟率为 6 5 .2 1% (132 7/ 2 0 35 )。培养液为TCM199+体积分数 8%发情牛血清 +0 .12 g/ L 丙酮酸 (培养液 2组 )组进行 4 7批次试验 ,成熟率为 74 .4 9%(2 14 6 / 2 881)。培养液 2组中有 9批次添加了 4 0 m g/ L 的庆大霉素 ,其成熟率为 72 .15 % (342 / 4 74 ) ;另 38批次未添加庆大霉素 ,其成熟率为 74 .95 % (180 4 / 2 4 0 7)。试验同时表明 ,激素来源对卵母细胞成熟率无显著影响     

“早籼晚粳”双季机插周年氮肥高效运筹研究

以"早籼晚粳"(早稻"两优287",晚稻"鄂粳403")种植模式为研究对象,设置了6组氮肥组合,包括早稻3组(基肥∶分蘖肥∶穗肥分别为N1/N2(6∶4∶0)、N3/N4(6∶3∶1)和N5/N6(5∶3∶2))、晚稻2组(基肥∶分蘖肥∶穗肥分别为N1/N3/N5(5∶3∶2)、N2/N4/N6(5∶2∶3)及不施氮肥处理(对照,CK,N0),考察双季的分蘖动态变化、叶面积指数(LAI)和SPAD值、关键生育期干物质积累量、产量和产量构成、氮肥利用率等指标。结果显示:早稻氮素施用后移显著提高成穗率,N5/N6的成穗率达到95.5%,晚稻以N3处理有效穗最高;早稻叶面积指数以N3/N4处理最高,较N1/N2提高42.6%,前者叶片衰老速度低于后者,晚稻LAI也以N3处理最高;早稻氮素施用后移后,N3/N4和N5/N6产量较N1/N2显著提高,增产分别达到17.3%、14.6%,晚稻N3产量显著高于其他处理,周年产量以N3处理最高;N3处理的周年氮肥农学利用率(AE)比其他处理的平均值高43.3%,氮肥偏生产效率(PFP)高11.7%。研究表明早籼稻氮肥施用比例以基肥∶分蘖肥∶穗肥=6∶4∶0,晚粳稻以5∶3∶2的搭配组合对提高周年产量和氮肥利用率有显著促进作用。     

包膜半胱胺对水牛瘤胃消化代谢的影响

利用 3头装有长久性瘘管的雄性水牛 ,采用自身对照研究包膜半胱胺直接投入瘤胃对其消化代谢影响的动态变化。研究结果显示 ,与对照 (- 2d)相比投入半胱胺的当天 (0d)除干物质和粗纤维 2 4h消失率略有增加外 ,MCP ,NH3 N分别下降 5 .6 3% (P >0 .0 5 )和 33.88% (P <0 .0 1) ,TVFA降低 9.4 5 % (P >0 .0 5 ) ,其中A %下落 1.11个百分点 (P <0 .0 5 ) ,P %提高 2 .13个百分点 (P <0 .0 1) ,B %降低 1.0 2个百分点 (P <0 .0 1) ,A∶P由4 .6 0降到 3.99(P<0 .0 1) ;1d时各项测定指标均有所回升 ,MCP尚低 1.79% ,差异不显著 ,NH3 N仍显著低于对照 31.2 0 % (P <0 .0 5 )。TVFA升高 11.82 % (P >0 .0 5 ) ,A %变化不明显 ,P %提高 0 .6 8个百分点 (P <0 .0 5 ) ,B %下降 0 .87个百分点 (P <0 .0 5 ) ,A∶P回升到 4 .38,但仍显著低于对照 ;3d时 ,干物质和粗纤维 2 4h消失率分别增加 13.5 1% (P =0 .10 )和 15 .73% (P =0 .0 8)。MCP ,NH3 N分别升高 12 .2 5 %和 13.2 2 % ,但均未达到显著水平 (P >0 .0 5 )。TVFA极显著升高达 32 .0 3% (P <0 .0 1) ,A %仍低 0 .89个百分点 (P <0 .0 5 ) ,P %继续高于对照 (P <0 .0 5 ) ,B %已略高于对照 ,A∶P虽仍低于对照但差异已不显著。 6d时 ,干物质和粗纤维 2 4h消失     

Chemotaxis in bacteria

Motile Escherichia coli placed at one end of a capillary tube containing an energy source and oxygen migrate out into the tube in one or two bands, which are clearly visible to the naked eye and can also be demonstrated by photography, microscopy, and densitometry and by assaying for bacteria throughout the tube. The formation of two bands is not due to heterogeneity among the bacteria, since the bacteria in each band, when reused, will form two more bands. If an anaerobically utilizable energy source such as galactose is present in excess over the oxygen, the first band consumes all the oxygen and a part of the sugar and the second band uses the residual sugar anaerobically. On the other hand, if oxygen is present in excess over the sugar, the first band oxidizes all the sugar and leaves behind unused oxygen, and the second band uses up the residual oxygen to oxidize an endogenous energy source. The essence of the matter is that the bacteria create a gradient of oxygen or of an energy source, and then they move preferentially in the direction of the higher concentration of the chemical. As a consequence, bands of bacteria (or rings of bacteria in the case of agar plates) form and move out. These results show that E. coli is chemotactic toward oxygen and energy sources such as galactose, glucose, aspartic acid, threonine, or serine. The full repertoire of chemotactic responses by E. coli is no doubt greater than this, and a more complete list remains to be compiled. The studies reported here demonstrate that chemotaxis allows bacteria to find that environment which provides them with the greatest supply of energy. It is clearly an advantage for bacteria to be able to carry out chemotaxis, since by this means they can avoid unfavorable conditions and seek optimum surroundings. Finally, it is necessary to acknowledge the pioneering work of Englemann, Pfeffer, and the other late-19thcentury biologists who discovered chemotaxis in bacteria, and to point out that the studies reported here fully confirm the earlier reports of Beijerinck (4) and Sherris and his collaborators (5,6) on a band of bacteria chemotactic toward oxygen. By using a chemically defined medium instead of a complex broth, it has been possible to study this band more closely and to demonstrate in addition the occurrence of a second band of bacteria chemotactic toward an energy source. Beijerinck (4) did, in fact, sometimes observe a second band, but he did not offer an explanation for it.     

苦豆子内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

从塔里木盆地不同地点采集苦豆子,从不同组织中分离内生细菌,并用分离得到的内生细菌对病原真菌做皿内拮抗试验,筛选有生物拮抗活性的内生菌菌株。结果表明,不同来源的苦豆子内生细菌数量上有较大差异,苦豆子不同组织内生细菌的种类和数量也有差异。从苦豆子各种组织中分离得到129株内生细菌,其中5株对多种植物病原真菌具有拮抗作用,这些菌株在苦豆子植株内均可定殖,属于芽孢杆菌。     

Stress-induced mutagenesis in bacteria

The evolutionary significance of stress-induced mutagenesis was evaluated by studying mutagenesis in aging colonies (MAC) of Escherichia coli natural isolates. A large fraction of isolates exhibited a strong MAC, and the high MAC variability reflected the diversity of selective pressures in ecological niches. MAC depends on starvation, oxygen, and RpoS and adenosine 3',5'-monophosphate regulons; thus it may be a by-product of genetic strategies for improving survival under stress. MAC could also be selected through beneficial mutations that it generates, as shown by computer modeling and the patterns of stress-inducible and constitutive mutagenesis. We suggest that irrespective of the causes of their emergence, stress-induced mutations participate in adaptive evolution.     

Cannibalism by sporulating bacteria

Spore formation by the bacterium Bacillus subtilis is an elaborate developmental process that is triggered by nutrient limitation. Here we report that cells that have entered the pathway to sporulate produce and export a killing factor and a signaling protein that act cooperatively to block sister cells from sporulating and to cause them to lyse. The sporulating cells feed on the nutrients thereby released, which allows them to keep growing rather than to complete morphogenesis. We propose that sporulation is a stress-response pathway of last resort and that B. subtilis delays a commitment to spore formation by cannibalizing its siblings.     

鸡粪堆肥中优势菌及复合固化菌剂载体的筛选

为了提高畜禽粪便堆肥降解效率和堆肥质量,比较不同堆肥时期微生物菌群结构和多样性.基于高通量测序分析堆肥前、中和腐熟时期样品的优势细菌,通过检测油脂、淀粉、纤维素、明胶分解性能和生理生化特性,筛选堆肥中的优势菌株,并优化优势菌株的培养条件和筛选最佳的菌剂载体.结果 表明:茅孢杆菌是堆肥过程中的优势菌,成功筛选出具有堆肥微生态菌剂优势的3株茅孢杆菌,分别是D1解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique-faciens)、D5苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)和D7地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis);3株菌在环境温度为41℃时,pH为6.5～7.5,以酵母提取物为3株菌氮源时,酶活性最高,各菌同组产酶差异显著(P＜0.05);以玉米芯粉为载体更能有效保护菌株活性.筛选优质高效的微生物和制备固体堆肥复合菌剂,有利于揭示堆肥过程中微生物作用的本质规律,为加速畜禽排泄物资源化提供有效途径.