转基因玉米中植酸酶蛋白沉淀条件探索

为了对玉米中表达的植酸酶蛋白的酶学性质进行深入研究,以转基因玉米籽粒中提取的植酸酶粗提液为研究材料,探索了植酸酶和总蛋白的溶解度与硫酸铵饱和度之间的关系,结果显示在0~60%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶仅占初提液中总植酸酶含量的1.85%,而在此范围内沉淀的总蛋白却占初提液的总蛋白含量的57%,植酸酶比活为0.44 U/mg;在60%～80%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶和总蛋白分别占初提液中各自含量的58%和10%,植酸酶比活为84.4 U/mg;在80%～90%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶收率占初提液中含量的1.9%。因此选用60%～80%硫酸铵饱和度分级沉淀植酸酶,在此条件得到的植酸酶比活比粗提液的植酸酶比活（13.8 U/mg）高6.1倍。     

转植酸酶基因玉米实现科学家梦想

日前从中国农业科学院获悉，由我国独立研发、拥有自主知识产权的粮食作物一转植酸酶基因玉米，日前获得农业部正式颁发的农业转基因生物生产应用安全证书：这标志着我国科研工作者多年以来的一个梦想：以环保、节能的方式生产“绿色磷”最终得以成真。     

转植酸酶基因(phyA)玉米的PCR检测

采用CTAB法和SDS法对通过花粉管通道法导入植酸酶基因(phyA)的玉米植株,进行基因组提取并做了对比,认为SDS法效果更好,进而进行了PCR检测,并对PCR反应体系及反应条件进行优化,得出最适反应条件为57℃、模板含量1μL,检测得到了转基因阳性植株,初步证明外源目的基因已整合到玉米基因组中。     

转植酸酶基因玉米实现科学家梦想

<正>日前从中国农业科学院获悉,由我国独立研发、拥有自主知识产权的粮食作物—转植酸酶基因玉米,日前获得农业部正式颁发的农业转基因生物生产应用安全证书;这标志着我国科研工作者多年以来的一个梦     

大豆凝集素在模拟猪胃肠环境中的稳定性研究

为研究大豆凝集素在体外模拟猪胃肠环境中的稳定性,将纯品大豆凝集素设为1,2,3,4,5 mg/mL 5个浓度梯度,分别与等体积的模拟胃液或模拟肠液混合(37℃),按时间梯度15,30,60 s和2,4,8,15,30,60 min准确记时并终止反应,采用SDS-PAGE凝胶电泳和间接抑制ELISA方法定量检测反应体系中剩余的大豆凝集素.结果表明:大豆凝集素在胃蛋白酶反应体系中的剩余量随底物浓度和反应时间的不同都呈显著性变化(P<0.05).胃蛋白酶降解大豆凝集素主要发生在反应的初始阶段,随着反应时间的延长降解速率逐渐变慢,但反应一直在进行;随着大豆凝集素浓度的增加,降解速率增大,但彻底降解所需的时间延长,底物浓度从1 mg/mL增加到5 ng/mL,完全降解的时间为9.5～23 min.胰蛋白酶对完整的大豆凝集素不产生降解作用.大豆凝集素在猪消化道内有一定程度的降解,但与大豆凝集素的浓度和通过胃的时间密切相关.     

转基因植酸酶玉米的安全性及市场前景——林敏教授答记者问

转植酸酶基因玉米由中国农业科学院生物技术研究所培育,是目前育种界的另一个热点话题。转植酸酶基因玉米前景如何?记者近日采访了中国农业科学院生物技术研究所所长林敏教授,请他回答了公众关心的几个问题。     

转植酸酶基因(PhyA2)玉米对家蚕肠道微生物多样性的影响

以转植酸酶玉米10TPY005、非转植酸酶亲本玉米蠡玉35的花粉分别饲喂家蚕3个龄期,取3龄末期家蚕利用Biolog-Eco法分别从其肠道微生物群落多样性的平均颜色变化率(AWCD值)、四种碳源利用率、群落代谢功能多样性指数(Shannon、Simpson和Mc Intosh指数)及主成分分析四个方面进行指标测定,从而研究转植酸酶玉米对家蚕肠道环境菌群多样性的影响。结果表明:转植酸酶玉米花粉喂食的家蚕与亲本玉米花粉喂食和空白对照两组家蚕相比,上述各指标总体无显著性差异,即转植酸酶玉米对家蚕肠道微生物多样性未造成明显影响。     

转Bar基因玉米基因漂移的研究

转基因植物发生基因漂移可能引起的生态环境安全性问题已经引起广泛关注,实验采用转Bar基因抗除草剂玉米为试材,进行了外源基因遗传漂移距离和频率的研究。结果表明,转基因玉米的漂移率与距离成正相关,最大漂移频率为37.78%,隔离距离以150m以上为好。     

转基因植酸酶玉米在低碳经济时代大有可为

低碳经济是一种以低能耗、低污染、低排放为基础的现代经济模式,是人类社会在继农业文明、工业文明之后的又一次重大科技进步。低碳经济成为今年＂两会＂热点问题。温家宝总理在政府工作报告中明确提出：今年要加快转变经济发展方式,调整优化经济结构,大力推动经济进入创新驱动、内需增长的发展轨道。低碳经济将成为我国经济发展模式的重要特征。     

一种新的耐热性植酸酶基因在烟草中的表达

[目的]探究一种新的耐热性植酸酶基因在烟草中的表达结果。[方法]克隆了泡盛曲霉植酸酶基因编码区全序列,使其在烟草中高效表达,对重组植酸酶与天然植酸酶性质进行初步的分析和比较。[结果]对烟草叶片的植酸酶活性检测结果表明,重组植酸酶基因在烟草中得到较高水平表达,转基因植株的最高植酸酶活力为对照烟草的13倍;对烟草重组植酸酶蛋白的酶学性质进行了初步分析,结果表明重组植酸酶拥有与天然植酸酶同样的最适pH值和最适温度,耐热性略微下降,但在80℃处理15 min后仍有33%的残余酶活力。[结论]该研究为该植酸酶基因转化饲料作物的开发提供理论依据,也为泡盛曲霉植酸酶的工业化生产开辟了新的途径。     

除虫脲在人工胃/肠液和肠道菌群及生物样品中的稳定性研究

为了考察除虫脲(DFB)在人工胃/肠液和肠道菌群及生物样品中的稳定性,为合理开发DFB口服制剂提供试验依据.采用高效液相色谱法(HPLC),分别将DFB与空白人工胃液(pH为1.3,不含酶)、空白人工肠液(pH为6.8,不含酶)、人工胃液(pH为1.3,含胃蛋白酶)、人工肠液(pH为6.8,含胰蛋白酶)、SD大鼠(雄性...     

鲤鱼过敏原（胶原蛋白）的体外模拟消化

首先采用酸法提取纯化鲤鱼过敏原（胶原蛋白）,依据美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对纯化的胶原蛋白进行酶解消化,以SDS-PAGE和免疫印迹分析测定纯化的胶原蛋白在体外模拟胃液、肠液中的消化稳定性及免疫原性.结果表明,鲤鱼胶原蛋白经模拟胃液（胃蛋白酶）消化15min出现较为明显的降解,消化1h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰蛋白酶）消化30min出现较为明显的降解,消化3h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰凝乳蛋白酶）消化1～4h均未出现明显降解,其消化产物仍具有较强的免疫原性.结果提示,鲤鱼胶原蛋白的耐消化性及免疫原性可能是导致食物性过敏反应的重要原因.     

柿单宁在模拟胃液中的絮凝特性研究

分析柿单宁与蛋白质和卵磷脂等在模拟胃液环境中的絮凝趋势,探讨胃柿石的形成原因。以牛心柿的生柿、脱涩硬柿和后熟软甜柿为试材,提取并测定其总、游离和缩合单宁含量;选取美国药典的模拟胃液配方,采用透射比浊法,对比分析生柿、熟软柿中单宁与模拟胃液,及与含有蛋白质、卵磷脂的模拟胃液作用产生的絮凝趋势。结果表明:生柿游离单宁的含量(7.076g/L)高于脱涩硬柿(3.962g/L)和后熟软柿(3.679g/L),其缩合单宁的含量(4.002g/L)低于脱涩硬柿(7.392g/L)和后熟软柿(7.538g/L);生柿、熟软柿中单宁与模拟胃液作用均有较强絮凝趋势,它们与含有蛋白质或卵磷脂的模拟胃液作用可产生更强的絮凝趋势;参试物絮凝趋势从强到弱依次为明胶牛血清卵磷脂干酪素,生柿熟软柿和脱涩硬果。柿果形成胃柿石的主要原因是其单宁含量较高,并与摄入不当(空腹、同时摄入明胶或牛血清类蛋白质)有关。     

草鱼模拟肠液的开发及其在仿生消化仪上的应用

[目的]研制草鱼模拟肠液配方。[方法]根据草鱼成鱼的肠道淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性,pH以及钠离子环境,研制了一套草鱼成鱼的模拟肠液配方,并研究其在仿生消化仪上的应用。[结果]利用配制的草鱼模拟肠液进行体外仿生消化试验,发现饲料中干物质和粗蛋白的消化率与真实值的绝对差值均在10%左右,达到仿生消化的目的与要求。此外,经过仿生消化,外源植酸酶能够显著提高干物质消化率、粗蛋白消化率和代谢能值,促进植酸磷的释放。[结论]该研究结果可为草鱼的体外模拟消化提供更可靠的试验数据,并为水产其他动物模拟肠液的开发提供参考。     

利福昔明在人工胃/肠液和大鼠肠道菌群及组织样品中的稳定性初步分析

为初步分析利福昔明(Rifaximin)在人工胃/肠液和肠道菌群及动物组织样品中的稳定性,将利福昔明分别与空白人工胃液(pH=1.3,不含酶)、空白人工肠液(pH=6.8,不含酶)、人工胃液(pH=1.3,含胃蛋白酶)、人工肠液(pH=6.8,含胰蛋白酶)、SD大鼠(雄性)肠道菌群及不同组织样品的匀浆液等共孵育不同时间后,采用高效液相色谱法(HPLC)检测剩余利福昔明百分比的变化。结果表明:1)在空白人工胃液中,随孵育时间的增加,剩余利福昔明百分比虽有下降,但仍在90%以上;在人工胃液中孵育6 h,其剩余百分比为84.03%;而在空白人工肠液和人工肠液中孵育6 h后,其剩余百分比则分别降至81.14%和78.12%。2)利福昔明在SD大鼠肠道菌群中孵育12 h后,虽发生部分降解,但剩余百分比仍在90%以上,总体呈稳定的趋势。3)利福昔明在空白SD大鼠的胃、肝、小肠和大肠及内容物的匀浆液中分别孵育6 h后,其剩余百分比分别为92.09%、75.95%、78.24%和83.90%。综上,利福昔明在酸性条件下较稳定,而在碱性条件下,胰蛋白酶、胃蛋白酶和肠壁、肝脏代谢酶等对其稳定性的影响亦较为有限。本研究将为兽用利福昔明口服制剂的开发提供数据支持。     

The Effect of Dietary Supplementation with Phytase Transgenic Corn on Growth Performance,Phosphorus Utilization and Excretion in Growing Pigs （Sus scrofa）

Two experiments were conducted to investigate the effect of dietary supplementation with phytase transgenic corn (PTC)on growth performance, phosphorus (P) utilization and excretion in growing pigs. In Exp. 1, 180 pigs (Large White ×Landrace, BW=37.7 kg) were randomly allotted to 4 treatments with 5 replicates of 9 pigs each in order to evaluate the effect of PTC supplementation in low-P diets on growth performance. Four corn soybean meal-based diets consisted of a positive control (PC) diet, a diet containing 500 units (U) of exogenous phytase kg-1 (EP) on the basis of low-P (inorganic P reduced by 0.05% from PC diet) and the low-P+500 (PTC1) or 750 (PTC2) phytase U ofPTC kg-1. In Exp. 2, 20 barrows (Large White×Landrace, BW=31 kg, 4 treatments with 5 replicates of 1 pig each) were randomly selected to evaluate the effect of PTC in low-P diets on serum parameters and nutrient utilization. Diets in Exp. 2 were similar to those in Exp. 1except that the EP group was replaced by a low-P diet without exogenous phytase supplementation as a negative control (NC) group. The results from Exp. 1 showed that the average daily gain (ADG) in the PTC2 group was significantly higher (P＜0.05) than that in the EP group over all periods. On the other hand, the feed:gain (F:G) ratio of the EP group was significantly higher (P＜0.05) than that of the PTC2 group during 1-21 and 1-42 d, respectively. There were no differences in average daily feed intake (ADFI) among all treatments (P＞0.05). The results from Exp. 2 showed that the concentration of serum Ca in the NC group was the highest (P＜0.05), while the concentration of serum P in the PTC2 group was the highest (P＜0.05) among all treatments. There was a significant decrease (P＜0.05) in the P apparent digestibility of the NC group compared with the other groups, and that of PTC2 group was the best. Furthermore, fecal P excretion was reduced (P＜0.05) from 1.80 g d-1 in the PC group to 1.28 g d-1 in the PTC2 group. In conclusion, dietary supplementation with PTC could reduce the application of inorganic P, decrease fecal P excretion, and improve the growth performance of growing pigs.     

模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响

为研究模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响，利用高压液相色谱技术测定了不同时点儿茶素在不同pH溶液及人工模拟体胃液与肠液中的含量．结果表明，儿茶素在pH5．8时最稳定，人工模拟胃液对儿茶素具有较强的破坏力，而人工模拟肠液对儿茶素的稳定性影响相对较小；胃蛋白酶、胰蛋白酶以及缓冲溶液中盐类物质并不影响儿茶素的稳定性．     

转基因抗虫玉米对亚洲玉米螟生长发育和实验种群增长的影响

以两个转Bt抗虫基因玉米品系G03-2396、G03-2739和1个常规对照品种苏玉16为材料,研究其对亚洲玉米螟幼虫生长发育和实验种群消长动态的影响.结果表明:①两个转基因玉米材料的心叶组织对玉米螟低龄幼虫的毒性很强,1龄幼虫取食这两个转基因玉米心叶组织后8 d死亡率超过97%;2龄幼虫取食心叶组织8 d后死亡率超过80%;1～4龄幼虫或全部死亡不能化蛹,或平均蛹重与对照品种相比显著降低,仅5龄幼虫各测定指标与对照品种相比差异不显著;两个转基因玉米材料的雌穗组织对玉米螟幼虫的毒性较低,即使低龄幼虫取食8 d后的死亡率与对照苏玉16相比差异也不显著.②玉米螟高龄幼虫取食两个转基因抗虫玉米心叶后,存活的部分幼虫化蛹羽化后的成虫寿命明显缩短,单雌产卵量显著下降,甚至卵的孵化率也有所降低.表明所选的两个转Bt基因玉米品系对玉米螟的毒性具一定的后续效应.