转基因落叶松林地土壤微生物类群的生态分布特征

[目的]分析转基因落叶松植株对土壤微生物的影响.[方法]采用稀释平板法研究了转基因落叶松幼龄林土壤微生物数量及其类群分布特征.[结果]转基因落叶松幼龄林土壤微生物数量具有明显的季节变化特征,以夏季最多,秋季次之,春季最少;在夏季达到最大值620.40×106 cfu/g干土,最小值出现在春季,为146.27 × 106 cfu/g干土.转基因落叶松幼龄林土壤微生物组成为细菌数量最多,占99％以上,放线菌数量次之,占0.070％;真菌数量最少,占0.049％.土壤微生物主要集中在O～20 cm的土层,随着土层的加深,微生物数量迅速减少,在深度为0～60 cm的土层中,同一类群的微生物数量变动范围较大,细菌为26.30×107～62.00×107 cfu/g千土,放线菌为0.50×104～ 11.00×104 cfu/g干土,真菌为1.00×104 ～ 29.00×104 cfu/g干土.[结论]落叶松人工林地植被组成和土壤微生物的类群结构均十分复杂,生物种类多样,生态效益良好.     

苹果青霉病菌在苹果组织中的分布检测

为评估苹果感染青霉病后的食用安全性,本试验检测了苹果青霉病菌(Penicillium sp.)在苹果组织中的分布。结果表明:病斑处青霉菌菌落数最高,为2 800 cfu/g;病斑外延1.0 cm处,青霉菌菌落数为120cfu/g;病斑外延1.5 cm处,青霉菌菌落数为18 cfu/g;病斑外延2.0 cm处,未检测到苹果青霉病菌。     

日光温室连作黄瓜根际微生物区系的变化

[目的]研究黄瓜再植病害的发生机理。[方法]选择种植年限分别为13、、5、7和8年的日光温室,采集0~20 cm根区耕层土壤,测定微生物类群和数量。[结果]连续种植5年的土壤中微生物数量最多,达2.2×108cfu/g（干土）;8年的最少,为2.7×107cfu/g（干土）。细菌占微生物总量的97%以上。随连作年限的增加,细菌和放线菌数量表现出先增加后减少的趋势,第5年达到最大值,分别为2.17×108和1.92×106cfu/g（干土）;真菌数量随连作年限的增加呈增长趋势。随连作年限的增加,氨化细菌、固氮菌和纤维素分解菌数量呈现先增加后降低的趋势,分别在连作5、3和3年达到最大值,而硝化细菌数量随连作年限的增加急剧下降。[结论]黄瓜连作显著地改变了根际微生物区系。     

芽孢杆菌 QC －13对咪唑乙烟酸污染土壤的生物修复

在实验室条件下,研究了芽孢杆菌（ Bacillus sp．） QC－13对咪唑乙烟酸污染土壤的生物修复作用。投加降解菌QC－13可显著提高咪唑乙烟酸在土壤中的降解速率。当咪唑乙烟酸浓度为50 mg／kg干土,且QC－13的接种量为108 CFU／g干土时,21 d后土壤中咪唑乙烟酸的降解率为66．2％,而对照土壤则为14．4％。咪唑乙烟酸的降解速率与接种量呈正相关,当接种量减少至105 CFU／g干土时,降解率降低至31．8％。菌株QC－13降解土壤中咪唑乙烟酸的最适温度为30℃,降解率于21 d 可达62．7％;当土壤含水量为40％时,于21 d时咪唑乙烟酸的降解率为62．2％,且降解率随含水量的增加而降低。接种QC－13可不同程度缓解土壤中浓度为50、100μg／kg干土的咪唑乙烟酸对玉米、小麦的生长抑制作用。     

土壤生态环境对木霉生存的影响

通过对山东省不同地区不同植被下土壤中木霉数量测定,结果表明,自然保护地带、有机质多的土壤木霉量多．为2．04万个／g干土,占真菌总数的6．86％;氧气密集处的土壤木霉量多,为1．8万个／g干土;有农药、化肥等污染的土壤或极端环境的土壤木霉量少,比如棉花地55个／g干土。聚类分析不同土壤生态环境木霉的数量,生态区分为五大类,分别为一般农作物土壤、贫瘠土壤、蔬菜和绿化地水分较足土壤、草地和温室及保护地水分充足土壤、有机质丰富的常绿山林。因此,不同生态环境的土壤对木霉的生存影响很大。     

一株番茄枯萎病生防菌的鉴定、定殖与盆栽防效研究

[目的]从多年种植的大田土壤中分离出一株拮抗番茄枯萎病菌的细菌S-13,对其进行初步鉴定,并测定其定殖能力和防治效果.[方法]16S rDNA系统发育分析初步鉴定菌株种属,利用该菌株的耐受300μg/mL抗利福平的突变菌株,采用盆栽试验和DGGE(变性梯度凝胶电泳)分析方法,分别测定拮抗菌S-13突变菌株对番茄枯萎病的盆栽防治效果、定殖能力以及对其根际土壤菌群的影响.[结果]S-13菌株初步鉴定为芽孢杆菌属解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens GU323369.1)的近似种.盆栽试验表明:灌根组和喷施组在45 d内对番茄枯萎病的发生均具有较好的控制作用,对番茄枯萎病的防效达100;和93;.拮抗菌接种后7、25和45 d的分离培养表明:拮抗菌S-13能够在番茄根际土壤、根、茎、叶中定殖,土壤和根中的定殖数量较高,到第45 d达1.6×105 cfu/g根际土壤和6.6×104 cfu/g鲜根重,但在茎和叶中的定殖并不稳定,到45 d时只在灌根组的叶中检测到有生长为4×102 cfu/g鲜叶重.同时DGGE分析表明S-13在分离土壤是优势菌之一,在接种的第25 d土壤中细菌多样性降低,但在45 d检测时对土壤中细菌的影响逐渐减小,逐步形成一个具有拮抗细菌存在的、稳定的细菌群落结构.[结论]番茄枯萎病菌拮抗菌S-13能够在番茄根际土壤、根、茎、叶中定殖,土壤和根中的定殖数量较高,能够抑制番茄枯萎病的发生及扩散,具有较高的实际应用价值,为进一步的应用奠定了基础,也为番茄枯萎病的生物防治提供了新的选择.     

强酸性水对畜禽粪便杀菌的试验研究

以规模化养猪场的新鲜粪便为处理对象,利用强酸性水对其进行杀菌处理。考察了粪大肠杆菌数随处理时间的变化规律、适宜的强酸性水的用量以及不同理化性质的强酸性水对菌落的杀灭情况;比较了无菌蒸馏水、NaClO溶液和强酸性水3种处理液对粪便中菌落的灭活效果。结果表明,强酸性水在前5 min内有较快的杀菌速率;当强酸性水(其理化性质为:有效氯含量(ACC)30.43 mg.L-1、pH<2.7、ORP>1 100 mV)的用量为75 mL时,1 g粪便中的粪大肠杆菌可被完全灭活;无菌蒸馏水对病菌并无杀灭作用,向1 g粪便中加入具有相近ACC的强酸性水(30.43 mg.L-1)和NaClO溶液(30.50 mg.L-1)各75 mL,作用5 min后,对粪大肠杆菌的杀灭率均能达到100%,细菌总数分别降低了近4个对数值和5个对数值;提高强酸性水的理化性质可取得较好的杀菌效果。     

强酸性水对畜禽粪便杀菌的试验研究

以规模化养猪场的新鲜粪便为处理对象,利用强酸性水对其进行杀菌处理。考察了粪大肠杆菌数随处理时间的变化规律、适宜的强酸性水的用量以及不同理化性质的强酸性水对菌落的杀灭情况;比较了无菌蒸馏水、NaClO溶液和强酸性水3种处理液对粪便中菌落的灭活效果。结果表明,强酸性水在前5 min内有较快的杀菌速率;当强酸性水(其理化性质为:有效氯含量(ACC)30.43 mg.L-1、pH<2.7、ORP>1 100 mV)的用量为75 mL时,1 g粪便中的粪大肠杆菌可被完全灭活;无菌蒸馏水对病菌并无杀灭作用,向1 g粪便中加入具有相近ACC的强酸性水(30.43 mg.L-1)和NaClO溶液(30.50 mg.L-1)各75 mL,作用5 min后,对粪大肠杆菌的杀灭率均能达到100%,细菌总数分别降低了近4个对数值和5个对数值;提高强酸性水的理化性质可取得较好的杀菌效果。     

玉米秸秆制备土壤生物修复剂及其应用效果

针对温室大棚内土壤土传病原菌多、农药残留量高的特性,研制出了既能生物降解农药残留、又能生物防治土传病害的生物修复剂。该菌剂以玉米秸秆为原料经水热处理后,固体发酵制成。采用室内土壤降解试验,在菌剂加入量5 g/kg干土、多菌灵量为100 mg/kg干土时,灭菌土壤中的多菌灵8 d被完全降解,而自然土壤中的多菌灵被完全降解缩短到6 d,说明土著微生物和降解菌共代谢降解作用明显。另外,还做了修复剂对黄瓜枯萎病的活体防效试验,防治效果达到81.7%,优于化学农药。     

温室智能装备系列之一百一十四 温室机械化土壤精准消毒管理软件设计

背景温室土壤消毒是果蔬种植的一个关键环节,通过调理剂改善土壤,消灭土壤中的病菌、虫卵和草籽,提高作物的品质和产量,并降低后期植保的药剂投入和人工成本。传统的土壤消毒采用人工作业,存在劳动强度大、操作人员呼吸道受刺激和土壤中药量不均等问题。为解决以上问题,机械化土壤消毒逐渐被重视和发展起来。     

温室黄瓜连作土壤微生物区系和养分含量变化

以日光温室黄瓜连作1～3,4～7,8～10 a的土壤为研究对象,测定土壤微生物数量和养分含量。结果表明,连续种植4～7 a的土壤中微生物总数最多,达4.7×107cfu/g;8～10 a的最少,为2.2×107cfu/g;随连作年限的增加,细菌数量表现出先增加后减少的趋势,在连作4～7 a的土壤中达到最大值,为4.2×107cfu/g;放线菌的数量表现为逐年减少的趋势;真菌数量随连作年限的增加呈增长趋势。而土壤氮、磷、钾含量随连作年限的增加逐年增多,但氮的投入不足,磷的投入适中,钾肥投入过量。     

市售鲜猪肉细菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解市售鲜猪肉的细菌污染状况及主要病原菌的耐药性,以便从源头上控制市售鲜猪肉的安全,甚至为细菌引发的食源性疾病的治疗提供参考依据,从遵义和安顺地区农贸市场采集24份鲜猪肉样本进行细菌分离鉴定及药敏试验。结果表明:鲜猪肉表层与深部细菌含量分别在(1.87～7.13)×105cfu/g和(1.0～1.3)×104cfu/g,分离鉴定的细菌有葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、芽孢杆菌、塔特姆氏菌、耶尔森氏菌、沙雷氏菌、不动杆菌、莫拉氏菌和假单胞菌。大肠杆菌和葡萄球菌均存在广泛的耐药性,对麦迪霉素、淋必治、氯洁霉素、灭滴灵、阿奇霉素、吡哌酸、洁霉素、复方新诺明、罗红霉素和先锋霉素IV的耐药性达100%。     

Taqman三重实时PCR快速检测原料乳中致泻性大肠埃希氏菌

建立可对原料乳中致泻性大肠埃希氏菌(包括肠致病性大肠埃希氏菌、肠侵袭性大肠埃希氏菌和肠产毒性大肠埃希氏菌)同时进行快速检测的Taqman三重实时PCR方法。以致病菌中常见的eae、ipaH和lt基因为目的片段,选择3种特异性引物和Taqman探针进行三重实时PCR扩增,研究反应的特异性、检测限和重复性,并用所建立的方法对38份原料乳进行检测。结果表明,扩增曲线形态良好,对原料乳中其他常见致病菌无交叉反应,对含致病菌为1 cfu.mL-1的乳样经2 h增菌处理后检测结果呈阳性,对原料乳样重复性检测的CV值均小于5%。完成全部检测过程只需大约6 h。该方法快速准确,可应用于原料乳中致泻性大肠埃希氏菌的快速检测和污染调查。     

大蒜液抗菌活性的研究

为评价大蒜液的抗菌活性,以2×105cfu/mL的芽孢杆菌、金黄色葡葡球菌和大肠杆菌为受试菌,进行体外抑菌试验,测定大蒜液的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).结果表明:大蒜液对3种细菌都有较强的抑制作用,并且抑制的效果随着大蒜液体积分数降低而逐渐降低,其中大蒜液对芽孢杆菌抑制作用最强,金黄色葡萄球菌次之,...     

九种动物性食品致病菌通用前增菌方法的研究

为探索快速多重检测食源性致病菌的方法,对污染动物性食品的大肠埃希氏菌O157:H7(EnterohemorrhagicEscherichiacoli O157:H7),副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus),创伤弧菌(Vibrio vulnificus),伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica),单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes),宋氏志贺氏菌(Shigella sonnei),荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)等九种致病菌进行了通用前增菌方法的研究。研究了培养基、培养温度和培养时间对九种菌前增菌效果的影响,结果表明:LB肉汤培养基,36℃培养18h,九种致病菌的增菌效果最好且数量级均衡一致,均达到108cfu·mL-1。     

重组人溶菌酶体外抑菌活性研究

以购买商品化的溶菌酶标准品作为对照,通过平板扩散法检测重组人溶菌酶(rhLYZ)在体外对几株致病菌及益生菌的抑菌作用,同时用梯度稀释法检测重组人溶菌酶的MIC和MBC。分别将重组酶和商品酶做梯度稀释后,滴加到涂布有一定量菌液的MH平板,通过平板扩散法测量各组抑菌环直径大小,从而判定其抑菌活性。结果表明,重组人溶菌酶抑菌活性显著高于标准溶菌酶,低质量浓度的重组酶即可对致病菌的生长产生抑制和杀灭作用。rhLYZ对金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌较为敏感,抑菌环直径达到15mm～18mm;对多杀性巴氏杆菌抑菌环直径则达到27.5mm。提示rhLYZ对金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌及多杀性巴氏杆菌等病原菌均具有较强抑菌活性。     

三七种植土壤微生物类群动态与根腐病的关系

通过对三七免耕种植定位研究,找出了三七根腐病高发期与土壤微生物类群变化特征的差异,鉴定出了主要病原微生物类群。结果表明：三七根腐病的发生,除已报道的细菌中的假单胞细菌有关外,还与霉菌、放线菌及厌氧生长菌有密切关联,这3类菌群在不同季节存活量的高峰期与三七病害高发期相吻合,并且根腐病株土壤中的霉菌、放线菌及厌氧菌数高于健康植株土壤,分别增加3．89E4．cfu／g,0.94E4,cfu／g,85.10E6.cfu／g,说明这3种细菌也是导致三七根腐病的主要病原菌。     

鸿雁致病性大肠杆菌的分离和鉴定

[目的]为有效预防和控制鸿雁大肠杆菌病提供依据。[方法]从疑似患大肠杆菌病的鸿雁体内分离鉴定出一株致病性大肠杆菌,并对分离菌株进行培养特性、致病力及对抗生素敏感性等进行研究。[结果]从细菌的分离培养、系统的生化鉴定、细菌计数到动物回归试验,最终确定致鸿雁死亡的病原为大肠杆菌,同时通过动物回归试验进一步证实了大肠杆菌对鸿雁的致病性,LD50为4.11×107cfu/ml。此次分离的大肠杆菌对环丙沙星、多粘菌素B、卡那霉素高度敏感;对阿米卡星、头孢他啶中度敏感;对头孢吡肟等具有一定的耐药性。[结论]首次报道的关于大肠杆菌对鸿雁的致病性和毒力试验的研究,对于鸿雁特禽养殖有一定指导意义。     

农用抗生素生产菌株的筛选

采用放线菌常规分离方法,从湖南、江西、贵州6个地点采集种植吴茱萸的土壤中分离出15株放线菌,并对它们进行5种病原菌的拮抗性筛选.结果表明,6-1-1和10-1-1菌株对水稻纹枯病病原菌的抑制率达98.8%和93.3%,对白绢病病原菌的抑制率达91.3%和90.2%,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌也有一定的抑制效果.