银杏组织培养与黄酮生产的研究：Ⅰ.银杏愈伤组织的诱导与褐变调…

以叶片为试材，对银杏愈伤组织的诱导，继代培养及褐变调控进行了研究。结果表明：１．银杏愈伤组织的诱导及继代培养均以ＭＴ附加ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ３．０ｍｇ／Ｌ的培养基效果最好；２．０．１％的植酸具有明显地促进愈伤组织生长，抑制褐变和，而活性炭和硫代硫酸钠效果最差；３．蔗糖浓度为５％的培养在，愈伤组织增长倍数最高，达１３．７７；４．继代培养４０－４５ｄ愈伤组织增长倍数达到最大值。     

棉花花药培养及其在遗传育种中的应用Ⅰ．愈伤组织的诱导

对影响棉花花药愈伤组织诱导的因素进行了研究,结果表明：灭菌方法以０．１％的氯化汞消毒１０分钟灭菌较为彻底;培养方式以花药固体培养较易诱导出愈伤组织。不同基因型的诱导效应不同,亚洲棉较易,陆地棉次之,海岛棉较差,野生棉最难,陆地棉不同品种间也存在着差别。激素种类和浓度影响着棉花花药愈伤组织的诱导率和生长量,ＴＤＺ有利于愈伤组织的诱导,ＢＡ不利于愈伤组织的诱导;ＭＳ＋０．１ｍｇ／ＬＢＡ＋５．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ是诱导棉花花药脱分化形成愈伤组织的较好培养基;ＭＳ＋０．１ｍｇ／ＬＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ或ＭＳ＋１．０ｍｇ／ＬＢＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ最有利于棉花花药愈伤组织的生长和增殖。     

陆地棉胚性愈伤组织诱导和植株再生

以陆地棉“泗棉３号”、“北元２０３１”、“鲁９５５４”为材料进行全固体体细胞培养，获得了胚性愈伤组织和再生植株。起始愈伤组织阶段，用含２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ和２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＺＴ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基效果较好；进入胚性愈伤组织诱导阶段，在含ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上胚性愈伤组织诱导频率较高。     

生长调节剂对毛白杨叶愈伤组织诱导和植株再生的影响

利用ＮＡＡ，２，４－Ｄ，ＩＡＡ，ＩＢＡ，６－ＢＡ５种生长调节剂的不同浓度和不同组合配比，完成了对毛白杨叶愈伤组织诱导和守速植株的再生。在６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ分别和ＮＡＡ０．２－２．０ｍｇ／Ｌ、２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ、ＩＡＡ２．０ｍｇ／Ｌ共同作用下，叶愈伤组织诱导率均能达到１００％时，愈伤组织在６－ＢＡ１．０ｍｇ‘Ｌ和ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的作用下芽诱导率为８５％，而适当浓度的ＮＡＡ和ＩＢＡ有促进     

苎麻愈伤组织多样性及体细胞胚胎发生的研究

以茎麻子叶、下胚轴为外植体，在含高钾、磷、硝态氮、肌醇、盐酸硫胺素及低钙、低氨态氮，以葡萄糖为碳源的ＣＸＷ培养基上最易获得愈伤组织；激素组合为０．５ｍｇ／ＬＣＰＡ（或２，４─Ｄ）和０．０５ｍｇ／ＬＢＲ；培养温度为２８℃。愈伤组织在初代和继代培养中存在丰富的多样性，但在附加０．１ｍｈ／ＬＣＰＡ，０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ，１．５ｍｇ／ＬＺＴ的ＣＸＷ培养基上能获得多样性相对较小、质地结构较好的愈伤组织，并在附加０．１ｍｇ／ＬＣＰＡ，０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ，１．５ｍｇ／ＬＺＴ，２ｍｇ／ＬＭｅｔ，３ｇ／ＬＹＥ的ＣＸＷ培养基上首次获得了少数畸形的胚状体幼苗。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化的研究

以小麦成熟胚为外植体，在ＭＳ＋２．４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ培养基上，愈伤组织诱导率为８３．１％；不同品种间诱导率有较大的差异，但愈伤组织的质量与诱导率的高低无关，在ＭＳ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ培养基上，分化率可达４４．４％。     

欧李茎、叶愈伤组织的诱导及茎苗的再生

以欧李萌发的嫩茎和叶为外植体，诱导愈伤组织，结果表明：叶愈伤组织培养，以ＭＳ为基本培养基，附加ＮＡＡ１．２０＋ＢＡ０．１６ｍｇ／Ｌ；Ｌ为基本培养基附加ＮＡＡ１．６＋ＢＡ０．２０ｍｇ／Ｌ愈伤效果最好。茎段愈伤组织培养以ＭＳ培养基附加２．４—Ｄ０．４０＋ＺＴ０．０８ｍｇ／Ｌ愈伤效果最好。愈伤组织再分化诱导不定芽的培养基为１／４Ｌ＋ＺＴ３ｍｇ／Ｌ和１／４ＭＳ＋ＺＴ２ｍｇ／Ｌ。     

佛手瓜下胚轴离体培养及再生植株

对佛手瓜下胚轴再生植株、试管苗移栽及大田定植进行了试验，结果表明：在ＭＳ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＬＨ２００ｍｇ／Ｌ培养基上容易形成下胚轴愈伤组织；愈伤组织分化芽的培养基为ＭＳ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ，诱导分化率可达５７５％；顶芽和带腋芽茎段生根的培养基分别为ＭＳ＋ＩＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ和１／２ＭＳ＋ＩＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ，生根率分别为８１．８％和８３．３％；移栽培     

水稻花药培养再生植株

以水稻新品系落粒９０２４７ 的花药为材料,将其接种于愈伤组织诱导培养基（ Ｎ６［１］ ＋ ２ ｍｇ／Ｌ２ ,４ － Ｄ＋１．０ ｍｇ／ＬＮＡＡ＋ ０ ．５ ％ ＬＨ） 上进行愈伤组织诱导,２８ 天后诱导率为７ ．２ ％ （ 不计因操作而死的花药） ;把诱导出来的愈伤组织转接到分化培养基（Ｎ６ ＋ １ ～２ ｍｇ／ＬＫＴ＋ ０ ．２５ ～０ ．５ ｍｇ／ＬＮＡＡ＋ ３ ％ 麦芽糖,ｐＨ５ ．８ ～６ ．０）上,２７ 天后分化出芽或再生植株,芽分化率为３ ．１ ％ ,直接出苗率为２ ．９ ％ 。再生植株移栽后生长良好。     

三樱椒子叶愈伤组织的诱导及分化

对日本枥木三樱椒子叶愈伤组织的诱导与分化进行了系统的研究。结果表明：（１）ＮＡＡ（萘乙酸）０．１～２ｍｇ／Ｌ均能促进子叶愈伤组织的诱导及根的分化；（２）ＢＡ（６－苄基腺嘌呤）０．１～２ｍｇ／Ｌ对子叶愈伤组织的诱导及根分化均具有抑制作用，且在高浓度（２ｍｇ／Ｌ）时能抑制ＮＡＡ作用的发挥；（３）ＫＴ（激动素）２ｍｇ／Ｌ能抑制愈伤组织分化根，但ＫＴ的抑制作用比ＢＡ弱；（４）ＰＰ３３３（多效唑）０．０１ｍ     

3种抗氧化剂对青钱柳愈伤组织褐化的影响

褐变是导致青钱柳组织培养失败的主要原因之一。研究维生素C(VC)、植酸(PA)和柠檬酸(CA)3种抗氧化剂对青钱柳愈伤组织生长、褐化及其生理生化特性的影响。结果表明,适当浓度的抗氧化剂处理能有效抑制愈伤组织褐化率,促进愈伤组织生长,抑制培养过程中细胞质膜透性的增加。其中VC的处理效果较为明显,PA其次;最适浓度分别为VC 100 mg·L-1、PA 250 mg·L-1和CA 50~100 mg·L-1。VC 100 mg·L-1处理的愈伤组织鲜重增长率比对照增加73.88%,褐化率和细胞膜透性分别比对照低56.52%和45.75%,均达到显著或极显著水平。适当浓度的抗氧化剂使苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性在一定程度上受到抑制,但对多酚氧化酶(PPO)活性的抑制作用总体上不明显。总之,适当浓度的3种抗氧化剂处理能有效降低青钱柳愈伤组织褐化及其产生的伤害,促进生长,对PPO活性的调控可能不是其控制褐化的主要方式,有关机制尚待进一步探讨。     

红叶石楠愈伤组织抗褐化研究以及悬浮细胞系的建立

以红叶石楠无菌苗叶片为试材,诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系。结果表明:红叶石楠愈伤组织初代诱导最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,诱导率可达97%。继代培养以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L为宜。针对红叶石楠愈伤组织继代培养过程中易褐化的问题,通过正交试验探讨了不同吸附剂、抗氧化剂及其它因素对褐化的影响。采用MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Vc 1.0 mg/L+Ch 100 mg/L附加1%蔗糖的继代培养基,可以明显降低红叶石楠愈伤组织的褐化现象。将胚性愈伤组织接种到1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L附加2%蔗糖,pH 5.5液体培养基中悬浮震荡培养获得了分散性好、色泽鲜艳的悬浮细胞。     

不同糖源及蔗糖质量浓度对牡丹愈伤组织褐化的影响

以牡丹品种珊瑚台组培苗的愈伤组织为材料,研究不同糖源及蔗糖质量浓度条件下愈伤组织继代培养的褐化状况。结果表明:同一质量浓度下添加不同糖源的培养基对珊瑚台愈伤组织的继代培养效果以蔗糖、麦芽糖较好,褐化率分别为5.56%和4.76%,适宜培养时间均为30d;不同蔗糖质量浓度的培养基对珊瑚台愈伤组织的继代培养效果以50g/L为最佳,褐化率为4.55%,适宜培养时间为30d。     

褐变抑制剂对黄芩愈伤组织褐变及次生代谢产物的影响

研究了不同褐变抑制剂对黄芩愈伤组织继代培养中褐变、生长以及黄芩愈伤组织次生代谢产物黄芩苷、黄芩素含量的影响。结果表明：在MS＋0．5mg／L2,4-D＋1．0mg／L6-BA继代培养基中分别添加1．0g/L植酸、10mg／L抗坏血酸、2．0g/L聚乙烯吡咯烷酮能有效抑制黄芩愈伤组织褐变,促进其生长。在综合考虑愈伤组织的褐变率、生长增殖倍数（干重）基础上,以黄芩苷产量为指标,添加10mg／L抗坏血酸＋1．0g/L植酸组合效果最好;以黄芩素产量为指标,添加1．0g/L植酸效果最好。     

抗氧化剂对银杏愈伤组织褐变的影响

[目的]研究抗氧化剂对银杏愈伤组织褐变的影响。[方法]以银杏的子叶为外植体,以MS+2,4-D 1.0 mg/L+KT 1.5mg/L为基本培养基,对外植体进行愈伤组织的诱导培养,研究银杏愈伤组织继代过程中,不同浓度Vc、柠檬酸、PA 3种抗氧化剂对愈伤组织培养褐变的影响。抗氧化剂对褐变的抑制效果以愈伤组织中叶绿素的含量来表示。[结果]3种抗氧化剂对抑制褐变的效果为:Vc>柠檬酸>PA;筛选出最佳抗氧化剂及其浓度为Vc 15 mg/L。[结论]抗氧化剂的类型及浓度在抑制银杏愈伤组织褐化过程中起关键作用。     

几种影响沙棘组织培养外植体褐化因子分析

为解决沙棘组织培养中易褐变死亡的问题,本研究通过对沙棘组织培养中外植体取材类型、无机盐浓度、光照和培养温度、不同的6-BA浓度、转接周期、培养基硬度以及活性炭7种影响外植体褐化因子进行分析。结果表明:选取沙棘水培2周以后休眠芽做外植体褐化率与取1年生枝条和2年生枝条作外植体的褐化率之间差异显著;使用1/4MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L的低盐和低6-BA浓度的培养基可以降低褐化且促进植株生长;接种后进行5 d的低温暗处理可以推迟褐变产生的时间,褐化率降低30%左右;在培养基中加入6～7 g/L的琼脂可使褐化率降低为12.67%,接种后在没有出现褐变物质前转接一次,然后慢慢延长转接时间比每14 d转接一次降低了30%,比每25 d转接一次降低了50%左右;附加1～2 g/L的活性炭可以减小褐变物的直径,推迟褐变始出物出现的时间,进而降低褐化率。     

手掌参组织培养中外植体褐化的影响因素研究

为降低手掌参组培过程中外植体的褐化程度,从表面消毒剂和消毒时间、活性炭和VC的使用、暗培养、光照强度、转瓶间隔时间等方面对手掌参外植体的抗褐化方法进行了探索,以期为建立高效稳定的手掌参再生体系提供依据。结果表明:手掌参的芽部用75%酒精表面消毒20s→无菌水冲洗2次→用0.1%升汞消毒处理10min→无菌水冲洗6次→接种于MS+KT 0.5mg/L+ZT 0.5mg/L+NAA 1.0mg/L+AC 1.0g/L+VC2.0mg/L培养基中→暗培养5～10d(3d转瓶1次)→2 000lx光照条件下培养,其生长良好,褐化程度大大减轻,褐化率由93.33%下降为48.28%。     

Thidiazuron等植物生长调节剂对水稻(Oryza sativa L.)愈伤组织不定芽分化的影响

建立高效的植株再生体系是遗传转化的重要基础。以北方主栽水稻品种为试材 ,将 Thidiazuron(简称TDZ)应用于水稻愈伤组织的不定芽分化研究 ,探讨了 TDZ等植物生长调节剂对水稻愈伤组织不定芽分化和生长的影响。结果表明 ,TDZ显著促进水稻愈伤组织的不定芽分化 ,其细胞分裂素活性均大大高于 KT和 6 - BA,最佳使用浓度仅为 KT和 6 - BA的 1/ 10～ 1/ 2 0。不同 TDZ浓度对不定芽的分化效率在不同品种上有差异 ,东农 4 2 1品种在浓度为 0 .10 m g· L- 1时诱导效率最高 ,平均芽数达到 7.7个 /块 ,诱导效率达到 5 5 8.30 % ;东农 92 - 11品种在浓度为 0 .2 0 m g· L- 1时效果最佳 ,平均芽数为 7.9个 /块 ,分化效率高达 5 5 3%。高浓度的 TDZ有一定的毒害作用 ,导致愈伤组织褐化 ,诱导的不定芽出现矮化、叶片卷曲、玻璃化等现象     

银杏幼胚培养的多因子正交试验研究

以MS为基本培养基,选用银杏幼胚为试验材料,采用L9(34)正交设计分析比较2,4-D(A因素)、6-BA(B因素)、酸水解酪蛋白(CH,C因素)3个因素及其组合对银杏幼胚愈伤组织诱导率、褐化率及生长量的影响。结果表明:2,4-D 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+CH 500mg/L组合银杏的幼胚愈伤诱导率最高,为100%,同时该组合处理愈伤组织生长量也最大,增长倍数达8.11倍;而2,4-D 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L组合褐化率最高,为60.3%。经直观分析、方差分析和主因素效应的多重比较后认为,3个因素中,2,4-D对银杏幼胚愈伤诱导率及褐化率的影响最大,极差分别为74.196和63.702;CH对银杏幼胚愈伤生长量影响最大,极差为2.148。银杏愈伤组织诱导及生长的培养基最优组合为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+CH 500mg/L。     

培养基、蔗糖和激素对苜蓿花药愈伤组织诱导的影响

为了提高苜蓿花药培养愈伤组织诱导率,以小孢子发育处于单核赤边期中期到单核靠边期的花药为材料,对不同基本培养基、蔗糖浓度和激素配比对花药愈伤组织诱导的影响进行了研究.结果表明,以改良Mitsch2为基本培养基,附加2,4-2、6-BA 0.5 mg/L、蔗糖6;～9;,可以获得较高的诱导率.培养基中的蔗糖浓度和激素配比影响愈伤组织的生长速度和褐化率.