高毒力杀蚜真菌菌株筛选

蚜虫是同翅目胸喙亚目的一个重要类群 ,发生种类多 ,数量大 ,繁殖速度快 ,危害威胁重。到目前为止 ,全世界已知蚜虫近 4 0 0 0种 ,绝大多数是农作物害虫。蚜虫的危害不仅是直接刺吸植物汁液、分泌蜜露影响植物的光合作用和蒸腾作用 ,更主要的蚜虫是多种植物病毒的传播媒介。因此 ,开展蚜虫的防治工作意义重大。长期以来 ,蚜虫的防治主要是大面积使用化学农药。然而 ,单一使用化学农药 ,结果使大量天敌被杀伤 ,破坏了天敌与蚜虫的消长关系 ;蚜虫抗药性产生 ,且随着用药次数和用药量的增加而交替上升。另外 ,大量使用化学农药还存在环境污染和…     

我国杀虫真菌的研究现状与展望

杀虫真菌在杀虫微生物中所占种类最多,分布于真菌的各个亚门,据1991年统计,世界上已记载杀虫真菌约100属800多种。我国杀虫真菌资源极为丰富,目前已报道的杀虫真菌,已达405种,其中虫草属(Cordyceps)80种,捕食和寄生线虫真菌10种,寄生昆虫真菌215种,报道的新种达24种。我国自50年代以来,开发应用的杀虫真菌共20种(表),其中以白僵菌和绿僵菌产量最大,防治面积最广。本文拟就我国杀虫真菌现状,存在的主要问题和解决途径等方面进行探讨。     

对小猿叶甲高毒力烟曲霉菌株的选育技术

大猿叶虫（Colaphellus bowringi Baly）和小猿叶虫（Phaedon brassicae Baly）均是南方十字花科蔬菜主要害虫之一,宁波地区8—11月,其在十字花科蔬菜上为害比菜青虫（Pieris rapae）、小菜蛾（Plutella xylostella）严重。目前十字花科蔬菜上大量应用的生物农药Bt、阿维菌素对菜青虫、小菜蛾具较好防治效果,但对大、小猿叶虫基本无效。大、小猿叶虫的发生规律同菜青虫、小菜蛾不一样,幼虫、成虫常常隐蔽在蔬菜的根部、菜心和土中,菜农只能依靠多次喷化学农药如毒死蜱＋敌敌畏控制它们的危害。我们从田间筛选到女贞潜叶甲生曲霉菌株,经初步鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus vat．fumigatus）（暂称叶甲生烟曲霉）。室内试验后发现,该菌株培养液能使大、小猿叶虫幼虫、成虫,女贞潜叶甲（Argapistes tsekooni）幼虫、菜青虫幼虫和夜蛾的幼虫发病死亡。通过化学、物理诱变选育对害虫的高毒力菌株已有报道。我们利用物理诱变和化学诱变方法选育对大、小猿叶虫有高毒力的烟曲霉菌株。现将结果报道如下。     

苏云金杆菌高毒力菌株4．0718的快速选育

从湖南省不同生态区域的旱作地，果园和稻园采集的858份土样中，分离筛选出苏云金杆菌30株。选取一株具典型苏云金杆菌菌落特征和较高杀虫毒力的菌株701^2c为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数量及芽孢与伴孢晶体的比例与杀虫菌株4．0718。该突变株杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％、97％和100％。此菌株的高效速效杀虫毒力经连续10代培养能稳定遗传。     

快速筛选苏云金杆菌高毒力菌株的有效方法

对7株苏云金芽孢杆菌菌株进行了cry 1基因检测、晶体形态观察、晶体蛋白SDSPAGE以及杀虫活性检测。结果表明，综合菌株的PCR结果、晶体形态和晶体蛋白图谱结果可以预测其杀虫特性。根据菌株预测的杀虫特性进行有目的的生物测定，可以快速、准确地筛选到对特异害虫具高毒力的菌株。     

代谢产物具杀虫活性的红树林真菌1893菌株培养条件的研究

本课题组从香港海域红树林中筛选获得的一株真菌菌株,代号1893,初步研究发现其粗提物对许多重要害虫具有很高的毒杀活性,具有开发成新型杀虫剂的良好前景。为得到该菌株产生较高杀虫活性物质的最佳培养条件,采用单因素法对影响其生长和所产代谢产物活性的温度、起始pH、发酵时间、装液量等因素进行了测定,利用SAS软件进行模拟优化,得出该真菌的最适发酵条件为:温度26.8℃,起始pH6.5,培养时间17天,当在500mL三角瓶中接种生长一致的直径5mm菌饼一块时,其装液量以200mL为最佳。同时发现发酵液pH值和杀虫活性具有相同的变化趋势,二者的相关性系数R2达到0.93972,由于pH值的检测要比杀虫活性的检测简单快捷得多,建议在实际培养该菌的过程中,可以通过检测发酵液的pH值来预估发酵液的杀虫活性大小。该研究为进一步将红树林真菌1893研发成高效、广谱、无公害、低成本的新型海洋生物杀虫剂打下基础。     

几株真菌代谢产物的杀虫效果试验简报

本试验选用真菌拟青霉、镰刀菌等属的１５个菌株的代谢产物，对小莱蛾、菜青虫进行室内防效试验。结果发现，环链拟青霉１８０＾＃、蝉拟青霉２０＾＃、砖红镰刀１２７＾＃、嗜蚧镰刀１２３＾＃对小菜蛾的较好的防效，致死率在２７．９－９３．１％之间；粉拟青霉２５＾＃、１６２＾＃，环链拟青霉１８０＾＃，砖红镰刀１２７＾＃，雪腐镰刀孺孢变种１７６＾＃对菜青虫的防效在３８．３－８９．１％之间。     

苜蓿根瘤菌优良菌株的选育

苜蓿是一种营养丰富,含蛋白质高的优良牧草,适应性强,抗旱,抗寒能力强,而且耐盐碱,产量高,不仅是各类家畜的优质饲料,也是很好的绿肥作物。为了提高它的产量,选育出适于新疆自然条件下侵染力强,固氮活性高,适应性广的优良菌株,我们在1988年做了苜蓿根瘤菌优良菌株的选育。     

红果米仔兰杀虫活性成分及毒力的初步研究

为探索楝科植物红果米仔兰的杀虫活性,本以生物活性跟踪法对该种植物的叶的活性成分进行了初步研究,并测定了活性物质对斜纹夜蛾幼虫的毒力。叶的甲醇抽提物活性高于氯仿抽提物和石油醚抽提物。甲醇抽提物经氯仿萃取,所得萃取物通过柱层析,分离得到的４号流份Ｆ４有最高活性。Ｆ４对斜纹夜蛾４龄幼虫的拒食中浓度（ＡＦＣ５０）为０．１２％,致死中浓度（ＬＣ５０）为０．１３％,抑制生长发育中浓度（ＥＣ５０）为０．２１％。     

对草地贪夜蛾高毒力的苏云金杆菌菌株筛选

筛选对草地贪夜蛾高毒力Bt菌株,对于开发绿色高效防治草地贪夜蛾新产品具有重要意义。本研究从自行筛选的对夜蛾科害虫高毒力的Bt菌株资源中,选取9株菌株进行草地贪夜蛾室内毒力测定,并对高毒力菌株进行杀虫基因分析;选取室内毒力测定活性最高的3株菌株进行田间小区药效试验。结果表明,9株Bt菌株在药后7 d对草地贪夜蛾初孵幼虫均表现出显著的毒杀效果,LC50范围在0.07~3.38μg/g,其中毒力最高的3个菌株分别是KN50、KN11和KNR8,LC50分别为0.07、0.23和0.43μg/g,表现非常显著的致死效果;对KN50、KN11和KNR8等6种高毒力的Bt菌株的杀虫基因分析发现,他们都含有vip3Aa、cry2Ab、cry1Ac、cry1Ia杀虫基因。KN50、KN11和KNR8菌株的32000IU/mg制剂在田间对草地贪夜蛾表现出不同程度防效,其防效高低与室内毒力结果一致,其中KN50药后7 d防效最高,在200和400 g/667 m2下对1~3龄幼虫防效分别可达86.09%和95.22%,对不同龄期幼虫混发的防效为72.61%和86.59%。因此KN50、KN11和KNR8这3个菌株能作为备选高效菌株用于防治草地贪夜蛾新产品开发,为实现草地贪夜蛾的绿色防控、化学农药合理减替提供重要保障。     

产杀虫抗菌单端孢霉烯族毒素海绵真菌Myrothecium verrucaria Hmp-F73的筛选和鉴定

从98株分离自大连海域繁茂膜海绵Hymeniacidon perleve共附生的真菌中,筛选得到具有较强杀虫抗菌活性的丝状真菌Hmp-F73。96孔板卤虫生物检测（brine shrimp assay,BSA）结果显示,该菌株发酵滤液甲醇提取物浓度为0.25μg.mL-1时,卤虫校正死亡率为100%;甲醇提取物经硅胶柱层析洗脱得到7个馏分,其中馏分3浓度为400μg.mL-1时对甜菜夜蛾具明显抑制取食活性,拒食率达到85.25%;1mg.mL-1的馏分6对玉米纹枯病菌Rhizoctonia solani抑菌圈直径达9.25mm。经色谱柱层析分离纯化得到4个杀虫抗菌活性化合物,氢核磁数据显示这些化合物均属于12,13-环氧单端孢霉烯族化合物。通过形态、培养特征及ITS1-5.8S-ITS2序列分析,将该菌株鉴定为疣孢漆斑菌Myrothecium verrucaria。     

马铃薯块茎蛾幼虫致病黏质沙雷氏菌的分离鉴定及杀虫活性

从马铃薯田自然罹病马铃薯块茎蛾幼虫上,分离到1株对马铃薯块茎蛾幼虫具有较强致病作用的菌株ML-1,通过形态及16S rRNA序列测定分析,确定该菌株ML-1为黏质沙雷氏菌Serratia marcescens。采用饲喂法分别测定了该菌株ML-1菌悬液、发酵液及发酵上清液对马铃薯块茎蛾初孵3日龄幼虫的毒力。结果表明,用ML-1菌悬液、发酵液及发酵上清液饲喂后第7 d时,马铃薯块茎蛾3日龄幼虫的累积校正死亡率分别为63.16%、80.70%和49.12%,在3.0×10⁹ cfu/mL浓度下的LT₅₀分别为4.71、3.04和6.47 d,在发酵液处理后第3、5和7 d的LC₅₀分别为9.784×10¹⁰、1.855×10⁸和5.434×10⁵ cfu/mL。综上所述,黏质沙雷氏菌ML-1菌株对马铃薯块茎蛾幼虫有较强的毒力,在马铃薯块茎蛾绿色防控中具有一定的开发潜能。     

Inoculation of Lupinus luteus with White Root Rot Fungus, Rosellinia necatrix, to Estimate Virulence

An inoculation method using Lupinus luteus was developed for estimating virulence of isolates of the white root rot fungus, Rosellinia necatrix Prillieux. Fungal cultures grown on pieces of mulberry twigs were placed in contact with the hypocotyl of 3-week-old seedlings growing in pots of soil. Disease development was uniform and reproducible in repeated experiments. Of 24 isolates with double-stranded RNA, eight were weakly virulent. This method is useful throughout the year for estimating virulence of many isolates of the fungus and for screening for hypovirulent isolates. Received 2 March 2001/ Accepted in revised form 25 May 2001     

Virulence Variation and RAPD Polymorphism in African Isolates of Phaeoisariospis griseola (Sacc.) Ferr., the Causal Agent of Angular Leaf Spot of Common Bean

Fifty four isolates of Phaeoisariopsis griseola, the agent of common bean angular leaf spot disease from the Great Lakes Region of Africa, were characterised according to their virulence behaviour and their molecular patterns. Virulence properties were revealed through the inoculation of 29 genotypes of Phaseolus vulgaris, Phaseolus coccineus and Phaseolus polyanthus. Differences in reaction types revealed high variability among these isolates. Most of them, even when collected within the same location, showed differences in their respective reactions on many plant genotypes. For molecular typing, RAPD amplifications were performed for each isolate using five random primers. Isolates with different patterns were collected within one region. Simultaneously, similar molecular patterns were found in isolates collected at different sites. However, the average of molecular similarity, based on the percentages of shared bands for each isolates pair, was higher among isolates collected within one site. No direct correlation between molecular pattern and pathotype was observed.     

甘肃南部小麦白粉菌群体的毒性及多基因片段分析

 为了解甘肃小麦白粉病菌的毒性变化动态及其群体遗传结构,利用毒性监测及多基因家系法,对采自甘肃省大陇南地区陇南、天水两市的49个小麦白粉菌的单孢子堆分离物进行群体遗传结构研究。毒性监测结果显示:供试菌株对抗病基因Pm12、Pm16、Pm18、Pm21的毒性频率均低于10%,表明上述抗病基因可以在育种和生产中继续使用;近些年定名的抗病基因Pm23、Pm25、Pm30、Pm34、Pm35的毒性频率为35%～95%,并在陇南、天水两市间存在差异,说明这些基因的利用需要慎重;对Pm4b的毒性频率已大幅度上升;在相似系数为0.752时,除11号菌株之外,其余聚为四类。选择AOX、EFA、PKA、PPA、TUB五个基因片段对供试菌株的多基因家系分析表明:基因序列聚为两类,病菌在陇南、天水两市间及各县市间存在传播。甘肃省大陇南地区病菌毒性多态性较高;白粉菌在各地区间存在交流的同时,也存在一定的独立进化。     

草地贪夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾的毒力及其侵染特征

为明确草地贪夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus,SfMNPV）对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda 的毒力及其体内外侵染特性,于室内测定SfMNPV对草地贪夜蛾的毒力,采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色分析SfMNPV侵染后草地贪夜蛾的组织病理学特征,通过实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR）技术分析SfMNPV在草地贪夜蛾体内和Sf9细胞系中的复制特征。结果表明,SfMNPV对草地贪夜蛾2龄幼虫的LC₅₀和LT₅₀分别为7.39×10⁵ OBs/mL和3.82 d;SfMNPV可侵染草地贪夜蛾幼虫的真皮、气管、脂肪体和中肠等组织,未侵染肌肉组织;SfMNPV侵染96 h后草地贪夜蛾体内SfMNPV基因组拷贝数最大,为3.91×10⁶ 拷贝数/ng,SfMNPV侵染96 h后Sf9细胞培养上清液中SfMNPV基因组拷贝数最大,为2.08×10⁷ 拷贝数/mL。     

一株对金龟子类幼虫具有杀虫活性的苏云金杆菌新分离株

从河北省土壤中分离获得一株苏云金杆菌新分离株ＨＢＦ－１,对其基本生物学特性和知性进行了研究。结果表明,该菌株对黄褐丽金龟幼虫具有特异高杀虫活性,对铜绿丽金电幼虫也表现出较高的杀虫活性。但对棉铃虫和玉米螟等鳞翅目幼虫,以及鞘翅目叶甲科的柳叶甲无杀虫活性。该菌株不产生β－外毒素。其生长对氨基酸需求的测定结果表明,异亮氨酸可抑制缬氨酸和亮氨酸的生物合成代谢,在异亮氨酸的存在下,该菌株对缬氨酸和亮氨酸具有     

木耳菌糠培养球孢白僵菌的条件筛选及优化

白僵菌是一种虫生真菌,目前在农林害虫防治中取得了明显的效果。为了进一步促进白僵菌农药的发展,开发低成本的白僵菌发酵方法或优化其发酵条件是不可缺少的一环。本文尝试以木耳菌糠作为主要培养基液体发酵球孢白僵菌,通过单因素试验和正交试验确定菌糠培养基配方并优化发酵条件。结果表明,废弃菌糠适宜作为球孢白僵菌的主要培养基,当料液比为1:4,补充0.3%硫酸锰、0.5%硝酸铵,接菌量10%,培养温度为25℃,培养时间为4 d时,球孢白僵菌的产孢量达到了2.0×109个孢子/mL。研究证实了木耳菌糠培养球孢白僵菌的可行性,希望为低成本发酵其他生防菌提供新思路。     

玫烟色棒束孢的遗传变异性及其芽孢子生产

本文评述了近年来在杀虫真菌玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea Wize研究中的一个热点问题:遗传变异性与菌株的毒力、产品质量监控以及田间应用效果等方面的密切关系.同时介绍了一种有实用性的现场或家庭作坊式生产芽孢子的方法和相关制剂载体的研究.