砂糖橘和砂糖灯笼橘性状差异的转录组分析

【目的】通过比较砂糖橘和砂糖灯笼橘性状差异及利用转录组测序数据,筛选砂糖橘和砂糖灯笼橘叶、果肉、橘络、橘皮之间的差异基因,探究砂糖橘自然变异品种砂糖灯笼橘橘皮、叶中与蜡质生物合成相关的显著差异基因。【方法】分别取同一生长时期的砂糖灯笼橘和砂糖橘进行观察记录,取叶、果肉、橘络、橘皮4个组织样本,液氮速冻,设立3个生物学重复进行转录组测序。分析2个物种间的转录组测序结果,寻找关键差异基因。【结果】通过砂糖灯笼橘与砂糖橘对比,砂糖灯笼橘叶较大、卷曲,边缘性状不规则;果实偏大,果皮表面布满沟壑,存在较多点状突起,同时叶和果皮部位存在蜡质缺失。砂糖灯笼橘叶存在差异基因数量最多,其次为果肉、皮、橘络,差异基因主要参与的功能为蛋白结合、分子结合、ATP结合。砂糖灯笼橘叶、果皮分别存在12个、9个与蜡质生物合成相关的显著差异基因,其中包含5个相同的下调基因,为CER1、CER3、HHT、P45086A8、P45086A22,这些基因极有可能是导致砂糖灯笼橘表面蜡质排布不均的关键基因。【结论】砂糖橘与砂糖灯笼橘性状差异明显,转录组数据显示叶的差异基因数量最多,其中叶和果皮中存在5个表达趋势一致的相同蜡质...     

砂糖橘上碎叶病毒外壳蛋白基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR技术对广东砂糖橘碎叶病毒的外壳蛋白(CTLV-CP)基因进行了克隆和测序分析。DNA序列分析表明,砂糖橘CTLV-CP基因的cDNA序列全长为786bp,编码262个氨基酸。BLAST分析结果显示,所得序列与苹果、梨茎沟病毒(ASGV)外壳蛋白基因及其它柑橘CTLV-CP基因的同源性在87%～91%,证明所克隆的片段为CTLV-CP基因。     

广西恭城砂糖橘俏销

2012年12月3日．在广西壮族自治区桂林市恭城瑶族自治县观音乡水滨村茶园屯,农民在精选外销砂糖橘。     

‘砂糖橘’滴灌施肥效果的研究

以传统常规施肥模式为对照,研究了‘砂糖橘’滴灌施肥的效果。结果表明,在比常规(开沟和撒施)施肥氮、钾用量分别减少42.9%、41.9%的情况下,滴灌施肥处理‘砂糖橘’果实品质与对照无差别,产量比对照略有增加,试验3年全园产量比试验前明显提高。滴灌施肥处理土壤N、K含量在适量范围,P、Mn含量处于过量水平,Ca和Mg含量处于低量水平,其他微量元素含量处于适量范围;叶片P、K含量处于适量范围,N处于低量水平,Ca、Mn含量偏高,Mg、Zn、B含量在适量范围。滴灌施肥处理施肥用工量比常规节省66.8%,每667 m2劳动力成本和肥料成本比对照节约128.92元。     

柑橘新品种砂糖灯笼橘的选育

砂糖灯笼橘是由传统砂糖橘芽变单株选育而成的新品种。果面橙红色,表面凹凸有致,纹络分布均匀,果实呈扁球形,极易剥皮。平均单果质量41.60 g,果形指数0.69,无籽。果肉甜脆爽口,水分足,极化渣,可溶性固形物含量（w,后同）为13.80%,总酸含量为0.39%,总糖含量为10.80 g·100 g-1,维生素C含量为30.30 mg·100 g-1,可食率为69.40%。叶片有轻度扭曲,呈斑驳状绿化,叶偏小,有浅绿深绿两种颜色,叶片不对称。在广西梧州成熟期为12月初,早结丰产稳产,植株抗病性很强,极易管理。采用SSR分子标记对砂糖灯笼橘遗传鉴定表明,砂糖灯笼橘与传统砂糖橘在DNA水平上存在差异,品种区试生物学特性观察结果证明,该品种具备稳定性、一致性、特异性。砂糖灯笼橘适合我国砂糖橘产区栽培,成熟期较砂糖橘提前25 d。     

干旱胁迫对砂糖橘树体营养的影响及其与成花的关系

 为了探讨干旱胁迫对砂糖橘（Citrus reticulata‘Shatangju’）树体营养的影响及营养与成花的关系,设置了不同干旱胁迫时间（0、2、4、6、8周）和不同氮素水平（每次每盆单独施N︰P₂O₅︰K₂O为15︰15︰15的复合肥5 g和另外加尿素6 g两水平）两因素进行盆栽试验研究。结果表明,干旱胁迫4周后树体氮素和钾素增加,而非结构性碳水化合物糖和淀粉呈下降趋势,磷素无明显变化,树体中C/N,P/N与对照相比降低。各养分含量及相互比率在干旱胁迫4周左右存在一个明显拐点,且与砂糖橘的成花时间表现高度一致。每枝成花数量和氮素及钾素有显著正相关关系,和C/N呈负相关关系,而和树体磷含量无显著相关关系。在正常供水情况下不同营养状况砂糖橘均未成花,但在干旱胁迫情况下氮素、钾素以及C/N和成花特性间有很好的相关关系。     

草莓FaCBF1基因的克隆及表达分析

据《园艺学报》2014年第2期《草莓FaCBF1基因的克隆及表达分析》（作者张勇等）报道，以“丰香”草莓为试材进行基因克隆，并通过SON—PCR结合RT—PCR技术检测了该基因在低温胁迫和其他环境胁迫下的诱导表达特性。     

冷害导致砂糖橘果实品质劣变

 将砂糖橘（Citrus Reticulata Blanco CV. Shiyueju）果实置于1℃、3℃、6℃和9℃下贮藏,比较其贮藏效果及冷害对果实品质的影响。结果表明：砂糖橘最适贮藏温度为6℃,在1~3℃温度贮藏易发生冷害。冷害导致果实外观品质下降,果肉乙醛和乙醇含量累积,果肉异味,品质下降。1℃贮藏果实的呼吸强度和乙烯释放速率较6℃高,丙二醛（MDA）含量增加,丙酮酸脱羧酶（PDC）和乙醇脱氢酶（ADH）活性大幅度提高。说明在冷害温度下,砂糖橘果肉异味是由于乙醛和乙醇累积,而果实呼吸强度的提高与PDC和ADH活性的增加密切相关。     

两种砧木对砂糖橘磷素累积消耗量的影响

采用以酸橘、枳为砧木的成年砂糖橘树作为供试材料,通过对各器官各部位磷素营养水平的分析,研究磷素累积消耗的特点与规律。结果表明：1、砂糖橘不同器官的磷素累积消耗量存在差异,以枝条的累积消耗量最大;除枝条外,不同砧木砂糖橘的相同器官中磷素累积消耗量差异不显著。2、两种砧木砂糖橘地上部的磷素累积消耗量均显著地高于地下部。3、砂糖橘地上部和地下部各器官不同部位的磷素累积消耗量存在一定差异,但不同砧木对地上部和地下部器官各部位的磷素累积消耗量影响不大。4、砂糖橘各级侧枝木质部与韧皮部的磷素累积消耗量存在一定差异,不同砧木砂糖橘之间也不相同。     

香石竹水孔蛋白基因的克隆及表达分析

以香石竹(Dianthus caryophyllus)‘马斯特’为试验材料,在分析香石竹和石竹转录组数据的基础上克隆得到10个水孔蛋白(AQP)基因,7个属于PIP亚家族,3个属于TIP亚家族;其中DcaAQP1、DcaAQP2、DcaAQP3、DcaAQP4、DcaAQP6、DcaAQP8和DcaAQP10在萼片中优势表达,DcaAQP5在茎和花瓣中优势表达,DcaAQP7在叶中优势表达,DcaAQP9在各个组织中表达均比较低;在切花开放萎蔫过程中,DcaAQP1、DcaAQP3和DcaAQP6的表达量从花蕾期开始升高,半开期达到最高,DcaAQP4、DcaAQP7、DcaAQP9和DcaAQP10在盛开期表达量达到最高;DcaAQP2在花蕾期表达量最高,DcaAQP5在开始萎蔫期表达量达到最高,表明多个AQP基因协同作用来维持切花开放萎蔫过程中花瓣细胞水分吸收和营养物质转运。     

砂糖橘周年管理工作历

中心工作：促花芽分化和控制冬梢。 物候期：花芽形态分化期。     

不同树龄砂糖橘幼果期果实养分的变化研究

以砂糖橘为试材,研究了5年生和9年生树幼果期（坐果期至果实膨大期）单果干重,果实氮、磷、钾含量和单果氮、磷、钾累积量的变化。结果表明,5年生树幼果期单果干重显著大于9年生树;两种树龄果实氮、磷含量均随着果实的生长发育明显降低,而钾含量则先降低再升至恒定水平;单果氮、磷、钾累积量均随着果实的生长而迅速增加,5年生树钾累积量显著大于9年生树。     

砂糖橘结果树修剪技术

砂糖橘进入结果期后,树冠不断扩大,分枝级数增加,发梢力越来越弱,加上枝密集丛生性强,更加速枝条的衰退,内膛枝因光照弱而成枯枝,由立体结果渐成平面结果,产量也随之下降。修剪是通过充分利用光照,调节生长和结果的矛盾,提高产量和延长结果年限的技术措施。     

枸杞酸性转化酶基因的克隆及组织表达分析

以"宁杞1号"枸杞为试材,通过RT-PCR及RACE技术进行枸杞酸性转化酶基因的克隆及组织表达分析,并运用MEGA 5.0软件对植物转化酶基因进行了系统树分析。结果表明:扩增获得2 193bp的枸杞酸性转化酶基因,命名为LbSAI(GenBank:KC776575),该基因推导氨基酸序列与马铃薯、番茄、梨等酸性转化酶基因氨基酸序列同源性为68%~100%;LbSAI编码的蛋白质属于液泡酸性转化酶;Real-time PCR表达分析显示,LbSAI基因在枸杞花中表达量最高,在根中表达水平较低。     

延边苹果梨PyDFR基因的克隆及表达分析

以延边苹果梨果实为试材,采用同源克隆及实时荧光定量PCR的试验方法,研究PyDFR基因在果实着色过程中的表达特性及其与花青苷积累的关系。结果表明:PyDFR基因cDNA全长1 039bp,推断其含有1个843个核苷酸的开放阅读框(ORF),编码281个氨基酸,推导的蛋白分子量为32kDa,理论等电点pI为6.32。同源性分析表明,PyDFR基因与沙梨的(JQ749637.1)DFR基因的同源性高达99%;实时荧光定量PCR分析表明,PyDFR基因受到光诱导表达量迅速上升,去袋后1d即达到最大值,随后迅速下降,最终稳定在同一表达水平,与果实着色和花色苷含量测定的结果相对应,即PyDFR基因对果实花色素苷积累有一定的促进作用。     

砂糖橘幼年树的管理技术

砂糖橘苗木种植后2~3年未结果的树称为幼年树。幼年树管理以扩大树冠为主要目标,果园要做好土、肥、水管理,培养分布广而密的根系。平地、水田果园亦需勤施、薄施肥,培育好根群;并需采用抹芽放梢技术,培育好各次枝梢,做好病虫害防治,护梢保叶,为早结果丰产打下基础。     

茶树LEAFY基因的克隆和表达分析

以茶树（Camellia sinensis）大叶且无蕾不开花的突变体‘大叶龙’及其母株为材料,通过同源克隆结合RACE-PCR方法,克隆了LEAFY（LFY）同源基因的全长cDNA序列,两种序列分别命名为CsLFL1和CsLFL2,其cDNA全长分别为1 448和1 466 bp,各自包含1 191和1 197 bp的完整开放阅读框,编码396和398个氨基酸。它们与漆树科、无患子科以及壳斗目（山毛榉目）一些物种的LFY同源序列具有77% ~ 79%的一致性,具有植物LFY成员作为转录因子的脯氨酸富集区、亮氨酸重复、酸性和碱性结构域以及保守的C–端等典型结构特征。系统发育分析表明,它们属于双子叶植物LEAFY分支,并且亲缘关系最近,说明两者的形成是发生在茶树物种进化过程中较晚期的复制事件。两种序列在正常开花母株及‘大叶龙’中没有区别,在母株花芽中强烈表达,在母株和‘大叶龙’叶芽中有微弱表达。这些结果说明CsLFL1和CsLFL2代表了茶树中LFY的同源基因,并且可能参与茶树的成花启动过程。     

芋淀粉合成酶AGPase基因的克隆及表达分析

通过对‘靖江香沙芋’转录组数据进行功能注释,克隆获得‘靖江香沙芋’淀粉合成酶AGPase的基因,序列全长为1 596 bp,命名为CeApS1（NCBI：Colocasia KU288757,未公布）。该基因编码532个氨基酸,蛋白含有1个NTP_transf_3结构域（Gly¹⁰⁴ ~ Pro³⁰⁶）和1个PbH1结构域（Gly⁴⁷³ ~ Ser⁵¹⁵）,编码产生AGPase小亚基,等电点和分子量分别为6.73和57.6 kD。ApS1在单子叶和双子叶植物中广泛存在,CeApS1与紫萍（AIZ00992.1）中相应蛋白的亲缘关系最近,相似性为83.4%,与草莓（AAS00541.1）、苜蓿（XP_003617925.1）、水稻（AAK27313.1）和小麦（CAA46879.1）等植物中相应蛋白的亲缘关系较远。CeApS1在‘靖江香沙芋’的母芋和子孙芋中表达量较高,在叶片、叶柄和根中低表达。芋球茎中的CeApS1表达水平与球茎发育密切相关,在播种160 d后达到最大值。该基因的表达模式与球茎淀粉含量的积累显著正相关。     

蜡梅快速碱化因子基因CpRALF 的克隆及表达分析

 通过随机克隆测序的方法从蜡梅花cDNA文库中获得快速碱化因子基因,命名为CpRALF（GenBank登录号为：JQ217379）。扩增获得的DNA序列与cDNA序列一致,表明该基因不具有内含子,包含一个384 bp的最大开放阅读框,编码一个长127个氨基酸的蛋白质。蛋白质序列同源比对发现其含有快速碱化因子特有的YIXY、YXRGC和4个保守的半胱氨酸以及双精氨酸结构。实时荧光定量PCR分析表明该基因在蜡梅茎、根和盛开的全花中表达量较高;在花发育过程中,蕾期和衰败期表达丰度高。在对蜡梅幼苗进行高温、低温、高盐、重金属4种非生物胁迫处理后,通过实时荧光定量PCR对CpRALF在幼叶中的表达量进行分析,结果表明高温、高盐和重金属能够促进该基因表达,而低温则抑制该基因的表达,且CpRALF对高盐与重金属胁迫的响应比对高温和低温胁迫的响应更为显著和迅速,表明该基因可能在蜡梅花发育以及非生物胁迫反应响应方面发挥作用。     

牡丹病程相关蛋白1基因的克隆及表达分析

 以牡丹柱枝孢叶斑病病原菌Cylindrocladium canadense处理的牡丹‘鲁菏红’叶片为材料,根据已发表植物PR1的保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR和RACE技术,获得病程相关蛋白1基因的cDNA,命名为PsPR1。该序列全长为744 bp,5′和3′非翻译区分别有42 bp和225 bp。该基因有477 bp的开放阅读框（ORF）,编码158个氨基酸,成熟蛋白分子量14.8 kD,等电点（pI）6.19,具有典型的SCP_PR1_like保守结构域。通过Blast比对发现该基因与多种植物病程相关蛋白1基因具有高度同源性。通过实时荧光定量PCR检测,发现该基因在牡丹萼片中相对表达量最高,在正常生长的叶片中最少。该基因受病原菌C. canadense和信号物质SA的显著诱导,分别在处理的24 h和12 h达到最高峰,说明PsPR1可能参与了牡丹的抗病防御过程。