鸡源多重耐药沙门菌转座子与耐药基因的研究

为了解鸡源性沙门菌分离株多重耐药情况与转座子及耐药基因的携带关系,采用K-B纸片法对23株鸡源性沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR对分离菌株进行转座子及耐药基因检测。结果显示,23株分离株中有10株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,其中四环素-氨苄西林-甲氧苄啶-诺氟沙星-庆大霉素-环丙沙星是主要多重耐药谱;10株多重耐药菌中有8株分别携带不同种的转座子(tnpA、tn1721、tnp513、IS26),其中以转座子tnpA、tn1721和IS26的检出率最高,耐药基因中以blatem-1、tetA和tetB的检出率最高,携带转座子多的菌株中耐药基因检出率较高且耐药谱广。结果表明沙门菌多重耐药性与转座子的携带之间关系密切,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。     

昆明市鸡源大肠埃希菌耐药基因的流行特征研究

为了解昆明市区农贸市场鸡源大肠埃希菌耐药基因的携带情况,采用PCR技术对140株鸡肝中大肠埃希菌的22个耐药基因进行了检测。研究表明,140株大肠埃希菌中TEM和Gyra(QRDR)基因检出率最高为100%;aph(3)-Ⅱa基因的检出率最低为22.86%,且13个耐药基因检出率在50%以上。呈贡区、官渡区、盘龙区、五华区、西山区检出率最低的耐药基因分别为aph(3)-Ⅱa、OXA、tetB和OXA、SHV、aac(3)-Ⅱa基因。研究结果可为大肠埃希菌病的临床用药提供理论指导,为公共卫生安全提供参考依据。     

75株蛋鸡源沙门菌的MLST分型与耐药性分析

旨在掌握2017年7月至2019年5月期间云南地区蛋鸡源沙门菌血清型、药物敏感性及毒力基因携带等基本情况。无菌采集发病鸡肝组织,共分离到沙门菌75株,对分离株进行MLST分型、药物敏感性及相关耐药基因和毒力基因检测。结果显示,MLST鉴定到ST78序列型鸡伤寒沙门菌54株(72.00%)、ST92序列型鸡白痢沙门菌21株(28.00%);分离株对青霉素的耐药率为100%,对其它抗生素的耐药率分别为: 四环素26.67%、强力霉素26.67%、复方新诺明22.67%、阿莫西林18.67%、氨苄西林16.00%、恩诺沙星14.67%、链霉素8.00%、环丙沙星2.67%、庆大霉素1.33%,共存在7种耐药谱型,28.00%的菌株表现为多重耐药,且集中于鸡伤寒沙门菌;耐药基因tetA、sul2和blaTEM的检出率分别为26.67%、10.67%和8.00%;毒力基因mogA、mgtC、bcfA、araB、stn和spvC的检出率均高达100%,而spvB的检出率为 89.33%。结果表明,鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌为云南地区蛋鸡源沙门菌主要流行血清型,多重耐药情况严重,耐药基因与毒力基因检出率较高。     

江苏省部分地区鸡源沙门菌流行株的分离鉴定

为了解鸡感染沙门菌在江苏省的流行情况以及血清型分布,于2005～2008年期间,对盐城、南通、连云港、淮安、镇江、扬州等地区来院就诊的疑似沙门菌感染鸡的部分病例进行沙门菌的分离培养,获得了18株沙门菌,并进行了血清学鉴定,为本病的诊断及预防控制提供科学依据。     

我国部分地区猪沙门菌的耐药性

以2014-2015年从我国部分省市规模化养殖场中分离的55株沙门菌为对象,选取临床常用的12种抗菌药,用微量肉汤稀释法检测所分离的沙门菌的耐药性。结果显示:测试的12种药物中沙门菌对甲氧苄啶最敏感,耐药率只有1.82%,除此之外对其他11种药物的耐药率均在50%以上,而且对其中的氨苄西林、氟苯尼考、多西环素和四环素等4大类共计7种药物的耐药率在80%以上;在多重耐药性分析方面,1株沙门菌对所有药物完全敏感,另外54株菌的药物耐受数量在5种到11种之间,其中耐受10种药物是所有沙门菌中最大的一类菌株,占总数的30.91%。根据菌株的耐药特点,设计了23对包含各类药物主要耐药基因的引物,用PCR法检测相应耐药菌株对该耐药基因的携带情况,一共检测出了15种耐药基因,其中检出率最高的几种基因分别是sul2基因(检出率78.43%)、sul1基因(检出率60.78%)和tet A基因(检出率72.55%)等。此外,对于耐受喹诺酮类药物的菌株还检测了其耐药决定区域基因gyrA和parC所编码氨基酸的突变情况。测序结果表明,gyrA基因所编码氨基酸序列的第83个位点和第87个位点发生了突变,分别由酪氨酸变成了丝氨酸或亮氨酸、苯丙氨酸,由天冬氨酸变成了天冬酰胺或酪氨酸,parC基因所编码氨基酸序列没有发现突变的情况。     

鸡源性多重耐药沙门菌质粒与耐药性相关性分析

为了解鸡源性沙门菌临床分离株多重耐药情况与质粒的携带关系,采用K-B纸片法对13株鸡源沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感性试验,通过质粒图谱检测耐药菌株质粒携带情况,分析质粒图谱和耐药谱的关系,采用0.5%SDS和43°C对分离菌进行质粒消除,根据质粒消除前后耐药谱的变化,初步对耐药基因进行定位。13株分离菌均表现为多重耐药,大部分菌株为5重及以上耐药,最主要的多重耐药谱是AMP-CIP-OFL-NOR-SXT-TET,分离菌均检测到了质粒的存在。质粒消除后,耐药谱明显变窄,耐药菌株恢复了对大多数药物的敏感性。结果表明,鸡源性多重耐药沙门菌的耐药性与质粒的携带关系密切,初步推断编码四环素、环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星的耐药基因主要存在于质粒上。     

猪源沙门菌流行病学调查与耐药性分析

沙门菌作为常见的食源性病原菌之一,同时是引起断奶仔猪腹泻的重要病原菌之一,我国每年因沙门菌感染所引起的经济损失严重。沙门菌感染通常会导致猪副伤寒,主要特征是严重的系统性疾病,并且可能会导致肠炎或腹泻性疾病。本研究通过收集全国范围内仔猪腹泻样品,对沙门菌进行分离鉴定,了解规模化猪场沙门菌流行情况,同时对沙门菌抗生素敏感性进行分析。从我国16个省份,84个猪场,571份样品中分离得到的128株沙门菌中,发现最常见的血清型是鼠伤寒沙门菌,其次是德尔卑沙门菌、伦敦沙门菌、婴儿沙门菌、韦太夫雷登沙门菌和阿贡纳沙门菌。这些沙门菌的耐药情况严重,尤其是复方新诺明,其耐药率高达100%。     

鸡源印第安纳沙门菌多重耐药性分析

采集山东不同地区鸡源沙门菌,根据Kauffmann-White方法测定分离株血清型,采用肉汤微量稀释法测试分离株对16种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测10种耐药基因,分析耐药表型和耐药基因之间的关系。结果显示：共鉴定出沙门菌80株,其中印第安纳沙门菌60株。药敏试验证实：60株印第安纳沙门菌对阿莫西林-克拉维酸、头孢唑啉、多黏菌素、氨苄西林、多西环素和甲氧苄啶等16种抗菌药物普遍耐药。88.33%菌株多重耐药分布在12~15耐,未发现3耐以下的菌株。PCR扩增出int1,blaTEM,aac（6’）-Ib-cr,floR,catA1,tetA,strA,cmlA 8种耐药基因。超过90%的菌株携带int1,blaTEM,floR和aac（6’）-Ib-cr耐药基因。上述结果表明,耐药表型及耐药基因的符合呈现相关性。     

猪和野生动物源大肠杆菌及沙门菌中磺胺类药物耐药基因的检测

对从四川省10个规模化猪场和16种野生动物的粪样中分离鉴定出的67株大肠杆菌、57株沙门菌进行了药敏试验。结果，猪源和野生动物源分离菌对磺胺类药物的耐药率分别为72．0％（72／100）和29．2％（7／24）。根据GenBank中登录的序列，设计了3对特异性引物，对磺胺类药物的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行了三重PCR检测。在这124株细菌中，Sul1基因的检出率最高，为47．6％（59／124），Sul2基因的检出率为17．7％（22／124），Sul3基因的检出率为18．5％（23／124）。药敏试验结果与基因检测结果的符合率为89．9％。     

55株鸡胚源沙门菌的耐药性分析及ESBLs基因检测

为了解河南省某父母代麻鸡场死胚中沙门菌的耐药情况及ESBL基因流行特征,采集孵化后期死胚120份,通过PCR鉴定及血清分型鉴定,获得了55株沙门菌,包括6种血清型。采用K-B纸片法和双纸片协同测试法进行了药物敏感性及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,并运用PCR法对ESBLs阳性菌株进行了12种动物源沙门菌常见ESBLs基因的检测。结果显示,55株分离株对磺胺异恶唑(76.36%)、氨苄西林(65.45%)、磺胺甲恶唑(54.55%)的耐药情况较严重,对美罗培南、亚胺培南敏感;此外,产ESBLs的菌株有16株,阳性率为29.09%,PCR只检出TEM(100%)一种ESBLs基因,其余11种均未检出;ESBLs阳性菌株的耐药情况明显严重于ESBLs阴性菌株,且多表现为多重耐药。表明种鸡场感染的沙门菌血清型复杂、产ESBLs菌株阳性率较高,多重耐药现象与超广谱β-内酰胺酶密切相关。     

四川部分区域鸽源沙门菌耐药表型及耐药基因检测

为了解四川省成都市及周边区域鸽源沙门菌的耐药表型及耐药基因携带情况,通过常规细菌分离鉴定并结合PCR方法,获得42株鸽源沙门菌,采用K-B纸片法,选取20种抗生素,对42株鸽源沙门菌进行药敏试验,并结合PCR方法对其耐药基因携带情况进行检测。结果显示:受检菌对链霉素、四环素、多西环素耐药率为88. 1%;对阿莫西林耐药率为83. 3%;对头孢拉定、氨苄西林、萘啶酸的耐药率为81. 0%。42株沙门菌皆有不同程度的多重耐药性,其中33株同时耐4种以上抗生素,占检测菌株的78. 6%(33/42),主要的耐药谱为CTX-CRO-FLO-CPIOFL-AKN。42株沙门菌喹诺酮类耐药基因aac (6')-Ib-cr检出率最高,为88. 09%(37/32);氨基糖苷类耐药基因aadA1、aph (3)Ⅱ、aac(3)Ⅱ检出率分别为80. 95%(34/42)、76. 19%(32/42)、16. 67%(7/42);β-内酰胺类耐药基因blaTEM-1、bla CMY-2检出率分别为42. 86%(18/42)、19. 04%(8/42);四环素类耐药基因tet M、tet A、tet B检出率分别为40. 4%(17/42)、38. 09%(16/42)、9. 52%(4/42);磺胺类耐药基因sul2检出率为80. 95%(34/42);喹诺酮类耐药基因qnrA检出率为38. 09%(16/42)。结果表明:四川省成都市及周边区域鸽源沙门菌存在普遍耐药,且多重耐药较为严重,耐药基因携带率高。     

河南省鸡源沙门菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析

旨在了解河南省鸡沙门菌临床分离株血清型分布及药物敏感情况。从河南省各地区养鸡场共采集了沙门菌可疑病料617份,按常规方法进行分离,经生化、PCR及血清型鉴定,共分离出98株鸡源沙门菌,其中血清型定型82株,主要为肠炎沙门菌(62.24%)、鸡白痢沙门菌(18.37%)。进一步Kindy-Bauer(KB)法检测分离菌株对22种药物敏感性表明,所有分离菌株对多粘菌素B、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酸较为敏感,对阿齐霉素和氨苄西林耐药率在60.00%～70.00%之间,对红霉素和青霉素表现为极高的耐药性,耐药率高达100.00%。三重以上耐药菌株高达96.94%,七耐以上的菌株为56.12%,耐药最多的菌株可耐18种抗生素。由此可见,河南省禽类沙门菌的感染流行主要以肠炎沙门菌和鸡白痢沙门菌为主,多重耐药十分严重,严重影响了禽类沙门菌病的诊治与预防。     

鸡肉源与病鸡源沙门菌血清型及耐药状况的比较

为了解市售鲜鸡肉中污染的与临床病鸡感染的沙门菌在血清型与耐药性的差异,对2012-2014年间自南宁市售鲜生鸡肉和同期送检病鸡中分离到的沙门菌进行了血清型分析以及耐药性的比较。结果显示,32株鸡肉源性沙门菌的血清型分布广泛,包括有德比、纽兰和阿贡纳沙门菌等16种血清型;39株病鸡源性沙门菌的血清型则较为单一,只有鸡白痢、鼠伤寒和鸡伤寒沙门菌3种血清型;两种来源的沙门菌均对四环素、复方新诺明、甲氧苄啶,氨苄西林及阿莫西林有较高的耐药性;另外,病鸡源性分离株中多重耐药菌株的比例(89.7%)比鸡肉源性的(56.2%)高。本研究表明,南宁市售鲜生鸡肉与病鸡中的沙门菌分离株在血清型来源上完全不同,提示市售鸡肉中污染的食源性沙门菌并非来自饲养阶段的患病鸡;病鸡源性沙门菌的耐药情况较鸡肉源性沙门菌的更为严重。     

鸡白痢沙门菌的耐药性及磺胺类耐药基因的研究

本研究检测分析了珠三角地区鸡白痢沙门菌对磺胺药的耐药性及相关耐药基因,以进一步了解鸡白痢沙门菌对磺胺药耐药性的产生和传播机制。采用微量稀释法检测69株鸡白痢沙门菌分离株对磺胺药的耐药性,PCR检测了磺胺类耐药基因SulⅠ、SulⅡ和SulⅢ在分离株中的分布情况。结果显示,75.4%的受试菌株对磺胺异恶唑产生了耐药性;耐药基因SulⅡ检出率最高(79.7%),其次是耐药基因SulⅠ(33.3%),未能检出耐药基因SulⅢ。提示珠三角地区鸡白痢沙门菌对磺胺药的耐药情况相当严重,磺胺类耐药基因SulⅠ和SulⅡ在磺胺类耐药菌株的产生中起重要作用。     

福建省部分地区猪源沙门菌的分离鉴定

为了对福建省猪肉产品的安全性进行分析,在优化沙门菌分离鉴定方法的基础上,随机采集猪场饲料76份,以及屠宰猪肛门拭子、猪体表、屠宰肉样、结肠段以及市场售卖猪肉共991份样品进行沙门菌分离鉴定。结果:福建省猪源沙门菌的污染率比较高,且不同的采样环节污染率不一样。猪结肠的污染率最高,为34.13%(57/167);其次为屠宰场猪肉为21.97%(49/223);市售猪肉为20%(10/50),猪场饲料为11.84%(9/76),肛门拭子为9%(27/300),猪体表样品为3.98%(10/251)。说明福建省猪肉产业链中存在较为严重的沙门菌污染。     

致病性沙门菌的耐药表型分析及其耐药基因检测

采用K-B法测定自雏鸡分离的致病性沙门菌对四环素等20种抗生素的耐药情况,并应用PCR方法检测相应的耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG.结果显示,受试4株菌株全部对四环素、强力霉素高度耐受,在染色体上均有tetA基因存在,其中3株在质粒上还存在tetB基因,耐药表型与耐药基因的检测结果完全相符.表明tetA和tetB基因是决定本试验中临床分离沙门菌株对四环素类抗菌药物耐药的主要原因.     

鸡源沙门菌的鉴定及耐药性检测

沙门菌(Salmonella)是一类条件性细胞内寄生肠杆菌,多数能引起宿主胃肠炎或败血症,也是食物中毒主要病原菌.由于其血清型复杂,在畜牧生产上,常使用抗菌药物防治该病发生.随着药物的广泛使用,耐药性问题日趋严重.据有关耐药性监测数据表明,整个沙门菌属的多重耐药率从上世纪90年代20％～30％增加到本世纪初70％,耐药菌的大量出现,已成为全球关注的公共卫生问题[1].本试验采集我国不同地区病鸡样本,分离鉴定出210株沙门菌,对21种抗菌药物进行了敏感性检测,为我国动物源微生物耐药性监测体系的建立提供数据.     

大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌的耐药性分析

研究大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌的耐药性及其耐药基因的携带情况。采用K-B纸片法对33株大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌进行20种抗菌药物敏感性测定,应用PCR对12种耐药基因的携带情况进行检测。结果表明,33株沙门菌分离株对阿莫西林、萘啶酸耐药性最高,分别为93.94%、87.88%,对氨苄西林(54.55%)、四环素(48.49%)、多西环素(48.49%)、卡那霉素(60.61%)、庆大霉素(48.49%)、链霉素(66.67%)耐药性比较严重,对氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星敏感。共检测到9种耐药基因,其中blaCMY-2阳性率为87.88%,qnr、aac(6′)-Ib-cr阳性率分别为17.24%、86.21%,tetA、tetB阳性率分别为45%、20%,aph(3)Ⅱ、aac(3)Ⅱ、aadA1阳性率分别为100%、10%、20%,sul2阳性率为100%,未检出blaTEM-1、tetC、tetG基因。说明大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌严重耐药,且携带多种耐药基因。     

禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因调查分析

为了更好地了解禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因分布,从不同来源的家禽样品中分离沙门菌,调查其对四环素的耐药性以及耐药菌株中8种四环素耐药基因[tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(W)、tet(M)、tet(D)、tet(K)和tet(L)]的携带情况.结果表明,18.8%的沙门菌分离株对四环素耐药,健康成鸡分离株对四环素的耐药性明显高于雏鸡、死胚或病禽分离株;四环素耐药株中tet(A)、tet(B)和tet(M)基因的携带比例分别为73.1%、11.5%和3.8%,说明沙门菌对四环素的耐药机制以tet(A)和tet(B)基因介导的主动外排为主.本研究首次在对四环素耐药的沙门菌中检测到tet(M)基因,说明tet(M)基因在沙门菌对四环素的耐药性方面也具有潜在的作用.     

鸡源肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定

为检测临床分离的鸡源肺炎克雷伯菌的ESBLs和AmpC酶的基因型,用10对特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡源肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶的基因型及基因亚型。结果表明,其中K1菌株为同时产ESBLs和AmpC酶菌,K1菌株经序列分析显示,该菌株编码TEM型、SHV型、CTX-M型和ACT型AmpC酶核苷酸序列。TEM序列基因亚型为TEM-1型,SHV序列基因亚型为SHV-11(GenBank登录号是GU211012),CTX-M序列基因亚型为CTX-M-14(GenBank登录号是GU211011),ACT型AmpC酶序列的基因亚型为ACT-like衍变型(GenBank登录号是GU211014)。