生物素─亲和素强化斑点试验检测口蹄疫病毒抗体的研究

常规酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测．ＨＲＰ稳定性好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶检测系统，进行免疫强化斑点试验检出口蹿疫病毒抗体．用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替第二抗体．通过ＡＰ标记的亲和素（Ａｙｉｄｉｎ－ＡＰ）检测生物素化抗体，最后加底物ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法具有良好的特导性和重复性，由于引入生物素系统和ＡＰ，使灵敏度大大提高，能检出微量抗体，比常规ＥＬＩＳＡ更敏感．     

生物素—亲和素强化斑点试验检测口蹄疫病毒抗体的研究

常规酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测。ＨＲＰ稳定性好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶性检测系统，进行免疫强化斑点试验检测口蹿疫病毒抗体。用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替和二抗体，通过ＡＰ标记怕亲和素检测生物素化抗体，是后加底和ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法具有良好的特异性和重复性，由于引入生物系统和ＡＰ，使灵敏度大大提高，能检     

用生物素—亲和素强化免疫斑点试验检测口蹄疫病毒的研究

传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测。ＨＲＰ的稳定性虽好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶（ＡＰ）检测系统，进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替第二抗体，通过ＡＰ标记的亲和素（Ａｖｉｄｉｎ－ＡＰ）检测生物素化抗体，最后加入底物ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法操作简单，检测时间短，并具有良好的特异性和重复性。     

应用生物素-亲和素系统检测感染兔弓形虫抗体的实验研究

鉴于弓形虫病感染的多样化,病原诊断又较困难,血清学检测逐渐成为常规辅助诊断方法之一.七十年代末国内外相继建立了检测血清中抗弓形虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA).近年来,生物素-亲和素系统(BAS)已用于多种抗原抗体系统但未见检测弓形虫抗体的报道.本文应用亲和素和生物素标记的过氧化物酶复合物(ABC)为标记物的ABC-ELISA方法检测感染兔弓形虫抗体的实验研究并与常规ELISA法进行对比观察,现将初步试验结果报告如后.     

亲和素-生物素系统-酶联免疫吸附试验(ABS-ELISA)在兽医免疫诊断学中的应用

<正> 七十年代中期,亲和素(Avidin)与生物素(B-iotin)之间的强亲和作用及多价反应性,引起了免疫学工作者的极大兴趣,经研究进行亲和素与生物素既可偶联抗体等一系列大分子生物活性物质,又可被酶等多种材料所标记,据此发展成为一种新颖的生物反应放大系统,即亲和素-生物素系统(Avidin-BiotinSystem,ABS)。该系统最初被用于免疫组织化学,进行组织和细胞内特异性抗原的检测、定位及半定量研究。1979年,Guesdon等又将ABS首次引入了固相酶免疫吸附试验。ABS-ELISA是亲和素-生物素系统与ELISA技术相结合所建立的一种新的     

抗绿脓杆菌外毒素A酶标抗体的制备及其应用

从病死羊体内分离到绿脓杆菌并提取出外毒素A(PEA),再以此毒素作为抗原加油佐剂制成乳化抗原免疫家兔,获得高免血清并提取免疫球蛋白G(IgG);用过碘酸钠法将过氧化物酶标记抗PEA抗体(IgG),制成酶标抗体,经检验,酶标抗体结合物中的HRP浓度和Ab(IgG)浓度分别是0.0608 mg/mL和0.336 mg/mL;HRP/Ab(IgG)克分子比值为1.724%;酶(HRP)结合率是11.15%.利用该酶标抗体以ELISA夹心法对羊体内抗PEA抗体含量进行了检测,结果证明,用酶标抗体ELISA法比用平板凝集实验法检测的抗体效价平均高出二个滴度,表明制备的PEA酶标抗体具有灵敏度高、特异性强的优点.     

用酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体

酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体系用纯化抗原包被聚苯乙烯微量反应板,洗涤三次;加入待检血清,孵育后洗涤三次;再加入按工作效价稀释的HRP—SPA(辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌蛋白A),孵育后洗涤三次;用OPD(邻苯二胺)配制酶的底物溶液。如血清中有猪瘟抗体存在,     

大熊猫犬瘟热抗体间接ELISA方法的初步建立及应用

为建立大熊猫犬瘟热血清抗体间接ELISA检测方法,用合成的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)H和F短肽作为包被抗原,分别以HRP标记的鼠抗大熊猫IgG Fc二抗、HRP标记兔抗犬IgG二抗、HRP标记SPA作为检测二抗,通过矩阵法优化抗原包被浓度、血清稀释度和酶标二抗稀释度,评估3种方法...     

口蹄疫病毒抗体SA-ELISA快速检测方法的建立

旨在解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题，本研究在基于原有液相阻断ELISA的基础上进行方法优化，实现口蹄疫病毒抗体的快速、灵敏检测。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP-SA)相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法(SA-LPBE),在猪，牛、羊血清样品中具有较高的符合率。结合实际情况，判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128,猪血清效价≥64时，判定为阳性，与商用检测试剂盒结果一致。并且经符合率分析，与原试剂盒具有92.3%的符合率，其批内变异系数<5%,批间变异系数<10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线，根本上提高了酶促反应的效率，保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性；利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间由2 d缩短为3 h,解决了原有方法操作繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。建立的SA-LPBE可应用于FMDV抗体检测，为FMD流行和临床检测提供了技术方法。     

亲和素—生物素—酶复合物(ABC)法在免疫诊断学中的应用

亲和素—生物素—酶复合物(Avidin—Biotin—Enzyme Complex,ABC)法是Hsu等于1981年在生物素—亲和素架桥法(BRAB)和标记亲和素法(LAB)的基础上进行改良、建立起来的。这种方法是预先按一定比例将生物素化酶和亲和素共温后形成ABC复合物,再使ABC复合物与生物素化抗体反应。该法不仅减少了反应步骤。而且由于ABC的网格可以网罗相当数量的酶分子,从而使生物素—亲和素系统(BAS)的敏感度大为提高。用该法对多肽类激素进行了酶标测定,发现抗体滴度可提高20～40倍,并通     

纯化猪的小肠AKP用于ELISA对猪旋毛虫病检测的研究

<正> 碱性磷酸酶(AKP)起初用于抗原定位,七十年代广泛用于免疫诊断技术。1976年,Rnitenberg 等用免疫酶标记间接法(ELISA)检测猪旋毛虫病,获得了满意的结果,随后设计了自动化测试装置,检出效率很高。国内外普遍使用辣根过氧化物酶(HRP)和 AKP 进行抗抗体标记,但由于辣根过氧化物酶其试剂有致癌因素,而     

梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立

为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明：对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20 000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10 000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅...     

鸡传染性喉气管炎兔源高免血清有效酶标免疫组化试验

用辣根过氧化物酶HRP标记ILT兔源高免血清抗体，进行免疫组化试验检测15份人工感染ILT患鸡，5份(ND)患鸡和10份健康鸡气管分泌物，并进行了特异性和敏感性测定．结果人工感染ILT患鸡阳性检出率高达100％，ND患鸡和健康鸡阳性检出率为0．表明ILT兔源高免血清酶联免疫组化试验是一种特异性强、敏感性高的检测诊断方法．     

生物素检测桑蚕浓核病毒(DNV)简报

生物素—亲和素系统(Biotin—AvidinSystem,BAS)是近几年发展起来的一种新型生物反应放大系统,具有很高的灵敏度、特异性和稳定性,被广泛应用于免疫化学、生物工程等领域。我们采用生物素标记IgG抗体,用亲和素—生物素—辣根氧化酶复合物(ABC)与抗体结合后染色的方法检测桑蚕浓核病毒(DNV),获得了良好的效果。用本法检测家蚕DNV抗原国内外尚未见报道,现将结果简报如下:     

供快速检测猪瘟抗体的酶标抗体试验(ELA)的建立和评价

好些作者已认为酶标记抗体可以用于疾病的血清学诊断。本文描述为美国农业部动植物检疫总所(APHIS,USDA)建立的快速筛选程序作为检测猪瘟抗体之用。酶标抗体试验(ELA)的原理与间接荧光抗体试验(IFA)相似。它是用一种抗品种IgG共价结合于辣根过氧化物酶,代替用不同荧光化合物所标记的     

鸡高迁移率蛋白1双抗体夹心ELISA方法的建立

为建立鸡高迁移率族蛋白1(chHMGB1)蛋白酶联免疫定量分析方法,本研究原核表达重组ch HMGB1蛋白(rchHMGB1)。以纯化的rchHMGB1作为免疫原分别免疫BABL/c小鼠和新西兰大白兔以分别制备针对rchHMGB1的鼠单克隆抗体(MAb)和兔多克隆抗体(PAb),并对兔PAb进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。以鼠抗rchHMGB1 MAb做为包被抗体,HRP标记兔PAb为检测抗体,建立了定量测定rchHMGB1的双抗体夹心ELISA方法。对该方法进行了特异性、检测限和稳定性等试验。结果显示,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为1∶500稀释,抗原浓度在72.5 ng/mL~75μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数R20.99。该方法可以特异性检测rchHMGB1,最低检测限为36.25 ng/mL,连续6 d检测抗原绘制的标准曲线稳定性良好。本实验建立的rchHMGB1双抗体夹心ELISA方法,灵敏度较高,重复性好,为进一步研究chHMGB1在疾病感染过程中发挥的病理学机制奠定基础。     

猪圆环病毒2型特异性IgA间接ELISA检测方法的建立与初步应用

为检测猪圆环病毒2型(PCV2)特异性IgA抗体,本研究以纯化的PCV2 Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgA为二抗,建立检测PCV2特异性IgA抗体的间接ELISA方法.确定最佳抗原包被浓度为200 ng/孔,HRP标记羊抗猪IgA的最佳稀释度为1∶30 000.所建立方法与抗猪瘟病毒等病原的抗体间无交叉反应.结果表明该方法具有较好的特异性,组内和组间重复性试验的变异系数介于0.12％～5.47％,具有较好的可重复性.该方法为进一步研究猪感染PCV2和PCV2疫苗免疫后特异性黏膜IgA水平及进行黏膜免疫评价提供了有效的检测方法.     

猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的制备及其在检测组织中病毒的初步应用

旨在建立一种在感染初期对猪传染性胃肠炎(TGE)进行快速准确诊断的方法。本试验使用猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)经蔗糖梯度离心后用于免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,经4次亚克隆及Western blot、间接免疫荧光(IFA)鉴定后筛选出1株能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株3G11。通过试剂盒将3G11单抗与辣根过氧化物酶(HRP)偶联,然后以HRP-3G11作为一抗,利用免疫酶组织化学法检测小肠组织病料中的TGEV。结果表明：HRP-3G11作为一抗经镜检可见特异性红棕色沉淀,即HRP-3G11单抗可以与小肠组织中病毒发生特异结合,试验过程耗时少且可视化显色结果优于未标记一抗使用酶标二抗组,证实了标记后单抗HRP-3G11可以作为直接检测抗体应用于免疫酶组织化学法中检测用小肠组织中的TGEV。     

应用ELISA双抗体夹心法诊断鸭冠状病毒性肠炎的研究

将电镜检查鸭冠状病毒阳性的病鸭肠管及粪便,经PEG沉淀及蔗糖线性梯度超速离心提纯抗原。用其免疫豚鼠制备抗血清,经饱和硫酸铵粗提,再经QAE-ScphadcxA50离子柱纯化提取IgG。纯化IgG与辣根过氧化物酶(HRP)用过碘酸钠法进行标记,制备酶标抗体,建立ELISA了双抗体夹心法,以诊断鸭冠状病毒性肠炎抗原,对发病鸭及回归试验、人工感染试验中收集的55份粪便样品,用本试验检测,并用电镜检查作为对照,证明该法具有特异、敏感、快速、简便之优点,解决了仅靠电镜检查的局限性。     

用间接亲和素—生物素酶标染色法检测马传贫病毒抗体的试验研究

用自制生物素标记兔抗马IgG(简称Bio—IgG)及辣根过氧化物酶与亲和素蛋白偶联物(E—avi),以间接AB酶标染色方法检测马传染性贫血特异性抗体,获得了满意结果。此法比免疫荧光法敏感76信,对照、阻抑试验及类症病马血清均呈阴性结果,43例马传贫血清全部阳性。本试验表明,该方法具有特异、敏感、快速和简便等特点,有实用价值。