2个根结线虫种群鉴定及致病性研究

采用雌虫会阴花纹形态观察比较、EST同工酶图谱分析以及与mt DNA-PCR分子技术相结合的方法,将来自海巴戟的2个根结线虫种群万宁种群和定安种群鉴定为花生根结线虫,酯酶分别为A2、A1;通过盆栽接种测定了这2个根结线虫种群对32种农作物的致病性。试验结果表明,定安种群的致病性比万宁种群强,且寄主范围比万宁种群广。     

广州芳村盆景线虫种类调查和根结线虫鉴定

本文通过对广州芳材６个盆场１０种分影的调查,初步鉴定了Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ,Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ,Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ,Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ,Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ,Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ,Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ,Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ,ｓｉｌｅｎｃｈｕｓ,Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ,Ｔｒｏｐｈｕｒｕｓ,Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ,Ｔｙｌｅｎｃｈｕｓ,Ｘｉｐｈｉｎｅ     

海南岛胡椒病原根结线虫种类鉴定

对海南岛12个县市胡椒产区的27个胡椒病原根结线虫种群进行了纯化培养,运用形态学、同工酶技术及mtDNA扩增技术进行了种类鉴定,结果发现27个纯培养种群中有26个是南方根结线虫,1个是花生根结线虫,南方根结线虫占了96.3％。     

广州芳村盆景线虫种类初步调查和根结线虫鉴定

本文通过对广州芳村六个盆景场十种盆景的调查,初步鉴定了Ａｐｈｅ ｌｅｎｃｈｏｉｄｓ,Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ,Ｈｅｌｉｃｏｔｙ ｌｅｎｃｈｕｓ,Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ,Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ,Ｍｅｌｏｉｄｇｙｎｅ,Ｐａｒａｔｙ ｌｅｎｃｈｕｓ,Ｐｒａｔｙ ｌｅｎｃｈｕｓ,Ｐｓｉｌｅｎｃｈｕｓ,Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ,Ｔｒｏｐｈｕｒｓ,Ｔｙｌｅｎｏｒｈｙｎｃｈｕｓ,Ｔｙｌｅｎｃｈｕｓ,Ｘｉｐｈｉｎｅ     

线粒体COI基因作为根结线虫条形码的适用性分析

为评估线粒体COI基因作为根结线虫(Meloidogyne spp.)DNA条形码的适用性,对收集的25个根结线虫群体的线粒体COI基因进行扩增、测序,检测其扩增和测序成功率。将测序获得的COI基因序列与Q-bank中下载的根结线虫COI基因序列共同进行比对分析,利用MEGA 6.0计算种内、种间遗传距离进行"Barcoding Gap"检验以及构建NJ系统进化树作聚类分析,检验COI基因对根结线虫的物种识别能力。结果表明:线粒体COI基因扩增和测序成功率极高,扩增成功率达96%,测序成功率为100%。种间平均遗传距离为0.126,远远超过种内平均遗传距离0.002的10倍,种内遗传距离与种间遗传距离存在明显的"Barcoding Gap"间隔区。系统发育分析显示,COI基因可有效分辨出本研究15种根结线虫中的10种,物种识别率约为67%。线粒体COI基因具有极高的扩增和测序成功率、较高的物种识别能力,且扩增片段长度适宜,符合物种鉴定DNA条形码基因的标准,可作为根结线虫候选条形码基因。     

4种常见根结线虫基因组DNA的RAPD分析

 用120个随机引物对4种常见根结线虫10个小种和类型进行了全基因组随机扩增DNA多态性(RAPD)分析,筛选出的11个适宜引物共扩增出91条RAPD谱带,86条是多态性谱带,占总谱带的94.5%;OPL12、OPK01对4种根结线虫种及其小种扩增的谱型有明显的特异性。聚类分析显示在种间水平上4种根结线虫中花生根结线虫和爪哇根结线虫亲缘关系最近,遗传距离为0.532,北方根结线虫与另外3种根结线虫的亲缘关系最远,平均遗传距离为0.786;种下水平上同种根结线虫的不同小种和类型间存在不同程度的遗传差异,南方根结线虫4个生理小种间,花生根结线虫2个生理小种间亲缘关系较近,爪哇根结线虫2个酯酶谱带类型间,北方根结线虫2个细胞生物学小种间遗传差异较大。在RAPD技术的基础上探索根结线虫分类鉴定的分子方法有着良好的前景。     

根结线虫的研究现状

概述了根结线虫的发生分布和传统分类鉴定,以及分子生物学技术(同工酶电泳技术、DNA重组技术、PCR技术)在根结线虫种和生理小种鉴定中的运用及其防治,并对生物防治及抗根结线虫育种、转基因工程在植物线虫学研究领域上的应用前景作了展望。     

根结线虫在中国的一新纪录种——拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicol

本文描述了采自海南省三亚市葱 ( Allium tistulosum)上的拟禾本科根结线虫 Meloidogynegraminicola。该种雌虫的会阴花纹多为上下长的卵圆形 ;线纹细弱 ,通常平滑连续 ,但在局部区域骤然出现将线纹截断的短线纹 ;侧区不明显 ;侧尾腺口小 ,相隔很近。雄虫的头冠与头区等宽 ,头区很低、光滑或有 2条不明显的环纹。二龄幼虫的尾相当长 ,尾透明末端的界限通常明显 ,尾端细长 ,末端呈细棍棒状。拟禾本科根结线虫在中国属首次报道 ,其寄主葱及其所属的百合科为拟禾本科根结线虫寄主植物的新纪录种和新纪录科     

福建省毛豆根结线虫种类鉴定及初侵染来源

福建省漳州市一基地毛豆(品种:‘毛豆64’)苗期发生严重根结线虫病, 发病株率为78%。为明确其病原的种类及其初侵染来源, 通过形态学、分子生物学方法进行了种类鉴定。研究结果表明, 该线虫雌虫、雄虫、2龄幼虫(J2)的形态学特征与测量值和拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicola相吻合;基于线虫rDNA-ITS序列和28S rDNA D2D3序列构建的系统发育树进一步确定其为拟禾本科根结线虫;室内接种试验确定了其致病性。这是首次在福建省毛豆上发现拟禾本科根结线虫。在毛豆基地畦地残留的前作水稻稻茬根内和根际土壤中均分离到大量J2s, 经特异性引物扩增确定为拟禾本科根结线虫, 研究认为前作水稻根系受拟禾本科根结线虫侵染, 在灌溉淹水状态下线虫2龄幼虫和卵在根内与土壤中长期存活, 成为轮作毛豆根结线虫病的初侵染源。     

拟悬铃木根结线虫及其相似种的rDNA-ITS-RFLP分析

本文用特异性引物F195和V5367,对拟悬铃木根结线虫和花生根结线虫的核糖体DNA内转录间隔区（rDNA-ITS）进行了PCR扩增,扩增产物用5种限制性内切酶Taq Ⅰ、Rsa Ⅰ、Msp Ⅰ、Cla Ⅰ、HaeⅢ进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析.Taq Ⅰ、Rsa Ⅰ、Msp Ⅰ、Cla Ⅰ酶切拟悬铃木根结线虫的rDNA-ITS扩增产物所获得限制性酶谱与花生根结线虫的限制性酶谱一致,只有HaeⅢ酶切拟悬铃木根结线虫和花生根结线虫的rDNA-ITS产物所得酶谱不同.rDNA-ITS扩增产物的HaeⅢ酶切图谱可以区分拟悬铃木根结线虫和花生根结线虫.     

9种检疫性实蝇PCR-RFLP快速鉴定研究

应用PCR-RFLP技术,对我国口岸截获频率较高的9种检疫性实蝇开展了快速鉴定方法的研究,结果表明,设计的2对引物对9种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片断大小分别约为350bp和450bp.用限制性内切酶MSE1和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,得到的酶切位点可将供试的9种实蝇区分开来.该方法不受供试实蝇地理来源及食物源的影响,对各种虫态(卵、幼虫、蛹)和不同性别的成虫均适用,可用于口岸截获实蝇的快速检疫鉴定.     

海南省蔬菜根结线虫发生种类与分布

2014年-2018年, 对海南省蔬菜根结线虫病害进行了田间随机采样调查和病原种类分子鉴定?结果显示, 蔬菜根结线虫病在海南18市县均有发生, 且大部分旱田连作地块病株率达到80%以上?进一步对采集的295份根结线虫样本种类进行了分子鉴定, 共鉴定出象耳豆根结线虫?南方根结线虫和爪哇根结线虫3种病原种?其中, 象耳豆根结线虫单一检出率达到62.37%, 南方根结线虫单一检出率为23.39%, 爪哇根结线虫的检出率仅为5.76%, 象耳豆根结线虫和南方根结线虫复合侵染检出率为8.47%?除五指山市样本以外, 海南其余17市县样本均检测到象耳豆根结线虫侵染为害?本研究显示象耳豆根结线虫为海南省蔬菜上的优势病原根结线虫种类, 该结果对指导品种布局?制定根结线虫病害的防治策略具有重要意义?     

中国南方稻田及其周边环境根结线虫种类鉴定

为了解根结线虫在中国南方稻区的分布和种类, 从15个省(直辖市/自治区)采集1 181份土样, 经生物测定发现312份土样中种植的水稻或番茄幼苗根系会产生根结, 阳性总检出率为26.42%。利用线虫特异性引物从171份阳性样品中鉴定出6种根结线虫:拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicola、北方根结线虫M.hapla、花生根结线虫M.arenaria、爪哇根结线虫M.javanica、象耳豆根结线虫M.enterolobii和南方根结线虫M.incognita, 分别占鉴定总样品数的88.89%、41.52%、29.82%、10.53%、4.09%和3.51%。被1、2、3、4、5、6种根结线虫混合侵染的土样比例分别为42.11%、41.52%、12.87%、2.92%、0.58%和0, 其中最常见的为拟禾本科根结线虫单独侵染(34.50%)、拟禾本科根结线虫与北方根结线虫(22.81%)或花生根结线虫(13.45%)混合侵染。本研究结果将为制定相应的传播阻断策略和防控措施提供参考。     

南方根结线虫促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)基因的RNAi效应分析

 促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在线虫的生长发育等方面具有重要作用,本研究探索利用RNAi技术沉默南方根结线虫mapk-1基因来抑制线虫的生长发育。根据mapk-1基因的cDNA序列设计引物,通过体外转录合成约550bp的dsRNA对南方根结线虫的卵进行RNAi以沉默mapk-1基因。试验结果表明,将南方根结线虫的卵块浸泡在含有2mg/mL dsRNA的M9缓冲溶液中,24h后卵块孵化出的2龄幼虫数量明显多于对照组(无dsRNA),但孵化出的幼虫死亡率高达90%,而对照组的死亡率低于5%,说明mapk-1基因的沉默抑制了卵块的孵化和线虫的生长,同时将孵化的幼虫接种番茄,14d后番茄根部无根结产生,35d后无卵块产生;而浸泡72h后卵块孵化出的2龄幼虫几乎全部死亡,并且孵化的线虫数量明显少于对照。提取导入dsRNA的卵块的RNA进行半定量PCR分析,结果表明mapk-1基因的mRNA被降解。     

根结线虫在中国的新纪录种——西班牙根结线虫(Meloidogyne hispanica Hirschmann)

 A root-knot nematode, Meloidogyne hispanica Hirschmann, was first described and illustrated from roots of papaya in Danzhou, Hainan province in China. The perineal pattern of female was characterized by oval shaped to rectangular with a low dorsal arch; dorsal striae varied from fine and wavy to coarse; lateral lines forked with fringe-like striae between lines and phasmidial ducts distinctly appeared. Male had high and rounded head region with labial disc and medial lips fused to form elongate lip structures. Second-stage juve-nile had distinct body annules and stylet with rounded, posteriorly sloping knobs, and the tail terminus was slender with indistinct hyaline. This Chinese new record of M. hispanica had a unique esterase phenotype (S2-M1) which was different from that of other Meloidogyne species.     

Effects of simulated acid rain and root-knot nematode on tomato

Effects were examined of simulated acid rain and of root-knot nematode, Meloidogyne incognita race 1, on plant growth, yield, photosynthetic pigments and leaf epidermal characters of tomato ( Lycopersicon esculentum cv. Pusa Ruby). Sequential inoculation exposures (pre-, post-, and concomitant with nematode inoculation) were carried out in a greenhouse. Intermittent treatments of simulated acid rain at pH 3.2 caused white-to-tan irregular lesions on both the upper and lower surfaces of tomato leaves. The foliar symptoms were more pronounced on nematode-infected plants. Simulated acid rain (pH 3.2) and/or nematode infection suppressed plant growth, yield and pigment synthesis, the effects being greatest in post-inoculation treatments compared with simulated acid rain at pH 6.8. The total weight of fruits per plant was greatly suppressed owing to simulated acid rain or nematode infection. Chlorophyll a was found to be more sensitive to simulated acid rain or nematode infection than other leaf pigments. Root penetration, galling, egg mass production, and fecundity (number of eggs per egg mass) of M. incognita were enhanced at pH 5.6 and suppressed at pH 3.2 compared with pH 6.8. Nematode infection or simulated acid rain at pH 3.2 suppressed stomata and trichome development (number and size). Simulated acid rain treatments at pH 5.6 had a positive effect on number and size of trichomes, but a negative effect on stomata. The apertures of stomata were wider on tomato leaves exposed to simulated acid rain, especially at pH 3.2, than at pH 6.8.     

九叶青花椒根结线虫病的病原鉴定

为确定四川省蓬溪县九叶青花椒种植区发病植株花椒根结线虫的种类, 进而为九叶青花椒根结线虫病防治提供依据, 本文根据根结线虫雌虫与2龄幼虫的形态特征及雌成虫的会阴花纹、雌虫酯酶同工酶图谱, 并结合特异性扩增及rDNA-ITS扩增, 根据ITS序列构建系统发育树, 对该地区九叶青花椒根结线虫病的病原进行了种类鉴定。结果表明该病原为南方根结线虫Meloidogyne incognita (Kofold & White) Chitwood。这是我国首次在九叶青花椒上发现南方根结线虫。