抗氧化剂对银杏愈伤组织褐变的影响

[目的]研究抗氧化剂对银杏愈伤组织褐变的影响。[方法]以银杏的子叶为外植体,以MS+2,4-D 1.0 mg/L+KT 1.5mg/L为基本培养基,对外植体进行愈伤组织的诱导培养,研究银杏愈伤组织继代过程中,不同浓度Vc、柠檬酸、PA 3种抗氧化剂对愈伤组织培养褐变的影响。抗氧化剂对褐变的抑制效果以愈伤组织中叶绿素的含量来表示。[结果]3种抗氧化剂对抑制褐变的效果为:Vc>柠檬酸>PA;筛选出最佳抗氧化剂及其浓度为Vc 15 mg/L。[结论]抗氧化剂的类型及浓度在抑制银杏愈伤组织褐化过程中起关键作用。     

红叶石楠愈伤组织抗褐化研究以及悬浮细胞系的建立

以红叶石楠无菌苗叶片为试材,诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系。结果表明:红叶石楠愈伤组织初代诱导最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,诱导率可达97%。继代培养以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L为宜。针对红叶石楠愈伤组织继代培养过程中易褐化的问题,通过正交试验探讨了不同吸附剂、抗氧化剂及其它因素对褐化的影响。采用MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Vc 1.0 mg/L+Ch 100 mg/L附加1%蔗糖的继代培养基,可以明显降低红叶石楠愈伤组织的褐化现象。将胚性愈伤组织接种到1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L附加2%蔗糖,pH 5.5液体培养基中悬浮震荡培养获得了分散性好、色泽鲜艳的悬浮细胞。     

乌头愈伤组织诱导中抗褐化剂的筛选

以乌头的叶片为外植体,在愈伤组织的诱导阶段,以低无机盐浓度1/2MS为基本培养基,加入KT 1mg/L、2,4-D 1mg/L、NAA0.1mg/L,考察了不同浓度配比的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、AC(活性碳)、Vc(维生素C)对乌头愈伤组织诱导的作用效果及褐化率。结果表明,0.04%的PVP在乌头愈伤组织诱导阶段为最佳抗褐化剂。     

激素和蔗糖浓度组合对蕨菜愈伤组织诱导的影响

以蕨菜[Pteridium aquilinum(L.)Kuhn]的幼嫩叶柄为外植体,分别用两种褐变抑制剂(柠檬酸和抗坏血酸)对外植体进行预处理,并在其愈伤组织诱导培养基中设置不同的激素、吸附剂聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和蔗糖浓度,研究了不同处理对蕨菜外植体褐变及愈伤组织诱导的影响。结果表明:抗坏血酸的抗褐变效果优于柠檬酸,在培养基中添加PVP可以增强这两种褐变抑制剂的抗褐变作用;2.2 g/L PVP+30 g/L蔗糖+1/2MS+NAA 0.4 mg/L+6-BA 0.2mg/L为诱导蕨菜愈伤组织的最佳培养基,愈伤组织诱导率为48.3%。     

激素和蔗糖浓度组合对蕨菜愈伤组织诱导的影响

以蕨菜[Pteridium aquilinum(L.)Kuhn]的幼嫩叶柄为外植体,分别用两种褐变抑制剂(柠檬酸和抗坏血酸)对外植体进行预处理,并在其愈伤组织诱导培养基中设置不同的激素、吸附剂聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和蔗糖浓度,研究了不同处理对蕨菜外植体褐变及愈伤组织诱导的影响。结果表明:抗坏血酸的抗褐变效果优于柠檬酸,在培养基中添加PVP可以增强这两种褐变抑制剂的抗褐变作用;2.2 g/L PVP+30 g/L蔗糖+1/2MS+NAA 0.4 mg/L+6-BA 0.2mg/L为诱导蕨菜愈伤组织的最佳培养基,愈伤组织诱导率为48.3%。     

库拉索芦荟组织培养褐化现象的抑制研究

褐化是芦荟组织培养中的普遍现象,严重影响组织培养的效果。以库拉索芦荟的茎段和叶片为外植体,研究了5种防褐剂活性炭、硝酸银、维生素C、L-谷氨酰胺和聚乙烯吡咯烷酮对愈伤组织诱导中褐化现象的抑制作用。结果表明,5种防褐剂都具有抑制外植体褐化的作用,其中15mg/L的AgNO3是最合适的防褐剂,其外植体褐化程度最轻,愈伤组织诱导率较高且愈伤组织生长良好。     

影响油棕叶片愈伤组织诱导因素研究

研究不同取材部位、激素组合配比等因素对3个不同油棕品系叶片愈伤组织培养的影响。结果表明:不同部位的油棕叶片以及不同品系的油棕愈伤组织诱导存在极显著差异;试验以MS培养基+5 mg/L 2,4-D+10 mg/L TDZ+6 g/L琼脂+30 g/L糖配比获得较好的愈伤诱导率;添加2%活性炭可以有效抑制油棕叶片愈伤组织褐化。     

福建柏愈伤组织诱导与抗褐化研究

【目的】比较不同抗褐化剂减轻福建柏组织培养过程中褐化现象的效果,以提高福建柏愈伤组织培养的增殖分化能力。【方法】以福建柏鳞叶和茎段为外植体,通过单因素试验,研究0.0～2.5 mg/L NAA和2,4 D及0.0～3.0 mg/L IBA对愈伤组织诱导率与生长状态的影响;以福建柏茎段为外植体,采用单因素和多因素组合试验,研究100～2 000 mg/L聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）、100～1 000 mg/L活性炭（AC）和V_C以及不同质量浓度VC与AC组合,对愈伤组织污染率、死亡或褐化率及诱导率的影响;以诱导的愈伤组织为材料,采用单因素试验,研究100～1 000 mg/L PVPP、100～300 mg/L V_C、200～1 000 mg/L AC、30～100 mg/L V_B对愈伤组织增殖生长量、增殖率、褐化率及PPO、POD活性的影响。【结果】① 不同质量浓度NAA、2,4-D和IBA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率总体高于茎段,各生长素对福建柏鳞叶和茎段愈伤组织的诱导率均表现为NAA＞IBA＞2,4-D,所有处理中以1.0 mg/L NAA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率最高,为83.33%;以0.5 mg/L NAA对茎段愈伤组织的诱导率最高,为61.11%;愈伤组织生长状态和抗褐化效果优劣依次为NAA、2,4-D、IBA。②仅100 mg/L V_C+200 mg/L AC处理的愈伤组织污染率低于不添加抗褐化剂的对照;死亡或褐化率仅500 mg/L PVPP处理与对照相同,均为0.00%,其余处理均高于对照;诱导率则以不同质量浓度PVPP、1 000 mg/L VC、100 mg/L V_C＋200 mg/L AC处理与对照相当或高于对照,其余处理均低于对照;愈伤组织生长状态总体以PVPP处理表现最优。③仅300 mg/L PVPP、200和400 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率高于对照,增殖生长量仅100和200 mg/L PVPP、100 mg/L V_C、200 mg/L AC处理高于对照;所有处理中以200 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率和增殖生长量最高,分别为70.00%和10.07 g;各抗褐化剂对福建柏愈伤组织增殖效果的优劣依次为PVPP、AC、V_C、V_B。④不同抗褐化剂处理的愈伤组织褐变率均呈先增加后趋于稳定的变化趋势,但变化幅度存在显著差异;各抗褐化剂的抗褐化效果优劣依次为AC、PVPP、V_C、V_B。⑤不同质量浓度PVPP、V_C、AC处理对福建柏愈伤组织PPO和POD活性的影响具有显著差异,但各处理PPO活性均与对照无显著差异,POD活性以500 mg/L AC处理显著高于其他处理。【结论】在福建柏愈伤组织诱导阶段,愈伤组织的褐化与生长素种类有关,生长素NAA、2,4-D适用于福建柏愈伤组织的诱导,IBA诱导的愈伤组织容易褐化,添加适量抗褐化剂能减少愈伤组织的褐化情况。在愈伤组织增殖培养阶段,适宜质量浓度的PVPP、AC作为抗褐化剂能有效减缓福建柏愈伤组织的褐化进程,保持愈伤组织的正常增殖生长,但高质量浓度的抗褐化剂会抑制愈伤组织的生长。     

魔芋组织培养与快繁技术研究

以不同类型的白魔芋Md和Ms与花魔芋CMH和CCDY 4种材料的块茎为外植体,培养于附加6-BA和NAA不同浓度组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导、不定芽分化及试管苗生根寄栽等试验.结果表明,培养效果与魔芋的类型无关,主要与培养基中激素的浓度组合相关.培养的适宜激素浓度组合,诱导带芽愈伤组织CMH和Md为6-BA1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,CCDY和Ms为6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;不定芽分化及快繁,花魔芋为6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5 mg/L,白魔芋为6-BA 2.0mg/L+NAA0.5 mg/L.试管苗生根以NAA0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L激素浓度组合较好.愈伤组织诱导及不定芽分化应在黑暗或散射光下培养,可大大减少切块伤口褐化程度;愈伤组织继代以10mm×10 mm×10 mm大小及不定芽增殖以带3个小芽的组织切块转接,利于快速生长.加入多酚氧化酶抑制剂(Vc、柠檬酸)及吸附剂(活性碳)对抑制褐化效果并不明显.     

魔芋组织培养与快繁技术研究

以不同类型的白魔芋Md和Ms与花魔芋CMH和CCDY4种材料的块茎为外植体,培养于附加6-BA和NAA不同浓度组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导、不定芽分化及试管苗生根寄栽等试验。结果表明,培养效果与魔芋的类型无关,主要与培养基中激素的浓度组合相关。培养的适宜激素浓度组合,诱导带芽愈伤组织CMH和Md为6-BA1.0mg/L NAA0.5mg/L,CCDY和Ms为6-BA1.0mg/L NAA1.0mg/L;不定芽分化及快繁,花魔芋为6-BA1.0mg/L NAA0.5mg/L,白魔芋为6-BA2.0mg/L NAA0.5mg/L。试管苗生根以NAA0.5mg/L IBA0.1mg/L激素浓度组合较好。愈伤组织诱导及不定芽分化应在黑暗或散射光下培养,可大大减少切块伤口褐化程度;愈伤组织继代以10mm×10mm×10mm大小及不定芽增殖以带3个小芽的组织切块转接,利于快速生长。加入多酚氧化酶抑制剂(Vc、柠檬酸)及吸附剂(活性碳)对抑制褐化效果并不明显。     

中国李Nubiana离体叶片愈伤组织诱导的研究

以Nubiana叶片为试材,对其愈伤组织的诱导、继代培养及褐变调控进行了研究。结果表明:Nubiana叶片愈伤的诱导及继代培养以WPM附加BA 0.5 mg/L和2.4-D 2.0 mg/L的培养基上效果最好;0.1%的柠檬酸(CA)具有明显地促进愈伤组织生长、抑制褐变的作用,而聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的效果最差;3%的葡萄糖(Glu)最适于愈伤组织的诱导及继代。综合以上研究结果,获得较好的愈伤组织的适宜培养条件是:WPM BA 0.5 mg/L 2,4-D 2.0 mg/L Glu 3% CA 0.075%~0.1%,暗培养28~30 d。     

芦荟愈伤组织诱导的初步研究

以库拉索芦荟的茎段、茎尖、叶片和根为外植体，以MS为基本培养基，添加不同浓度的2，4-D，NAA，KT或其组合，并附加AgNO3，Vc，研究外植体种类、大小，接种方式，激素配比，以及AgNO3，Vc对库拉索芦荟愈伤组织诱导及生长情况的影响．结果表明，外植体以2cm长度的茎段较好；接种方式以横放效果较好；NAA15mg／L 2，4-D4mg／L KT0．1mg／L的激素组合愈伤组织诱导率达到90％；添加AgNO3诱导出的愈伤组织生长旺盛，富有光泽，以10mg／L效果较好；添加Vc对愈伤组织的褐化有一定的抑制，以5mg／L效果较好．     

抑制玉米幼胚愈伤组织褐化的研究

褐化是植物组织培养中一种常见的问题,直接影响组织培养能否成功。为了控制植物组织培养中的褐化现象,选取‘丹黄25’、P138、H21 3个玉米自交系幼胚为外植体,着重探讨胚龄,2,4-D、甘露醇、L-脯氨酸和AgNO3浓度对玉米幼胚愈伤组织褐化的影响。结果表明,选取授粉11天的‘丹黄25’幼胚、13天的P138和H21幼胚接种到诱导培养基中,待长出愈伤后转移到添加2 mg/L 2,4-D、10 g/L甘露醇、10 mg/L L-脯氨酸、10 mg/L硝酸银的继代培养基上,愈伤组织褐化率显著降低,表明培养基的种类及添加物对愈伤组织的生长有重要影响。     

几种抗氧化剂对水稻愈伤组织抑制褐变效应的研究

采用４种抗氧化剂的不同浓度溶液，对离体稻胚作预处理，研究其抑制水稻愈伤组织褐变的效应。结果表明，每种抗氧化剂抑制愈伤组织祸变都有其最适浓度，ＰＶＰ、Ｖ_ｃ、柠檬酸和ＤＴＴ的适宜浓度分别为０．５％，０．１％，０，１％和１０ｍｇ／Ｌ或５００ｍｇ／Ｌ且各抗氧化剂抑制愈伤组织褐变的有效浓度及其有效性程度与培养期有密切的关系。作者根据研究，提出了用上述抗氧化剂防止水稻愈伤组织褐变的使用原则。     

褐变抑制剂对黄芩愈伤组织褐变及次生代谢产物的影响

研究了不同褐变抑制剂对黄芩愈伤组织继代培养中褐变、生长以及黄芩愈伤组织次生代谢产物黄芩苷、黄芩素含量的影响。结果表明：在MS＋0．5mg／L2,4-D＋1．0mg／L6-BA继代培养基中分别添加1．0g/L植酸、10mg／L抗坏血酸、2．0g/L聚乙烯吡咯烷酮能有效抑制黄芩愈伤组织褐变,促进其生长。在综合考虑愈伤组织的褐变率、生长增殖倍数（干重）基础上,以黄芩苷产量为指标,添加10mg／L抗坏血酸＋1．0g/L植酸组合效果最好;以黄芩素产量为指标,添加1．0g/L植酸效果最好。     

2,4-D和KT对大花金挖耳愈伤组织诱导的影响

以大花金挖耳无菌苗的根为外植体,研究了不同质量浓度的2,4-D和KT对愈伤组织诱导的影响。结果表明:低浓度的2,4-D(0.25~0.5 mg/L)单独使用促进愈伤组织形成,随着2,4-D质量浓度的增加,愈伤组织的形成逐渐变弱;在培养基、2,4-D和KT诱导愈伤组织的正交试验中,发现2,4-D对愈伤组织诱导率的影响最大,基本培养基次之,KT影响最小,对愈伤组织诱导的较优组合为B5 2,4-D 0.1 mg/L KT 0.4mg/L;在优化诱导愈伤组织的激素浓度配比试验中发现B5 2,4-D 0.1 mg/L KT0.2~0.4 mg/L对大花金挖耳愈伤组织的诱导率为100%,且产生的愈伤组织多为淡黄色、质地疏松、生长快、褐化时间长,适合于大花金挖耳愈伤组织的诱导。     

木薯叶片愈伤组织诱导与分化影响因子研究

以木薯试管苗顶部1～3处的幼叶为外植体,研究不同激素种类、浓度对愈伤组织的诱导、分化、不定芽生根的影响,并探讨了愈伤组织褐化过程中减轻褐化的方法。结果表明:在含0.5～1.0 mg/L 2,4-D的改良MS培养基上,可诱导木薯叶片产生愈伤组织,其愈伤诱导率为73.33%～89.44%;在愈伤组织的继代过程中,添加了200～300 mg/L PVP的处理可减轻愈伤褐化和提高愈伤增殖率;产生不定芽的最适激素条件是在改良MS培养基中添加0.75～1.00 mg/L ZT;不定芽产生的嫩枝在1/2MS基本培养基中添加0.25～0.50 mg/L IBA的条件下,其生根率达81.13%～90.63%。     

苹果叶片愈伤组织的诱导培养

为获得优质的愈伤组织,以国光和富士苹果的幼嫩叶片为外植体,研究了不同的消毒方法、植物生长调节剂种类及其浓度、光照条件、叶片放置方式等因素对叶片愈伤组织诱导的影响。结果表明:(1)直接进行光培养,愈伤诱导率只有50%～55%,先暗培养14 d再光培养与先暗培养21 d再光培养叶片的愈伤组织诱导率都达100%,但前者产生的愈伤组织结构紧密呈淡黄色,后者出现白化疏松的愈伤细胞。暗培养14d为诱导叶片愈伤组织形成的有利条件。(2)未添加激素的MS基本培养基比添加激素的MS培养基有利于降低叶片的褐变率。(3)采用叶片远轴面接触培养基比近轴面接触培养基的愈伤诱导率高约25%～30%,且诱导愈伤组织形成的时间较早。(4)国光叶片在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基中,富士叶片在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基中愈伤组织的诱导效果最佳。     

喜树愈伤组织诱导与抑制褐化的研究

[目的]筛选喜树外植体的最佳诱导培养基,研究抑制外植体及继代愈伤组织褐化的方法。[方法]以喜树的幼叶和种胚作为外植体,通过测定过氧化物酶和多酚氧化酶的活性,从外植体选择、培养基种类、激素配比、添加物的处理等方面进行愈伤组织的诱导和抑制外植体及继代愈伤组织褐化的研究。[结果]幼叶外植体的最佳诱导培养基为:SH+NAA2.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L;种胚外植体的最佳诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L。抑制幼叶外植体褐化的方法为:增加外植体大小,吹干培养基表面水分。抑制愈伤组织继代培养褐化的方法为:最佳诱导培养基附加30mg/L抗坏血酸和5g/L活性碳;1次继代后,将质地致密的愈伤组织转移到MS培养基上培养。[结论]该研究为喜树的遗传转化和植株再生提供理论基础。