结缕草高效再生体系的建立

为了获得结缕草的转基因再生植株,从而利用转基因技术改造结缕草,建立草坪草的遗传转化体系,研究了不同培养基、激素浓度及光照条件对结缕草愈伤组织诱导、分化和植株再生的影响,建立了结缕草再生体系。结果表明,在愈伤组织诱导阶段,不同培养基(MS培养基和NB培养基)在同一激素质量浓度下,愈伤组织诱导率差别不大;而同一培养基不同激素浓度间愈伤组织诱导率存在一定差别,以添加2 mg/L的2,4-D处理诱导率较高;光培养和暗培养条件下愈伤组织诱导率差别不大。在愈伤组织的分化阶段,MS培养基远远优于NB培养基,MS培养基上愈伤组织有60%～70%能产生胚性愈伤并得到再生植株,而NB培养基上愈伤组织全部变成绿色的硬块状,并伴随许多毛状根生成,最终不能得到再生植株;暗培养条件下愈伤组织的分化率(55%)和植株再生率(47%)大大高于光培养(10%,7%)。     

日本结缕草成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的影响因子分析

 【目的】优化日本结缕草的组织培养体系，提高其植株再生率，建立高频植株再生体系。【方法】以日本结缕草的成熟种子为外植体，分析激素、基本培养基、培养条件、脯氨酸、Cu2+等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。【结果】（1）培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率，而BA降低愈伤组织的诱导率，低浓度的NAA(0.1～0.2 mg·L-1)能促进愈伤组织的形成，愈伤组织诱导的最佳培养基为ND＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋NAA 0.2 mg·L-1+L-Pro 500 mg·L-1，愈伤组织诱导率达57.3%；（2）愈伤组织继代的最佳培养基为MSD+ 2,4-D 1.0 mg·L-1；（3）愈伤组织分化的最佳培养基为MSD＋NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+BA 0.05 mg·L-1 + L-Pro 500 mg·L-1，分化率达36.7%。【结论】优化了日本结缕草的组织培养体系，初步找到了影响其成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的主要因子。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

影响日本结缕草成熟种子愈伤组织诱导率和出愈时间的相关因子研究

诱导率和出愈时间是愈伤组织诱导过程中的关键参数。本研究以日本结缕草（Zoysia japonica）成熟种子为材料,研究了研磨、接种方式和浸泡等因素对愈伤组织诱导率和出愈时间的影响。结果显示,在MS＋2,4-D 5 mg/L＋L-Pro 500 mg/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂7 g/L培养基上,pH5.8时,研磨处理的结缕草种子愈伤组织诱导率远高于未研磨处理的;随机接种方式的愈伤组织诱导率高于机械接种方式的;浸泡72h后愈伤组织诱导率高。结果表明,在研磨情况下,日本结缕草种子浸泡72 h后,采取随机接种方式,培养第5～7 d即出现愈伤组织,第9～11 d愈伤组织发生达到高峰期,第14 d便可进行继代培养,愈伤组织诱导率达95.6%。     

无种质基因型限制结缕草组培快繁体系研究

结缕草从愈伤组织发育成胚性愈伤再进一步分化为完整植株一直是该领域的研究重点与难点.本研究通过试验建立起一套完善的无种质基因型限制的结缕草组培快繁体系.结果表明,愈伤组织诱导培养基为MS+2 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+40 g/L蔗糖最为合适,体胚细胞诱导培养基为改良MS+2 mg/L 2,4-D...     

大穗结缕草愈伤组织诱导及植株再生研究

为获得大穗结缕草离体繁殖的最佳条件,以大穗结缕草不同器官作为外植体,MS为基本培养基,研究了不同消毒方法对外植体除菌效果的影响,不同外植体以及不同激素组合对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:在光强1 500~2 000lx,16h光照/8h黑暗,(23±2)℃培养条件下,大穗结缕草外植体,经70%酒精浸泡45s,0.1%HgCl2浸泡8min,污染率低,易于愈伤组织的诱导。以种子胚作为外植体最有利于愈伤组织的培养,愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+2,4-D(2.0 mg·L-1)+6-BA(0.2 mg·L-1)+TDZ(1.0mg·L-1)。     

以基因枪法转化日本结缕草获得转基因植株

将含有DREB1A和gus基因的双基因载体质粒包裹在金粉上,以基因枪轰击日本结缕草胚性愈伤组织,以gus基因的瞬时表达研究日本结缕草基因枪转化参数.结果表明, 在1 100 psi压力下6 cm的轰击距离、每皿轰击2次的转化效果最好,而金粉和质粒用量对转化效率影响不显著;经过筛选和再生培养,检测到gus基因的稳定表达,并获得日本结缕草潮霉素抗性株系,PCR-Southern杂交证实外源DREB1A基因已整合到日本结缕草基因组中.      

中华结缕草对潮霉素的敏感性研究

研究了中华结缕草3种不同外植体对不同浓度潮霉素溶液的敏感性。结果表明:中华结缕草不同外植体对潮霉素的敏感性存在差异,其中种子经50 mg/L潮霉素处理3周后,发芽率极显著减少,只有6%;愈伤组织经20 mg/L潮霉素处理3周后褐化率达到62%;离体叶片经50 mg/L潮霉素处理7 d后,黄化面积率超过85%。故中华结缕草的种子、愈伤组织、离体叶片在遗传转化中适宜的潮霉素筛选浓度分别为50、20、50 mg/L。     

狐米草离体培养植株再生

以狐米草种子的无菌苗和幼穗为外植体,在ＭＳ培养基上再生出完整的小植珠。在培养基中添加０．１ｍｇ／ＬＧＡ３,狐米草种子的发芽率由５．７％提高到２０．９％左右;仍不能发芽的种子,用刀剖开后再接种,发芽率达４９．０％。获得了两种类型的愈伤组织：白色、光滑的非胚性愈伤组织;绿色、结节状的胚性愈伤组织。非胚性愈伤组织诱导再生植株的频率为３．０％,胚性愈伤组织诱导再生植株的频率为１００．０％。研究建立起狐米草离体培养植株再生的技术体系。     

中华结缕草对潮霉素的敏感性研究

研究了中华结缕草3种不同外植体对不同浓度潮霉素溶液的敏感性。结果表明:中华结缕草不同外植体对潮霉素的敏感性存在差异,其中种子经50 mg/L潮霉素处理3周后,发芽率极显著减少,只有6%;愈伤组织经20 mg/L潮霉素处理3周后褐化率达到62%;离体叶片经50 mg/L潮霉素处理7 d后,黄化面积率超过85%。故中华结缕草的种子、愈伤组织、离体叶片在遗传转化中适宜的潮霉素筛选浓度分别为50、20、50 mg/L。     

鲁枣3号茎段不定芽诱导研究

为了建立枣优良新品种鲁枣3号的茎段不定芽再生体系,以其幼嫩茎段为外植体,研究了不同基本培养基和植物生长调节剂对茎段愈伤组织诱导及不定芽再生的影响。结果表明:基本培养基WPM比MS显著提高了愈伤组织诱导率,WPM上的愈伤组织诱导率达100%,但不能诱导愈伤组织产生不定芽。TDZ对不定芽的再生比6-BA更有效,成功诱导愈伤组织获得了14.9%的不定芽再生率,而6-BA未能诱导愈伤组织产生不定芽。鲁枣3号茎段适宜的不定芽再生培养基为:MS+1 mg/L TDZ+0.2 mg/L IBA。     

超甜玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导及再生方法研究

研究超甜玉米自交系1132成熟胚愈伤组织诱导和植株再生频率的影响因素,丰富诱导愈伤组织的外植体来源。以1132成熟胚为材料,通过比较研究蔗糖、脯氨酸、2,4-D等因素对愈伤组织诱导率和分化再生的影响,确定适合1132成熟胚外植体愈伤组织诱导和再生的方法。结果表明,蔗糖浓度40g/L,脯氨酸1.4g/L、2,4-D浓度为4 mg/L的诱导培养基上愈伤组织出现最早,且愈伤组织诱导率最高,达到75%。在继代培养基中2,4-D浓度为2 mg/L,其他相同的条件下,愈伤组织继代性最好,最易产生胚性愈伤组织。植株再生培养通过含60g/L蔗糖的MS培养基培养2~3周,后转入含30g/L蔗糖的MS培养基培养再生植株的方法最好,可实现芽和根的同步再生。利用1132成熟胚诱导产生愈伤组织,并分化再生植株是对幼胚再生体系的有效补充,可以克服玉米基因工程育种研究中幼胚受季节限制的不利条件,丰富甜玉米基因工程育种中外植体的来源。     

马铃薯松散型愈伤组织再生体系的建立

为了建立松散型愈伤组织再生体系,试验采用马铃薯茎段为外植体,在含有不同激素的培养基上诱导出愈伤组织,再将诱导出的愈伤组织转接到含有不同激素的培养基上进行松散型愈伤组织的诱导,将诱导出的松散型愈伤组织转接到再生培养基上进行再生芽的诱导,从中筛选出再生效果最好的培养基配方。结果表明,在MS+2 mg·L~(-1) 2,4-D的培养基上获得的愈伤组织生长效果最好;在MS+1 mg·L~(-1) KT+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D的培养基上可以获得理想的松散型愈伤组织,马铃薯松散型愈伤组织在MS+0.5 mg·L~(-1)KT培养基上诱导后可以获得较高的再生率。     

金昌枣叶片组织培养及植株再生

通过对金昌枣叶片诱导形成愈伤组织,诱导愈伤组织分化形成不定芽、不定根和再生植株及移栽条件的探讨,建立金昌枣叶片离体组织培养,形成再生植株的实用技术体系.     

冰草种间杂种蒙农杂种组织培养再生和遗传转化体系的建立

 以冰草属(AgropyronGaertn.)中的1个优质种间杂种——“蒙农杂种”冰草(A.cristatumA.desertorumcv.‘Mengnong’)为材料,以幼穗为外植体,建立了组织培养再生与遗传转化体系。试验中所用诱导愈伤组织的培养基为改良MS+2,4-D2.0～3.0mg·L-1,愈伤组织诱导率平均为83.4%;分化培养基为MS(无附加成分),分化率达59.6%;在1/2MS培养基上生根后得到完整小植株。在此基础上,以抗除草剂基因bar为目标基因,用基因枪法转化幼穗诱导的愈伤组织,并对再生植     

骏枣叶片组织培养及植株再生技术研究

通过对骏枣叶片诱导愈伤组织、愈伤组织诱导不定芽、不定根的分化及再生植株移植的最佳条件的探讨,建立了稳定的骏枣叶片离体培养及再生植株体系.     

胡萝卜幼苗根、茎、叶组织培养再生植株

[目的]研究胡萝卜幼苗的组织培养再生技术。[方法]以培养约2个月的胡萝卜幼苗为材料,分别取幼苗的根、茎、叶为外植体,研究不同培养基、不同外植体对愈伤组织诱导的影响,以及培养基对愈伤组织分化的影响。[结果]根、茎、叶为外植体均能产生愈伤组织,但以茎为外植体诱导的愈伤组织质量最佳,其愈伤组织的诱导率和分化率均为最高。[结论]建立了胡萝卜试管培养幼苗的愈伤组织诱导和再生植株体系,为今后的试验打下了基础。     

结缕草农杆菌介导遗传转化影响因子的研究

以结缕草愈伤组织为试材,对利用农杆菌介导法时就辐照、愈伤组织状态、共培养条件及负压处理等辅助处理方法对愈伤组织转化频率的影响进行研究.结果表明,2Gy的辐照剂量利于提高转化频率;1～2个月的愈伤组织适于转化;全光照的共培养条件下转化频率高于16h/8h光照培养和暗培养条件下转化频率;农杆菌与愈伤组织混合培养时给予适当的负压条件可提高愈伤组织转化频率和存活率.     

不同激素对补血草器官分化的影响

以补血草的带节花梗为材料,在离体条件下研究不同激素对花梗愈伤组织的诱导、不定芽分化、继代培养以及生根的影响,建立和优化离体再生体系,为补血草快速繁殖、种质资源保存以及遗传转化提供有效的途径和技术。结果表明,MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L为补血草花梗愈伤组织诱导的最佳培养基,愈伤组织诱导率最高(89.2%),出愈速度最快(12 d),产生的愈伤组织颜色翠绿,质地紧密;不定芽诱导以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的效果最佳,诱导率为74.3%,平均每块愈伤组织诱导的不定芽数为3.6个;在NAA 0.1～0.2 mg/L+6-BA 1.5～2.0 mg/L时的继代增殖效果最好,分化率大于85%,使幼苗数增加3倍以上;生根培养以1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L时的生根率最大,为100%。     

影响"扬稻6号"成熟胚愈伤组织再生植株的因子

以水稻中籼品种“扬稻6号”的成熟胚为外植体材料诱导愈伤组织发生,在愈伤组织继代培养阶段,研究山梨醇、甘露醇、脱落酸、蔗糖和麦芽糖对愈伤组织分化植株能力的影响作用,并探讨在愈伤组织诱导阶段添加6－苄基氨基嘌呤对后期愈伤组织分化植株能力的影响程度。试验结果表明,在愈伤组织继代培养基中添加30g/L山梨醇,3－5mg/L脱落酸和在愈伤组织诱导培养基中附加0.2mg/L 6-苄基氨基嘌呤有利于建立起较高频率的植株再生体系,愈伤组织经过继代培养后其植株再生的频率保持在50％左右。