恩诺沙星纯度标准物质的定值研究

采用质量平衡法、定量核磁法和示差量热扫描法3种不同原理的测定方法对恩诺沙星标准物质原料进行纯度定值。实验充分考察了有机杂质的色谱响应,比较了选用不同核磁内标物的定量结果。结果表明,3种不同原理的恩诺沙星纯度标准物质定值方法准确可靠,均符合并满足标准物质技术规范的定值要求,恩诺沙星纯度标准物质定值结果为99.7%。     

检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物的HPLC-FLD方法研究

建立了鸡蛋中氟喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星)残留的检测方法。样品由乙腈-0.5%偏磷酸溶液(5:5)提取, SPE小柱净化,采用Acclaim 120 C18色谱柱分离,流动相为0.05 mol/L磷酸/三乙胺溶液(p H=2.4)-乙腈(82+18, V/V),荧光检测器检测,其中激发波长280 nm,发射波长450 nm。结果表明,环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星在5～500μg/kg,达氟沙星在1～100μg/kg的线性范围内,相关系数均大于0.999 9。达氟沙星的定量限为2μg/kg,环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星的定量限为10μg/kg。4种药物平均添加回收率为85.77%～89.46%;批内变异系数为1.58%～4.85%,批间变异系数为2.64%～4.03%。本方法适用于鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测要求。     

转基因大豆MON89788基体标准物质的研制

转基因产品成分检测是转基因生物安全管理和标识的重要支撑,而转基因生物标准物质是获得准确、可靠、具有可比性检测结果的保证.转基因大豆(Glycine max) MON89788为我国批准进口用作加工原料的农业转基因生物,因此,制备转基因大豆MON89788基体标准物质是对其进行安全管理所必需的.本研究通过将转基因大豆MON89788和其受体材料A3244分别冷冻研磨成粉末,按质量分数称量配制,得到转基因含量为49.3 g/kg的标准物质.采用方差分析法(F检验法)进行均匀性检验,统计量F值为1.618,小于临界值F(0.05,11,24)标准物质均匀性良好;短期稳定性考察结果表明,标准物质可在常温下稳定储存4周,在-20℃下长期稳定性达到30个月.本批MON89788基体标准物质有两个特性量值,一是基于重量法配比混合的粉末质量分数,量值为49.3 g/kg,扩展不确定度为2.0 g/kg;二是基于qRT-PCR 8家实验室联合定值的转基因DNA与总DNA的质量分数,量值为49.8 ng/μg,扩展不确定度为5.9 ng/μg.本批标准物质每瓶1.0 g,使用时最小取样量为100mg,可用于对转基因大豆MON89788进行定性和定量检测,以及转基因大豆MON89788特异性检测方法的评价和实验室质量控制.本研究为我国转基因检测基体标准物质的研制提供了理论基础和技术支持.     

碱熔-原子荧光光谱法测定泥炭中砷的含量

建立了碱熔消解样品,原子荧光光谱法测定泥炭中砷含量的方法。确定了该方法的最佳仪器条件,方法的检出限为0.2137μg/L,相对标准偏差为4.26%(20μg/L)。测定了标准土壤样品(GBW08303)中砷的含量,与证书推荐值一致。同传统酸溶法相比,碱熔法测定值可靠。实际样品测定的加标回收率为98.2%。     

氢化物发生-原子荧光法测定植物样品中的硒含量

建立了氢化物发生-原子荧光法测定植物性样品中微量硒含量的方法。样品经微波消解完全后,先赶酸至1 mL,再用HCl在100℃还原10 min,然后以10 g/L的硼氢化钾(KBH4)为还原剂,5%HCl为载流,采用氢化物发生-原子荧光光谱仪进行测定。方法检测限为0.023μg/L,加标回收率为87.5%～105.0%,RSD小于1.0%,且标准物质测定结果均在推荐值范围内。该方法灵敏度和准确度高、稳定性好,适用于大量植物性样品中微量硒元素的测定。     

土壤中全硫测定——硫分析仪选择及方法优化

全硫含量是土壤调查项目中的必测项目。在燃烧法直接测定固体样品的硫分析仪中,高频红外碳硫仪检测限低,检测速度快,燃烧温度高,测定土壤标准物质的准确度高,是快速测定土壤中全硫的最佳仪器。应用高频红外碳硫仪测定样品过程中,坩埚空白、通氧流量、样品称样量、助熔剂添加量、定量方法等均会对测定结果准确度产生影响。通过对上述影响条件进行优化,研究确定了测定土壤中全硫含量的最佳条件:在严格控制坩埚空白的前提下,通氧流量设定为2～3L/min,依次称取0.1g样品(精度:0.0001g)、0.5g纯铁(精度:0.001g)和1.0g钨粒助熔剂(精度:0.001g)混合后上机分析,对不同浓度样品进行分段校正。值得注意的是,本研究证实了利用化学物质标准品建立工作曲线的可行性,为后期仪器优化和改进提供了宝贵思路。国家土壤标准物质测定结果的相对标准偏差(RSD)小于2%(n=6),测定值与标准值相对误差(RE)的绝对值小于1%(n=6),方法检出限为4.50 μg/g,说明方法的准确度和精密度高,适用于低含硫量土壤样品的批量检测。     

同位素稀释-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱定量分析复杂样品中恩诺沙星研究

本研究重点考察应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）结合同位素稀释质谱（IDMS）对牛奶、鸡蛋复杂样品中恩诺沙星（ENR）小分子进行定量分析的可行性。研究中,探讨了同位素稀释剂的适用性,通过采用Beta沸石负载的α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA）为基质,以恩诺沙星-D5为同位素稀释剂,将添加恩诺沙星药物的牛奶、鸡蛋等阳性样品经前处理后采用MALDI-TOF-MS进行定量测定。结果表明,恩诺沙星在0.5～8.0 mg/kg范围内线性关系良好,阳性蛋液、牛奶样品测量回收率分别在96.7%～100.0%和97.4%～99.2%之间,方法的重复性与精密度符合定量要求。结果证明,MALDI-TOF-MS结合IDMS技术可用于复杂样品目标物的定量分析,且同位素稀释法是提升MALDITOF-MS定量分析能力的重要手段之一。     

草莓中4种重金属元素的快速定量测定方法研究

应用原子荧光法和石墨炉原子吸收光谱法建立草莓中汞、砷、镉、铬的快速定量测定方法。将待测样品经石墨消解仪消解赶酸制备成待测液,上机分别测定汞、砷、镉、铬的含量。结果表明,这4种重金属元素的标准曲线的相关系数在0.996~1.000的范围内,检出限分别为汞0.028μg/kg、砷0.062μg/kg、镉0.14μg/kg、铬4.76μg/kg;3水平实验的回收率的范围为80.2%~108.3%,变异系数范围为1.58%~26.34%;标准样品的检测结果都在标准值范围内。本实验建立的方法仅需1次前处理即可测定草莓中汞、砷、镉、铬4种重金属元素,线性相关性好,检出限低,准确性好,安全性高,操作简便,可批处理,节约试剂耗材和检测时间。     

全蛋液的高压CO2杀菌工艺参数优化

为了达到杀灭蛋液中沙门氏菌和避免热巴氏杀菌引起鸡蛋蛋白变性的目的,该研究采用高压CO_2(high pressure carbon dioxide,HPCD)对全蛋液中沙门氏菌进行冷杀菌。通过单因素试验分析CO_2压力、杀菌温度、杀菌时间和搅拌速度对全蛋液中沙门氏菌的杀菌效果,并利用Box-Behnken响应面设计建立了沙门氏菌杀灭的二次多项回归模型。得出最佳杀菌工艺为:在CO_2压力为30 MPa、温度为40℃、时间为60 min、搅拌速度为125 r/min的条件下,能够使全蛋液中3×10~6~3×10~7 CFU/m L的沙门氏菌完全杀灭。同时还比较了巴氏杀菌和HPCD杀菌对全蛋液的货架期、功能特性的影响。研究结果表明:与巴氏蛋液比较,HPCD使全蛋液货架期延长至39 d;起泡能力和起泡稳定性分别提高了53.63%和2.38%;乳液Zeta电位提高至7.66 mV,提高了乳液稳定性;全蛋液的粘度、粒度储能模量和损耗模量分别降低,呈现粘弹性性流体的特性。该研究结果可为HPCD杀菌技术应用蛋液产品提供参考。     

苏丹红Ⅰ直接竞争ELISA检测试剂盒的研制

直接包被多克隆抗体建立了苏丹红ⅠELISA检测技术,研制苏丹红ⅠELISA检测试剂盒。结果表明,制备的多克隆抗体对苏丹红Ⅰ亲合力强、特异性高,试剂盒标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1.55～100μg/L,50%抑制率(IC50)为13.52μg/L,灵敏度(IC10)为1.95μg/L,平均批内与批间变异系数分别为7.6%与10.6%,与苏丹红Ⅱ、Ⅲ的交叉反应率分别为4.40%和1.70%,与苏丹红Ⅳ及其他违禁食品染色剂交叉反应率低于0.01%;干辣椒、辣椒粉、辣椒油与辣椒酱等4种样品的苏丹红平均添加回收率分别为88.1%、91.4%、78.2%和84.3%,最低检测限分别为1.82、1.71、2.19和2.12μg/kg;与HPLC检测方法具有较高的相符性,4种样品相关系数分别为0.95,0.94,0.86和0.87;该试剂盒在4℃下至少可保存180d,可用于辣椒及其制品中苏丹红Ⅰ的批量快速低成本筛查。     

ICP-MS测定植物样品中的砷和硒含量

研究建立了 ICP-MS 检测植物样品中砷和硒含量的检测方法。优化了 ICP-MS 的 STD、Oxygen-DRC、KED、Methane-DRC 四种工作模式下的 GF 和 RPq 值,并通过 6 种不同基质的标准物质,考察了不同工作模式测定砷和硒的准确度。结果表明,测定植物样品中的砷含量可优先选择Oxygen-DRC 模式监测⁹¹As O⁺和 KED 模式监测⁷⁵As⁺,检出限分别为 0.023 μg/L、0.031 μg/L;测定硒含量时可选择 Methane-DRC 模式监测⁸⁰Se⁺和 KED 模式监测⁷⁸Se⁺,检出限分别为 0.014 μg/L、0.144 μg/L。方法的加标回收率在 85.3%～109.1%,RSD 均小于 3%,适用于大量植物样品的测定。     

茶珍中As、Pb的氢化物发生原子荧光光谱法测定

本文研究了酸度、KBH4浓度、载气流速、基体改进剂等条件对荧光信号强度的影响,建立了氢化物发生原子荧光光谱法测定茶珍中微量As和Pb的方法。结果表明,在优化实验条件下,测定方法对As和Pb的检出限分别为0.024和0.83μg/L,相对标准偏差分别为0.734%和2.063%(As4μg/L,Pb2μg/L,n=11),二者加标回收率分别为As 89%~102%,Pb 91%~109%。该方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点,可用于茶珍中微量As和Pb的测定。     

双道原子荧光光谱同时测定土壤中砷、汞的方法研究

研究了土壤中总As、总Hg的同时测定方法,并对消化体系进行了筛选,利用正交试验设计法对测试条件进行了优化.建立了用王水消解样品,在10%盐酸溶液中用双道原子荧光光度计同时测定土壤中As、Hg的新方法.方法线性范围宽(As 0～200μg/L;Hg 0～10μg/L);检出限低(As 0.05μg/L;Hg 0.007μg/L);As的回收率为96.0%～101.0%,Hg的回收率为97.0%～103.7%;相对标准偏差(RSD)As为2.7%,Hg为4.5%.该方法准确、简便、快速,结果令人满意.     

氢化物发生原子荧光法同时测定土壤中砷和汞的含量

以(1+1)王水为溶剂浸提土壤样品,1.5%KBH4为还原剂,5%HCl为载流,建立了氢化物发生原子荧光法同时测定土壤中As和Hg含量的方法。该方法 As、Hg的检出限分别为0.0114μg/L、0.0294μg/L,RSD分别为1.11%、2.23%。As的加标回收率为90.9%和96.9%,Hg的为91.0%和111.4%。方法稳定性好、精密度高、操作简便、成本低,适用于大量土壤样品的As、Hg同测。     

基于液相色谱-串联质谱法的动物源性食品中33种农药及其代谢物的测定

采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）建立了同时测定4类动物源性食品中33种农药及10种代谢物残留量的检测方法。样品经QuEChERS方法进行提取、盐析和净化后,取上清液氮吹定容,过膜上LC-MS/MS,采用多反应离子监测模式（MRM）进行检测,基质匹配标准曲线外标法定量。结果显示,敌敌畏在2～100μg/L范围内线性关系良好,其余42种目标物均在1～100μg/L范围内线性关系良好,相关系数（r）介于0.996 8～0.999 9之间,检出限（LOD）为0.02～3.34μg/kg;在5、 20、 100μg/kg加标水平下的回收率范围为60.7%～120.0%,相对标准偏差（RSD）为0.2%～19.6%;定量限（LOQ）为5μg/kg。将方法应用于实际样品检测,在238份样品中有15份样品检出不同浓度的农药残留,残留水平均低于GB 2763-2021标准规定的最大残留限量（MRL）。检测结果表明,我国动物源性食品中农药残留问题的发生概率小,残留水平低。该方法简单准确,能满足动物源性食品中33种农药及10种代谢物的残留检测要求。     

气相色谱法同时测定水产品中12种多溴联苯醚

多溴联苯醚在水产品中的残留会危害人类健康。本文建立了水产品中12种多溴联苯醚的气相色谱测定方法。样品用30mL正己烷︰丙酮(1︰1)超声提取20min,60%硫酸脱脂,弗罗里硅土和中性氧化铝层析柱净化,5mL正己烷+5mL二氯甲烷按顺序洗脱,然后用配电子捕获检测器的气相色谱仪测定多溴联苯醚含量。多溴联苯醚在1~200μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数(r^2)>0.9972,检出限和定量限分别为0.2μg/kg和1.0μg/kg,样品的平均加标回收率为73.3%~98.4%,相对标准偏差<8.4%。本方法操作简便快速、灵敏、可靠,适用于水产样品中12种多溴联苯醚的测定。     

氢化物发生--原子荧光光谱法同时测定肥料中砷、汞的研究

通过对消化体系的选择及双道原子荧光光度计测试条件的优化,建立了氢化物发生—原子荧光光谱法同时测定肥料中砷、汞的方法。方法线性范围宽(As 0~100μg/L;Hg 0~10μg/L),检出限低(As 0.05μg/L和Hg 0.007μg/L)。无机肥料中As回收率为98.8%~100.4%,Hg回收率为98.9%~102.2%;有机肥料中As回收率为94.4%~105.6%,Hg回收率为97.6%~103.8%。     

杜马斯燃烧法和凯氏定氮法在土壤全氮检测中的比较研究

选用 6组不同全氮含量的土壤样品(梯度为 0%～0.06%、0.06%～0.1%、0.1%～0.2%、0.2%～0.3%、0.3%～ 0.4%和 0.4%～ 0.5%)和 4份土壤有效态成分分析标准物质为试验材料,分别采用杜马斯燃烧法和凯氏定氮法测定其全氮含量,并对两种方法测定结果的精密度、准确度和相关性及检测成本进行了比较分析。对土壤有效态成分分析标准物质全氮含量的检测,两种方法测定结果都接近于真实值,比较两种方法的相对标准偏差(RSD)和相对误差(RE)值,可确定杜马斯燃烧法精密度更高,且准确度更好;对于含氮量范围为 0%～ 0.06%的样品,两种方法的测定值之比(D/K)为 0.692～ 0.965,杜马斯燃烧法测定结果的变异系数为 0.00%～ 9.96%,测定结果不稳定,两种方法的测定值间存在显著的线性相关,但 R2仅为 0.9049;而含氮量大于 0.06%的样品,两种方法的测定值之比(D/K)为 0.940～ 1.104,变异系数均小于 5%,测定结果间存在显著的线性相关(R2=0.9979)。在检测成本方面,完成相同数量样品检测,杜马斯燃烧法所需时间和人力都约是凯氏定氮法的1/2。因而,杜马斯燃烧法是一种环保、高效的土壤全氮检测方法,对于含氮量范围为 0%～ 0.06%的土壤样品,凯氏定氮法的测定结果更接近于真实值,而对于含氮量大于 0.06%的土壤样品,杜马斯燃烧法更加适用。     

展青霉素分子印迹聚合物的制备及其在果汁样品固相萃取中的应用

采用沉淀聚合法,以2-吲哚酮和6-羟基烟酸为虚拟模板,4-乙烯基吡啶为功能单体,三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯为交联剂,甲醇为致孔剂,合成对展青霉素具有高选择性的分子印迹聚合物。通过扫描电镜、平衡吸附实验等对制备的印迹聚合物进行表征和测定,结果表明,分子印迹聚合物对展青霉素具有特异性吸附作用,其最大表观结合量为12 785.67μg/g。以此聚合物做为吸附材料,制备成固相萃取柱,进一步建立了分子印迹固相萃取-高效液相色谱串联质谱方法,用于测定食品中展青霉素。该方法在0.5～100μg/L范围内,展青霉素峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数(r2) 0.998,定量限为1.0μg/L,样品在不同添加水平下展青霉素的加标回收率为80.5%～97.0%,相对标准偏差RSD≤6.6%。     

水稻淀粉分支酶基因(RBE4)作为转基因水稻基体标准物质的内标准基因的研究

内标准基因(endogenous reference gene)是指具有物种专一性、不显示等位基因变化、拷贝数恒定的保守DNA序列,对基因定量分析时具有重要意义.本研究选取了5个水稻内标准基因:根部表达的水稻基因(rice root-specific,GOS9)、磷脂酶D基因(phospholipase D,PLD)、蔗糖磷酸合成酶基因(sucrose phosphate synthase,SPS)、水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)、泛素蛋白基因(ubiquitin 5,UBQ5)和2个外源基因:苏云金芽孢杆菌CrylAb杀虫晶体蛋白基因CrylAb和cryl Ab/cryl Ac融合杀虫晶体蛋白基因(CrylA c/CrylAb),分别以转基因水稻(Oryza sativa L.)克螟稻2号和TT51-1为模板,比较各自的外源基因(CrylAb =KMD2和CrylA c/CrylA b=TT51-1)与5个内源基因的PCR产物量,筛选出和外源基因PCR产物量最接近的内标准基因为RBE4.在此基础上,数字PCR不依赖于已知浓度的标准曲线来定值,可以避免标准样品的标准曲线和样品目的基因的扩增曲线在扩增效率上的不一致等因素所带来的误差,定值结果更加准确、可靠,采用数字PCR分析外源基因拷贝数与内标准基因RBE4拷贝数的比值,荧光定量PCR方法分析内标准基因RBE4和外源基因的定量检测稳定性、灵敏度等.结果表明,外源基因拷贝数与内标准基因RBE4拷贝数的比值在转基因水稻克螟稻2号和TT51-1上都较接近于1∶1,分别为115.9％和105.3％.RBE4的荧光定量PCR体系重复性、定量检测稳定性和灵敏度好,符合作为转基因水稻基体标准物质定量分析的内标准基因的要求,RBE4定量体系在TT51-1和克螟稻2号的最小检出限(LOD)分别为5～11 copies/μL和3～12 copies/μL,最小定量限(LOQ)分别为11～22和12～24 copies/μL.RBE4是转基因水稻标准物质研制和产品定量检测的适宜内标准基因.研究结果为转基因作物标准物质研制和定量检测的内标准基因选取提供一定的参考.