葡萄感白粉病基因的RAPD标记及其序列分析

【目的】为葡萄抗白粉病育种的辅助选择提供理论依据。【方法】以抗病的中国野生葡萄白河-35-1与感病的欧洲葡萄佳利酿杂交亲本及其F1、F2代为试材,通过对520个随机引物的筛选,从佳利酿中获得了葡萄感白粉病基因的RAPD标记OPV06-1100,并在欧洲葡萄、中国野生华东葡萄和美洲野生葡萄中进行了分析验证。【结果】经克隆、测序,RAPD标记OPV06-1100实际长度为1 016 bp。该标记与欧洲葡萄黄酮醇合成酶基因有92%的同源性,与13条欧洲葡萄叶片非生物胁迫数据库的EST序列有89%~97%的同源性;与3条来自欧洲葡萄感染葡萄皮尔斯病原菌后转录反应获得的EST序列有93%~95%的同源性;与拟南芥感白粉病基因PMR6序列有27.1%的同源性。【结论】OPV06-1100为葡萄属植物感白粉病基因的RAPD标记。该标记为认识葡萄感病基因和基因组以及标记辅助育种奠定基础。     

利用分子标记对无核抗病葡萄杂交后代的辅助选择

利用葡萄无核基因SCAR标记GSLP1-569,葡萄抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354和抗霜霉病基因RAPD标记S416-1224,对欧洲葡萄无核品种×中国野生葡萄、无核品种自交共6个组合的127株胚挽救苗进行了无核、抗病的分子标记辅助选择。结果表明,在127株胚挽救苗中,检测出拥有无核基因SCAR标记GSLP1-569的杂种27株,其中4株杂种同时拥有无核基因SCAR标记GSLP1-569和抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354;拥有抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354的杂种28株,拥有抗霜霉病基因RAPD标记S416-1224的杂种19株,其中10株杂种同时拥有OPS03-1354和S416-1224。获得的无核、抗病葡萄杂种将为进一步选育出新品系奠定基础。     

中国野生葡萄果实抗炭疽病基因的RAPD标记

以葡萄种间杂交组合88-110[毛葡萄83-4-96(♀)×欧洲葡萄粉红玫瑰]的F1群体为试材,运用RAPD技术,采用集群分离分析(bulked segregant analysis,BSA)法进行中国野生葡萄抗炭疽病基因连锁的分子标记研究.获得了与抗炭疽病基因相连锁的RAPD标记OPC15-1300,并在50株杂种后代、中国野生葡萄8种32个株系、14个欧洲葡萄品种中证明了该标记是可以遗传的.     

中国野生葡萄果实抗炭疽病基因的RAPD标记

 以葡萄种间杂交组合 88 110 [毛葡萄 83 4 96 (♀ )×欧洲葡萄粉红玫瑰 ]的F1群体为试材 ,运用RAPD技术 ,采用集群分离分析 (bulkedsegregantanalysis,BSA)法进行中国野生葡萄抗炭疽病基因连锁的分子标记研究。获得了与抗炭疽病基因相连锁的RAPD标记 :OPC15 130 0 ,并在 5 0株杂种后代、中国野生葡萄 8种 32个株系、14个欧洲葡萄品种中证明了该标记是可以遗传的。     

中国野生葡萄果实抗白腐病基因RAPD标记的克隆及序列分析

以感病×抗病的葡萄种间杂交组合白玉霓×塘尾的F1代及塘尾自交一代33个单株为试验材料,采用BSA法和RAPD技术,对155个随机引物进行筛选,从中获得了1个与中国野生葡萄抗白腐病基因连锁的RAPD标记OPP09-760。用WizardDNAClean-upSystem试剂盒回收纯化RAPD遗传标记OPP09-760,连接于pGME-T-EasyWector上并克隆测序,得到OPP09-760的全序列,其长度为766bp。根据两端序列设计特异PCR扩增引物作为合成中国野生葡萄抗白腐病检测探针的基础,用于检测葡萄抗白腐病种质种和分子标记辅助育种。     

中国野生葡萄抗白粉病基因的RAPD标记

利用随机扩增多态性 DNA ( RAPD)技术 ,对抗病×感病的葡萄种间杂交组合白河 - 35 - 1×佳利酿的亲本及其 F1 代的 2 4株杂种进行了抗白粉病的遗传分析 ,从 196个随机引物中获得了 1个与中国野生葡萄抗白粉病基因连锁的 RAPD标记 OPV0 3- 1380 ,并在中国野生葡萄华东株系和欧洲葡萄品种中进行了分析验证。     

葡萄种间杂交F1代的RAPD分析

从260个随机引物中筛选出多态性丰富的25个引物进行中国野生葡萄商-24与欧洲葡萄龙眼种间杂交F1代的RAPD分析。据对219个RAPD标记的统计分析结果表明,不分离标记、按1∶1或3∶1比例正常分离的标记、偏离孟德尔分离比例的标记和异常分离的标记分别占49.8%,40.6%,7.3%和2.3%。双亲共有标记中75.0%不发生分离,是不分离标记的主体。单亲特有标记中55.4%～65.3%发生正常分离,是1∶1分离标记的主体。商-24特有标记中不分离标记占20.4%,而龙眼特有标记中不分离标记占36.9%,商-24基因组中纯合基因位点比例要低于龙眼基因组中纯合基因位点的比例。异常分离的标记是指非亲本RAPD标记,本研究出现了5个异常分离的标记。符合1∶1或者3∶1分离比例的特有RAPD标记,可分别用于构建商-24和龙眼的遗传连锁图谱,双亲共有标记可用于构建双亲的遗传连锁图谱。     

SSR和RAPD 2种分子标记对昆明西山野生蘡薁葡萄资源遗传多样性分析比较

本研究分别应用SSR和RAPD 2种分子标记技术对来自云南昆明西山5个近距离群体的41份野生蘡薁葡萄(Vitis bryoni-aegoliaBge)样品进行遗传结构分析,以比较2种方法评价同种野葡萄各群体间遗传多样性的差异。结果发现,2种分子标记得到的基因分化系数(Gst)均小于0.5,基因流较大(Nm1),表明在较小的地理范围内,同一物种不同群体间存在的遗传分化小,遗传变异发生在群体内的概率远大于在群体间。但RAPD分子标记能更灵敏的体现各个近距离群体间的差异,得到的遗传距离与实际群体间的物理距离呈正相关(r=0.981,P=0.0190.05)。对远距离的同种野生葡萄以及栽培葡萄进行研究后,发现SSR和RAPD标记均能有效地把不同品种的葡萄资源分开,表现为同种野生葡萄处于遗传距离较近的位置上,聚类为总的一枝,而人工栽培品种处于聚类树状图的另一分枝,遗传距离较远。     

中国野生葡萄抗黑痘病基因RAPD标记的克隆及测序

用 Wizard DNA Clean- up System试剂盒将与中国野生葡萄抗黑痘病基因相连锁的 RAPD遗传标记 OPV0 2 - 6 0 0回收纯化 ,连接于 T- Easy Vector并克隆测序 ,得到了 OPV0 2 - 6 0 0的全序列 ,其长度为 6 16 bp。将两端序列设计特异 PCR扩增引物作为合成中国野生葡萄抗黑痘病检测探针的基础 ,用于检测葡萄抗黑痘病种质和标记辅助育种。     

葡萄无核基因的SCAR标记及Southern blot分析

根据无核基因特异RAPD标记的序列进行分析,合成1对特异引物P1+P3(序列分别是P1:5′CTCATCTTCTTGATGGTGAT3′;P3:5′AAGTGAAGAACATCATTAAGAAC3′),对30个葡萄材料进行PCR扩增,成功地将RAPD标记转换成SCAR标记。并对含有该标记序列的重组质粒进行Hind 和Spe 双酶切,获得的310bp片段回收后制成探测葡萄无核基因存在与否的杂交探针,成功地对7个葡萄品种进行Southernblot分析,实现了分子标记检测葡萄无核基因的目的。     

慎用对后茬作物有影响的除草剂

使用除草剂防除作物田间杂草是夺取丰收的重要措施,但是,有一些除草剂在土壤中分解速度慢,残留期长,容易对后茬作物产生影响,应谨慎使用.