酶联免疫吸附分析法测定猪、鸡粪便中11种β2–受体激动剂残留的不确定度评定

以市售β_2–受体激动剂酶联免疫检测试剂盒为基础,对采用酶联免疫吸附分析法测定猪、鸡粪便中11种β_2–受体激动剂残留的不确定度进行评估,找到影响不确定度的主要因素,为控制实验过程和评价检测结果可靠性提供依据。本研究对标准溶液配制、样品称量、样品前处理过程、样品添加回收率、酶联免疫吸附分析测试程序、酶标仪吸光度示值误差等测量不确定度来源进行了分析,通过评定各不确定度分量与不确定度大小,得到猪、鸡粪便中11种β_2–受体激动剂扩展不确定度的范围分别在0.25~2.4 ng/g和0.42~1.7 ng/g范围内。由各因素对合成不确定度贡献比的分析可知,标准溶液配制、样品前处理过程、样品添加回收率、酶联免疫吸附分析测试程序、酶标仪吸光度示值误差是主要的影响因素。通过合理地控制各影响因素有利于提高检测结果的准确性与可靠性。     

猪尿液中7种β-受体激动剂残留的一步法酶联免疫检测试剂盒的评价

对新研发的可同时快速检测猪尿液中克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、马布特罗、溴布特罗、妥布特罗和西布特罗等7种β-受体激动剂残留的一步法酶联免疫试剂盒进行评价,评价项目为检测限、灵敏度、多交叉反应率、准确度和精密度。结果表明研制的试剂盒各项技术指标均能满足相关要求。     

猪尿中β-受体激动剂多残留检测

<正>上个世纪80年代末,欧洲和美国就陆续宣布禁用"瘦肉精"-盐酸克仑特罗,但在90年代初却在欧洲许多国家都出现了多次严重的中毒事件,成为监控重点,但至今使用仍未绝迹,还演绎出10多种类似作用的β-激动剂类药物。目前,市场上已先后出现两种"瘦肉精"的替代品-莱克多巴胺、沙丁胺醇,对我国畜产品和饲料安全构成新的威胁。为了保障我国出口     

动物尿液中β-受体激动剂酶联免疫检测试剂盒使用通则的建立

酶联免疫检测法具有操作简便、灵敏度高、设备成本低、可实现批量样品的快速检测等突出特点,现已成为国内外广泛采用的检测农产品中违禁物质的手段。目前国内市场上针对动物尿液中β-受体激动剂的酶联免疫检测试剂盒种类繁多,但产品质量参差不齐。操作人员由于对产品性质、使用方法、注意事项等关键环节理解的偏差,往往造成检测结果不准确,导致阳性样品流入市场。本文建立了酶联免疫检测试剂盒的使用通则,旨在为检验检测人员采购、验收、使用该类产品提供技术参考。     

酶联免疫吸附法测定猪尿中安定的残留

用酶联免疫吸附法对猪尿中残留的安定进行检测,结果得出该方法的最低检出限为5．0μg/L;回收率在60％以上,批内变异系数≤17％,批问变异系数小于≤14％。表明该方法可用于安定残留量的筛选检测。     

猪尿中6种β-受体激动剂残留的超高效液相色谱-串联质谱法同时测定

建立了猪尿中苯乙醇胺A、莱克多巴胺、克仑特罗、西马特罗、特布他林、沙丁胺醇等6种β-受体激动剂在多反应监测模式下超高效液相色谱．串联质谱同时检测的方法。尿样经酶解,调至酸性,经固相萃取技术（SPE）净化富集。6种受体激动剂在0．2-5ng／mL的浓度范围内线性关系良好。方法的检出限和定量限分别为0．2ng／mL和0．5ng／mL。考察了0．5ng／mL、1ng／mL和2ng／mL三个添加浓度的回收率。6种化合物的加标回收率为87．2％-106．6％：RSD为1．2％-13．8％。该方法精密度好,灵敏度高,重现性好,能简便、快速、准确地测定猪尿中六种β-受体激动剂。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测猪尿中20种β-受体激动剂残留

建立了猪尿中吡布特罗、西马特罗、特步他林等20种β-受体激动剂残留检测的超高效液相色谱一串联质谱方法。猪尿样品经酶解后,调节pH值至碱性,用叔丁醇和叔丁基甲醚（6＋4,V／V）萃取,MCX柱净化,以0．1％甲酸乙腈溶液和0．1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。同位素内标法和外标法定量。20种β-受体激动剂在系列浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数1．2均大于0．99;20种药物在猪尿中的检测限为0．25μg/L,定量限为0．5μg／L。从0．5、1和5μg／L三个添加浓度检测结果可以看出,20种药物的回收率为75．7％～110．7％,批内批间相对杯准偏差均小于20％。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

β-兴奋剂多残留酶联免疫吸附检测法的试验

克伦特罗(CL)和沙丁胺醇(SAL)属于β-兴奋剂,都可增强肌肉发育,减少脂肪沉积,常被非法用于肉用动物的养殖[1]以提高瘦肉率.由于β-兴奋剂在动物组织中会形成蓄积性残留,世界各国均禁止此类药物作为饲料添加剂用于肉用动物的生产.因此,必须要对β-兴奋剂在动物养殖过程中的非法使用进行监控和检测.目前,对沙丁胺醇的残留检测方法主要是气相色谱法、高效液相色谱法[2-4],分子印迹技术[5]等.     

猪肝中β-受体激动剂残留检测能力验证研究

为了解我国食品检测实验室的β-受体激动剂检测能力,CNAS于2010年委托中国兽医药品监察所组织实施了猪肝中克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三种β-受体激动剂残留检测的能力验证工作。全国22个省、市、自治区的共68个实验室参加了本次能力验证,采用的测试方法主要是液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱法（GC-MS）。结果显示：克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的实验室满意结果率分别为77.8%、89.6%和92.2%,可疑结果率分别为11.1%、4.17%和0,不满意结果率分别为11.1%、6.25%和7.84%,说明参加能力验证的绝大多数实验室可以准确检测以上三种β-受体激动剂残留。     

酶联免疫吸附法测定猪尿中莱克多巴胺残留的研究

用酶联免疫吸附法对猪尿中莱克多巴胺进行了残留检测,结果:该方法的最低检测限为0.92μg/L;50%抑制浓度的平均值为2.7μg/L;回收率在(65.2±3.9)%(～86.6±6.1)%,批内变异系数≤17.8%,批间变异系数小于≤15.6%。试验表明该方法可用于莱克多巴胺残留量的筛选检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛乳中19种β-受体激动剂残留

建立同时检测牛乳基质样品中19 种β-受体激动剂类兽药残留的方法。样品经酸化乙腈溶液提取,利用Oasis PRiME HLB固相萃取小柱通过式净化处理除去磷脂,使用超高效液相色谱-串联质谱仪进行检测。结果表明：经过前处理方法与仪器条件优化后,19 种β-受体激动剂质量浓度在0～10 ng/mL呈良好线性关系（R2≥0.995）;牛乳中19 种β-受体激动剂添加量为0.2～1.0 μg/kg时,加标回收率均为70%～110%,相对标准偏差＜15%。本检测方法前处理简单快捷,具有较高灵敏度和稳定性,可以满足牛乳中β-受体激动剂类兽药残留的快速检测。     

猪肝中β-受体激动剂残留检测能力验证结果分析

为了解我国食品检测实验室的β-受体激动剂检测能力,CNAS于2010年委托中国兽医药品监察所组织实施了猪肝中克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三种β-受体激动剂残留检测的能力验证工作.全国22个省、市、自治区的共68个实验室参加了本次能力验证,采用的测试方法主要是液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱法(GC-MS).结果显示:克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的实验室满意结果率分别为77.8%、89.6%和92.2%,可疑结果率分别为11.1%、4.17%和0,不满意结果率分别为11.1%、6.25%和7.84%,说明参加能力验证的绝大多数实验室可以准确检测以上三种β-受体激动剂残留.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪尿中7中α2-受体激动剂残留

建立了检测猪尿中7种α2-受体激动剂的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。试样经调节pH,乙酸乙酯提取并浓缩、净化后,经液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。结果表明,7种α2-受体激动剂在1~80μg /L浓度范围内均呈良好线性关系,相关系数均大于0.99。7种目标化合物检测限为0.1 μg /L,定量限为0.3 μg /L。在1～20 μg /kg添加浓度范围内回收率为60%～110%,相对标准偏差小于15%。该方法方便快捷,定性准确,可为猪尿中该类兽药残留的日常监控提供方便、快捷的检测方法支持。     

酶联免疫吸附测定法检测克伦特罗

用自制的β激动剂克伦特罗（ＣＬ）抗血清建立其酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法。抗血清最佳稀释度为１ｖ１００００,免疫检测范围为１５．６μｇ／ｍ ｌ～１．９０ｎｇ／ｍ ｌ。用该法检测了饲料、尿样与脏器等样品,表明该法简便、特异和灵敏,具有实用价值     

动物性食品中β-受体激动剂类残留检测方法研究进展

食品安全是当今中国乃至世界普遍关注的问题,食品安全尤其以农产品中动物性食品最为引人注目。＂瘦肉精＂时间的影响,已引起足够的重视。畜产品质量安全检测,在畜产品安全中起无可替代的重要作用,是保障人们吃的放心的一项强有力手段。β-受体激动剂类残留检测,现已提到了相当高度,在畜产品残留检测占较大份额,检测方法发展也很快,相应快速检测卡、试剂盒产品开发也能基本满足检测需求。     

UPLC-MS/MS法检测动物性食品中19种β-受体激动剂残留

建立了前处理过程较为简便、能同时检测猪、牛和羊的肌肉、肝脏、肾脏和鸡蛋中特布他林、齐帕特罗、沙丁胺醇、西马特罗、西布特罗、克仑塞罗、羟甲基克伦特罗、克仑丙罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗、溴布特罗、克仑潘特、班布特罗、马布特罗、马喷特罗、苯乙醇胺A和喷布特罗19种β-受体激动剂的UPLC-MS/MS方法。样品经乙腈-异丙醇混合溶液(4∶1,V/V)提取后,用β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解,混合型阳离子交换固相萃取柱净化,然后用UPLC BEH C18色谱柱分离,以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,基质匹配溶液内标法或外标法定量。结果表明:19种β-受体激动剂在1~50 ng/m L基质匹配标准溶液浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数R2均大于0.990;在猪、牛和羊的肌肉、肝脏、肾脏和鸡蛋中的检测限均为0.1 ng/kg,定量限均为0.5 ng/kg。从0.5、1、2和5 ng/kg四个添加浓度检测结果可以看出,19种药物的回收率范围为60%~120%,批内、批间相对标准偏差均小于20%。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

高效液相色谱-串联质谱法测定莱芜香肠中3种β-受体激动剂残留

为建立一种快速测定莱芜香肠中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等3种β-受体激动剂残留量的液质联用检测方法,将样品加入乙酸铵溶液,经β-葡糖醛酸苷肽酶/芳基磺酸酯酶水解以及固相萃取柱净化后,以甲醇-0.1％甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源,以多反应监测方式进行采集,外标法定量.结果显示,3种β-受体激...     

超高效液相色谱-串联质谱法检测动物肌肉组织中19种β-受体激动剂残留

建立了猪、牛和羊肌肉组织中吡布特罗、西马特罗、特步他林、齐帕特罗、沙丁胺醇、西布特罗、克伦塞罗、克伦丙罗、羟甲基克伦特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克伦特罗、妥布特罗、福莫特罗、溴布特罗、克伦潘特、班布特罗、马布特罗和马喷特罗等19种β-受体激动剂残留检测的超高效液相色谱-串联质谱方法.猪、牛和羊肌肉组织样品用乙腈和异丙醇（8：2,V/V）提取,加入NaC1、Na2SO4和MgSO4盐析去杂质.待测药物经BEH C18色谱柱分离,以0.1％甲酸乙腈溶液和0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱.同位素内标法和基质匹配标准溶液外标法定量.19种β-受体激动剂在系列浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数r2均大于0.99;19种药物在肌肉组织中的检测限为0.25 μg/kg,定量限为0.5μg/kg.从0.5、1和5μg/kg三个添加浓度检测结果可以看出,19种药物的回收率为73.7％ ～ 114.1％,批内批间相对标准偏差均小于20％.结果表明,该方法简便快捷、灵敏度高、定性准确,适用于该类药物残留的检测.     

酶联免疫吸附法测定牛奶中青霉素残留的试验报告

用酶联免疫吸附法对牛奶中残留的青霉素进行了检测,结果得出该方法的最低检出限为2.0μg/L。本方法对牛奶中添加青霉素浓度为2.0～6.0μg/L的检测回收率在65.0%～115.0%范围内,批内变异系数≤14%,批间变异系数小于≤15%。表明该方法可用于青霉素残留量的筛选检测。     

UPLC-MS/MS法测定猪尿中β2-受体激动剂的基质效应研究

为探讨猪尿中β2-受体激动剂UPLC-MS/MS检测的基质效应及消除方法,将猪尿液样品经高氯酸酸解,乙酸乙酯和甲基叔丁基醚混合提取后,用MCX固相萃取柱净化,进行超高效液相色谱-串联质谱法检测.发现猪尿液中8种β2-受体激动剂UPLC-MS/MS检测的基质效应为71.0％～114.5％,并比较基质添加标准曲线以及内标法两种定量方法,对基质效应进行消除研究.结果表明,5.0 mL猪尿液在0.4、1.0、2.0 ng/mL添加浓度下,内标法的定量结果为64.7％～136.0％.基质添加校正曲线的定量结果为77.9 ％～117.9％.基质添加校正曲线定量更加稳定,可以取代内标法进行定量.