二肽在仔猪小肠刷状缘膜囊中跨膜转运的动力学特点研究

为研究二肽在仔猪小肠刷状缘膜囊（Brush border membrane vesicles,BBMV）中跨膜转运的动力学特点,采用同位素示踪及体外孵育技术,观察了几种不同条件下Gly-Pro的跨膜转运量。结果表明：（1）在有Na^＋和无Na^＋的条件下,Gly-Pro的转运均受到Leu-Gly、Ala-His、Gly-Leu和His-Leu等二肽的极显著抑制（P〈0.01）,但不受甘氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-精氨酸、L-谷氨酰胺和L-蛋氨酸的影响;（2）仔猪小肠BBMV对Gly-Pro的转运呈现非线性关系,但是遵从Michaelis-Menten动力学方程,其Kt（亲合常数）值为0.64 mmol/L,而Vmax为7.42 nmol/（min.mg）膜蛋白;（3）仔猪小肠BBMV对Gly-Pro的摄取是由于Gly-Pro直接进入BBMV内部的结果,而不是仅仅结合在BBMV上所引起的。结果提示,Gly-Pro在仔猪小肠BBMV中的跨膜转运具有载体介导的转运特点。     

膜电位对仔猪小肠刷状缘膜囊中二肽跨膜转运的影响

为研究膜电位与仔猪小肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles,BBMV)中二肽跨膜转运之间的关系,采用膜电位诱导、体外孵育及同位素示踪技术,分别观察由缬氨霉素和羰基氰化物三氟甲氧基苯腙(carbonylcyanide p-(Tri-fluoromethoxy)phenylhydrazone,FCCP)诱导仔猪小肠BBMV产生的K 扩散电位(膜囊内负)和H 扩散电位(膜囊内正)对Gly-Pro二肽跨膜转运的影响。结果表明:在有Na 和无Na 的状况下,K 扩散电位均促进Gly-Pro二肽由膜囊外进入膜囊内部;H 扩散电位抑制Gly-Pro二肽由膜囊外进入膜囊内部。结果提示:在仔猪小肠BBMV转运体系中,Gly-Pro二肽的跨膜转运具有与非Na 的阳离子协同转运的特点。     

内流质子梯度对Gly-Pro在仔猪小肠跨膜转运中的驱动作用

为研究内流质子梯度对仔猪小肠中Gly-Pro跨膜转运的影响,采用放射性同位素示踪及体外孵育技术,观察在不同H＋浓度条件下,Gly-Pro在仔猪小肠刷状缘膜囊（Brush border membrane vesicles,BBMV）的跨膜转运量。结果表明：膜囊内液pH为7.5时,Gly-Pro的转运显著地受到膜囊外液pH值的影响,pH为4.5～5.5时,转运最快;其中pH为5.0时的Gly-Pro跨膜转运速度在1-20 min一直高于pH为7.5时的转运速度;内流质子梯度的存在可以显著促进Gly-Pro的转运,无内流质子梯度时,Gly-Pro的转运不受膜囊外液pH变化的影响。研究结果提示,跨膜内流质子梯度是仔猪小肠中Gly-Pro的跨膜转运的一种驱动力。     

二肽在断奶仔猪小肠刷状缘膜囊中水解状况的研究

通过孵育试验研究了甘-L-亮(Gly-Leu)和L-组-L-亮(His-Leu)2种二肽在断奶仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush Border Memlorane Vesides，BBMV)中的水解状况。结果表明，孵育液pH值(分别为3．5、4．0、4．5、5．0、5．5、6．0、6．5、7．0、7．5和8．O)、孵育温度(25℃和37℃)、孵育时间(O．5、1、2、5、10、20、30和40min)以及BBMV(二肽酶)的添加量均不影响此2种二肽在断奶仔猪小肠BBMV孵育体系中的水解。结果提示，Gly-Leu和His-Leu2种二肽在断奶仔猪小肠BBMV体系中均不水解。     

仔猪小肠上皮细胞刷状缘膜囊制备方法的研究

采用CaCl2 和MgCl2 两种沉淀法制备了断奶仔猪小肠上皮细胞刷状缘膜囊 (BBMV) ,并通过测定BBMV制备过程中的细胞膜或细胞器标志酶酶活、核糖核酸和脱氧核糖核酸含量等指标对所制备的BBMV的纯度进行了评价。结果表明采用MgCl2 沉淀方法制备的断奶仔猪小肠BBMV纯度优于CaCl2 沉淀法。     

断奶仔猪小肠刷状缘膜囊中小肽水解的研究

通过孵育试验研究了L 亮 甘 (Leu Gly)和 β 丙 组 (Ala His)等两种二肽在断奶仔猪小肠刷状缘膜囊 (BrushBorderMembraneVesicles,BBMV)中的水解状况。结果表明 ,孵育液pH(分别为 3.5 ,4 .0 ,4 .5 ,5 .0 ,5 .5 ,6 .0 ,6 .5 ,7.0 ,7.5和 8.0 )、孵育温度 (2 5℃和 37℃ )、孵育时间 (0 .5 ,1,2 ,5 ,10 ,2 0 ,30和 4 0min)以及BBMV(可能含二肽酶 )的添加量对两种二肽在断奶仔猪小肠BBMV孵育体系中浓度没有影响。结果表明 ,Leu Gly和Ala His在断奶仔猪小肠BBMV体系中均不水解     

高脂饲料对细鳞鱼稚鱼刷状缘膜水解酶发育的影响

试验评价了蛋白质含量为48%时,脂肪含量分别为15%、20%、25%、30%的饲料对开口后20～60 d的细鳞鱼稚鱼肠道水解酶-γ-谷氨酰肽转移酶、碱性磷酸酶活性发育的影响。结果表明,适度的饲料脂肪含量可以提高水解酶活性,并强于生物饵料,促进了肠道对营养物质的消化。饲料脂肪为20%～30%的水平时,水解酶的活性相对较高。     

仔猪小肠对二肽吸收特点的研究

本试验采用体外外翻肠囊的方法研究了等摩尔浓度的Ｌ 甘氨酸 Ｌ赖氨酸组成的二肽（Ｇｌｙ－Ｌｙｓ）和游离甘氨酸和赖氨酸混合物（Ｇｌｙ＋Ｌｙｓ）在仔猪小肠各段的吸收特点。将仔猪小肠划分为空肠前段、中段、后段和回肠段,分别在各段设置了两个不同的培养液处理组,分别是浓度为２０ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｇｌｙ－Ｌｙｓ和Ｇｌｙ＋Ｌｙｓ混合物培养液组。每个处理３个重复（回肠段无重复）,每个重复为一个外翻肠囊,将每个外翻肠囊置１０ｍｌ培养液中培养１５分钟。旨在比较：体外培养１５分钟后,同一浓度下的Ｇｌｙ－Ｌｙｓ和Ｇｌｙ＋Ｌｙｓ在外翻肠囊各部位的吸收差别,从而确定Ｇｌｙ－Ｌｙｓ在仔猪各肠段的吸收特点。结果表明,同等摩尔浓度下,Ｇｌｙ－Ｌｙｓ组中的赖氨酸和甘氨酸在仔猪空肠中段肠组织的累积量显著大于Ｇｌｙ＋Ｌｙｓ组;从肠囊在１５分钟培养后总的氨基酸摄入量上看,Ｇｌｙ－Ｌｙｓ组的赖氨酸和甘氨酸在空肠中段高于Ｇｌｙ＋Ｌｙｓ组,且二者在赖氨酸上的差异显著。这说明,二肽中甘氨酸和赖氨酸至少在空肠中段的运输系统有别于游离态的甘氨酸和赖氨酸,且对二肽的运输显得比对游离氨基酸的运载更有效。     

高效液相色谱法评定二肽水解的研究

用高效液相色谱法测定了仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush Border Membrane Vesicles,BBMV)孵育体系中甘-L-亮(Gly-Leu)和L-组-L-亮(His-Leu)等两种二肽的含量.分别以水(pH值为5.55)和乙腈-三氟乙酸(三氟乙酸浓度为0.1 %)为流动相,经Phenomennex ODS分析柱(250 mm×4.60 mm,5 μm,C18)分离,检测波长为190～400 nm.结果表明,两种二肽在0～300 μg mL-1的之间,其峰面积(X)对质量浓度(Y,μg mL-1)回归得方程分别Y＝0.000 1 X+0.871 9,R2＝0.999 9和Y＝0.000 06 X+6.631 28,R2＝0.998 2;回收率依次为99.91 %和100.05 %,保留时间依次为2.07和1.01 min;最大吸收波长依次为197和199 nm.该方法快速、简便和准确,结果稳定,重现性好,可以用来评定该两种二肽在动物小肠BBMV体系中的水解状况.     

生长猪小肠钠依赖型磷摄入特性的研究

选取6头体重接近的3月龄生长期大白猪,屠宰后刮下肠黏膜,提取3段小肠上皮细胞刷状缘膜囊泡(Brush-border membrane vesicles,BBMV)。在室温条件下,研究各段小肠BBMV磷的摄入量,pH和钠离子依赖性,并测定BBMV磷吸收动力学参数。结果表明,生长猪BBMV对磷的主动吸收和被动扩散在酸性pH下均受到抑制。钠离子水平影响BBMV磷的主动吸收。pH7.4条件下,测得钠依赖型磷转运系统Hill系数(napp)为2.07,即转运1个磷酸根,至少有2个钠离子与其协同转运。不同肠段BBMV磷的主动吸收并没有显著差异。pH7.4条件下,生长猪钠依赖型磷转运系统对磷的亲和力常数(Km)为(0.43±0.09)mmol/L。最大转运速度(Vmax)为(2.25±0.19)nmol/(mg蛋白.15 s)。     

高温应激对仔猪小肠上皮脂质过氧化的动态影响

本文旨在研究高温应激状态下仔猪肠上皮脂质过氧化指标的变化。选用35日龄农大小型试验猪32头,分为对照组和应激组。各组分别于试验第1天、第3天、第6天和第10天采样,测定各段肠组织匀浆液SOD、GSH-Px、MDA含量的变化。结果发现:随着应激时间的延长,对照组肠组织中各检测指标未出现显著变化,应激组差异较大。与对照组比较,应激组试猪空肠SOD、GSH-Px活力在第6天和第10天显著降低,MDA含量在第1天和第3天显著升高;回肠SOD、GSH-Px活力在应激后第1天和第3天均显著下降,但MDA含量无显著变化;十二指肠仅见第1天出现MDA含量上升现象。这表明高温应激状态下仔猪小肠组织的脂质过氧化增强,其中以空肠组织最为明显。     

谷氨酰胺二肽对断奶仔猪生长、免疫、抗氧化力和小肠粘膜形态的影响

本文旨在研究谷氨酰胺二肽(Gln二肽)对断奶仔猪生长、免疫、抗氧化力和小肠粘膜形态的影响,探讨Gln二肽缓减仔猪断奶应激的机理。选用96头平均体重(6.23±0.13)kg杜×(大×长)三元杂交仔猪,按完全区组设计分为4组,每组4个重复,每个重复6头(公母各1/2),各处理仔猪分别饲喂基础饲粮、基础饲粮添加0.125%Gln二肽、基础饲粮添加0.25%Gln二肽和2%血浆蛋白粉的试验饲粮。结果表明,饲粮中添加0.125%和0.25%Gln二肽可以提高断奶仔猪生长性能。其中,断奶后0～10d0.125%Gln二肽组的生长性能与2%血浆蛋白粉组相近;断奶后11～21d0.125%Gln二肽组的生长性能略优于2%血浆蛋白粉组(P>0.05),而每kg增重饲料成本显著低于2%血浆蛋白粉(P<0.05)。随饲粮Gln二肽添加水平提高,断奶后第10天血液中CD4 数量以二次曲线方式升高(二次,P=0.08),第10和第21天血清GSH-Px活性分别以线性(线性,P=0.02)或二次曲线(二次,P=0.10)方式升高,第10和第21天血清SOD活性均以线性方式升高(线性,P=0.10和0.08)。断奶后第21天,0.125%Gln二肽组十二指肠的隐窝深度显著低于基础饲粮组(P<0.05)。总之,Gln二肽可能通过增强断奶仔猪细胞免疫功能、改善抗氧化能力、防止小肠粘膜绒毛萎缩,以缓减仔猪的断奶应激,从而提高生长性能,且以0.125%Gln二肽组仔猪生长性能最好,每kg增重饲料成本最低。     

断奶对仔猪肠上皮间淋巴细胞、杯状细胞数量的影响

试验选用12窝0～56日龄仔猪,以断奶日龄为主要因素,随机分成17、21、28、35日龄断奶4个处理组,每个处理3个重复,每个重复为一窝仔猪。试验期间,实行三阶段饲养,7日龄开始补饲,7～28日龄采食日粮Ⅰ,29～42日龄采食日粮Ⅱ,43～56日龄采食日粮Ⅲ。17日龄断奶组分别于断奶后12小时、4天、4天+1周、4天+2周,22、28日龄断奶组分别于断奶后12小时、1周、2周、3周,35日龄断奶组于断奶后12小时、1周、2周剖杀,每次每个重复分别剖杀1头;同时35日龄断奶组作为对照组,分别在17、21、28日龄断奶组剖杀时间点的相同日龄,每次每个重复也各剖杀1头,共计剖杀54头。剖杀取得的样品用于测定仔猪小肠上皮间淋巴细胞和杯状细胞数量。结果表明:断奶日龄和日龄对仔猪小肠各段上皮间淋巴细胞数量、杯状细胞数量均有显著影响(P<0 05),28日龄断奶组仔猪小肠各段上皮间淋巴细胞数量显著高于其它3组(P<0 05),而21日龄断奶组仔猪小肠各段上皮间淋巴细胞数量显著低于其它3组(P<0 05)。断奶越早、日龄越小的仔猪肠上皮间杯状细胞数量显著升高(P<0 05)。     

丁酸钠对肉鸡小肠黏膜免疫相关细胞的影响

本试验通过日粮中添加丁酸钠研究其对肉鸡小肠黏膜免疫相关细胞的影响.将32只1日龄健康AA肉鸡随机分为4个处理组:A组(对照组:基础日粮)、B组(丁酸钠组:基础日粮 500mg/kg丁酸钠)、C组(丁酸钠 芽孢杆菌组:基础日粮 100 mg/kg丁酸钠 200 mg/kg芽孢杆菌)和D组(丁酸钠 酶制剂组:基础日粮 100 mg/kg丁酸钠 500 mg/kg酶制剂).试验7周后,采用组织学技术研究肉鸡小肠黏膜免疫相关细胞的分布变化.结果显示:(1)与对照组比较,小肠肥大细胞、上皮内淋巴细胞及杯状细胞的形态无明显变化,肥大细胞多存在于肠腺周围和肠绒毛固有层,(2)各试验组的小肠肥大细胞、上皮内淋巴细胞及杯状细胞数均显著高于对照组(P<0.05);(3)各试验组和对照组小肠肥大细胞和上皮内淋巴细胞数均从前向后逐渐减少,十二指肠的肥大细胞最多,空肠的次之,回肠的较少;杯状细胞数则与之相反.由此可知,3种添加剂可不同程度地改善肉鸡小肠黏膜结构,且将丁酸钠分别与芽孢杆菌和酶制剂混合饲喂,效果在一定程度上好于单独饲喂丁酸钠.