白茶与茶树非绿色器官的总RNA提取

常规TRIzol法适用于一般茶树品种绿色叶片和芽的总RNA提取,但对于白茶品种芽叶和茶树非绿色组织的多糖和其它次生代谢物质含量高,常规TRIzol法提取总RNA存在一定困难.本文尝试利用改良热酚法提取白茶和非绿色组织的总RNA.结果表明,该法对于白茶、胚根和胚芽总RNA提取效果良好,可以用于cDNA的制备和RT-PCR反应的研究.     

玉米RNA提取方法的比较研究

以玉米嫩单10为材料,比较TRIzol法、CTAB法和SDS法改进法提取总RNA的效果。结果表明,SDS法改进法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,OD₂₆₀/OD₂₈₀值介于1.7～2.2;CTAB法提取的RNA 28S rRNA明显缺失,泳道模糊不清,杂质多;TRIzol法RNA降解严重,沉淀方法以无水乙醇配合LiCl沉淀RNA节省时间,反转录和RT-PCR效果好。改良的SDS酸酚法适合玉米总RNA的提取。     

锥栗总RNA提取方法比较及LFY基因克隆

锥栗总RNA的提取质量是后期锥栗空棚分子机理研究的关键。以锥栗花序为材料,采用2种植物RNA快速提取试剂盒、改良Trizol法和改良CTAB法提取锥栗总RNA,并采用多种方法检测提取出的总RNA的质量。结果表明:采用改良CTAB法获得的总RNA可明显看到28S和18S条带,且亮度比约为2∶1,DNA基本无残留,点样孔无杂质,OD260/OD280均接近2,而OD260/OD230均超过2,经逆转录可作为模板,获得LFY基因。改良后CTAB法最合适,所得的总RNA产量高、比较纯净、完整,可用于后续的逆转录并进行基因片段的扩增。     

剑麻核酸的高效提取及应用

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点,对其总RNA和基因组DNA提取进行研究。比较了改良SDS法、改良CTAB法提取总RNA和SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果表明：改良CTAB法提取总RNA效果较佳,所得RNA OD260／OD280高于1．8,OD260／OD230大于2．0,而CTAB法提取基因组DNA纯度和完整性较好。基于RNA和DNA水平,分别对剑麻的苯丙氨酸解氨酶基因（PAL）RT—PCR和RAPD反应体系进行优化,均得到理想条带。此方法提取剑麻的核酸可运用于后续分子生物学研究,为其它材料核酸的分离提供参考依据。     

2种提取椰子树RNA方法的比较研究

椰子树组织中富含多糖和酚类化合物，为了获取高质量的RNA，笔者以椰子树叶片和根部为材料，比较分析CTAB法和SDS法提取RNA的效果。结果表明：CTAB法提取椰子树组织的总RNA效果较好，能有效克服酚类物质和多糖对RNA提取的影响。经OD值检测和电泳检测，总RNA的28 S和18 S条带清晰可见，纯度较高，完整性好，无明显降解，以此RNA为模板进行RT-PCR反应，能获得特异条带，表明该RNA完全可以用于后续的分子生物学操作。     

番木瓜果肉RNA提取方法的比较

为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18SRNA的亮度比约为2：1,D260／D280达1．9且得率较高,为380．5μg·g^-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法

植物总RNA的提取是进行下游分子生物学实验的关键基础,高质量的RNA是下游实验成功的保障。许多植物由于其体内含有酚、多糖以及其他的一些次生代谢物,要获得这些植物高质量的总RNA比较困难。本文在多次实验的基础上,提出了改良LiCl沉淀法,该方法步骤少、效率高,使用此方法得到的棉花幼苗总RNA经检测表明其质量比使用冷酚法提取的RNA要高得多,且完全满足后续实验的要求。使用此方法成功提取了香蕉叶片、根、木薯叶片的RNA,经检测表明,所得到的RNA完整性好,完全可以满足后续实验的要求,说明改良LiCl沉淀法是一种适用于多酚多糖植物的快速RNA提取方法。     

一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法

在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA)。结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3体积和2/3体积的KAc得到总RNA,添加1/3体积无水乙醇处理得到总DNA。该结果获得一种简单、快速,能在1次实验中添加不同试剂提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法。     

改良CTAB法提取野牡丹科7种植物DNA

以野牡丹科植物幼叶为材料，对影响野牡丹科植物DNA提取质量的主要因子进行研究，以期建立适宜野牡丹科植物DNA提取的优化反应体系。结果表明，当提取液中CTAB浓度为4%，沉淀时加入0.6倍体积预冷异丙醇、1/2倍体积5 mol/L NaCl、2倍体积无水乙醇时，所提取的DNA纯度较高，电泳条带清晰。且在此条件下，能提出野牡丹科7种植物的DNA。     

茉莉花渣多糖含量测定方法的建立及抗氧化作用研究

建立了茉莉花渣多糖含量的测定方法，并对茉莉花渣多糖进行了抗氧化作用研究，结果表明：采用蒽酮-硫酸比色法以624nm为测定波长在浓度为10-60ug／mL（R^2=0．9993）范围内与吸光度呈良好线性关系，该法的平均加样回收率为100%，重复性良好（RSD=0．57％），测定准确可靠。茉莉花渣多糖在0．2—1．0mg／mL范围内对·OH具有明显的清除作用，IC50为0．52mg／mL。     

二倍体西瓜及其同源四倍体叶片sRNA表达谱分析

植物多倍化后的基因表达平衡重建受到sRNA调节,miRNA是植物多倍化中基因表达进行反式调控的主要小分子成员。本研究利用新一代高通量测序对西瓜二倍体(2n)及其同源四倍体(4n)叶片的sRNA进行表达谱测序分析。结果表明:(1)2n中sRNA以21 nt为主,4n中则以24 nt为主。(2)在2n和4n鉴定出已知miRNA分别为110个和172个,新miRNA分别为246和829个,其中差异表达的已知miRNA 205个,新miRNA 815个。(3)GO功能显著性富集分析表明差异表达的miRNA在细胞组成、代谢过程及催化活性上显著富集。(4)KEGG代谢分析表明,差异表达的已知miRNA主要富集在初级代谢和次级代谢途径上,新miRNA则主要富集在植物激素信号转导途径、RNA转运途径和ABC转座子途径上。(5)差异表达的miRNA中与植物抗逆胁迫相关的已知miRNA 25个,新miRNA 62个,且80.46%抗逆miRNA在西瓜二倍体中上调表达,是四倍体中的4倍以上。根据miRNA的负向调控原理推测这些上调表达的miRNA在西瓜二倍体中可能会抑制部分抗逆基因的表达,影响二倍体的抗逆性。本研究在转录后调控调控水平上为西瓜多倍体较二倍体拥有更强抗逆性提供了理论依据,同时对西瓜多倍体及二倍体之间的基因表达谱分析做了补充。     

茶园土壤根际抗酸铝真菌A1F-1总RNA的提取

用总RNA提取试剂盒提取经Al2(SO4)3100mol/L诱导和未经诱导的抗酸铝真菌ALF-1的总RNA，结果表明，预培养时间超过10小时，总RNA含量下降；在冰浴条件下提取RNA质量优于常温条件下提取的RNA；为了获得优质总RNA，ALF-1菌的预总培养和诱导时间分别以10h和5h为宜，整个RNA提取过程必须在冰浴条件下进行。     

提取高质量茶树总RNA的方法研究

由于茶树富含多糖、多酚，从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难，试用了多种方法都未能获得高质量的RNA。借鉴多年生的草本植物RNA提取方法——cTAB法，并在此基础上进行改进，首次提取了茶苗嫩根中的总RNA。电泳检测显示，该方法提取的总RNA28S和18S条带清晰且28S较18S条带亮，紫外光谱分析显示A260/A280的比值为1．93。用于RT—PCR反应，成功克隆了492bp的谷氨酰胺合成酶基因片段，说明该方法提取的RNA纯度和完整性好。     

茶树总蛋白质提取方法及双向电泳体系的建立

为探索适用于茶树叶片蛋白质组学研究的双向电泳技术体系(2-DE),比较三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法和改良酚抽法2种不同总蛋白质提取方法、不同蛋白上样量对2-DE的影响。结果表明:改良酚抽法更适合茶树总蛋白质的提取;采用1.5 mg的蛋白质上样量,最终可获得蛋白质点较多、背景清晰、分辨率较高的双向电泳图谱,为进一步深入开展茶树蛋白质组学的研究奠定了基础。     

椰子水多糖的提取工艺

对椰子水多糖的提取工艺进行研究, 分别探讨温度、 pH 值、 提取时间、 乙醇体积比等因素对多糖提取率的影响。 结果初步表明, 以料水比 1 ∶ 10、 温度 75 ℃、 pH7.0、 提取时间 120 min, 然后加入乙醇, 使得乙醇浓度（体积比）为 85％时, 4 ℃下沉淀 24 h 的工艺条件有利于椰子水多糖的提取。     

茶树中提纯总RNA的研究

在克氏一步法分离总RNA的基础上 ,根据茶树叶片生化成分特点 ,做了部分修改 ,并研究了不同浓度的L -半胱氨酸和可溶性聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)、不溶性PVP对提取的RNA纯度、回收率和完整性的影响。分光光度计检测和变性琼脂糖凝胶电泳结果证明 :使用本方法并加入 5- 10mmol LL -半胱氨酸或 4 % - 6 %可溶性PVP能提高RNA纯度和 (或 )回收率 ,研磨时加入5% - 10 %不溶性PVP对提高RNA完整性有较好的效果     

茶种质资源室内保存技术研究──茶树茎切段试管苗保存技术

应用组织培养技术保存茶树种质资源，是当今人们正在探索的一种有效、安全的新途径。茶树茎切段试管苗保存技术的研究结果表明，诱导茎切段培养基以ＭＳ或改良ＥＲ基本培养基附加ＢＡ０．０４ｍｇ／Ｌ－４．００ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０４ｍｇ／Ｌ－０．５０ｍｇ／Ｌ为宜。茎切段的芽诱导率在品种间或同一品种不同季节间存在着明显的差异。茎外植体采样以春梢为好。弱光照、较低温和适当添加化学抑制剂（如甘露醇、ＰＰ＿３３３、ＡＢＡ等）有利于延缓培养物生长、增加培养物保存期。     

富含多糖甜玉米幼穗RNA提取及高温胁迫基因表达分析

以改良Trizol试剂法从富含多糖的甜玉米幼穗中提取高质量、完整的总RNA,利用实时荧光定量PCR对高温胁迫下粤甜13雌穗发育的8个差异表达基因进行分析。结果表明,8个基因分为上调表达和下调表达,实时荧光定量PCR和测序法基因表达谱检测的基因上调或下调表达的趋势一致,上调表达基因ZM2G058057和下调表达基因ZM2G059964、ZM2G044670相对表达量较高,可能在高温胁迫影响甜玉米幼雌穗发育过程中起更重要的作用。     

浙江茶情(1)

1.省政府出台政策扶持良种发展2 0 0 1年底省政府办公厅下发了“关于加快茶树改良的通知”,通知要求 :一是争取到 2 0 1 0年全省无性系良种面积达到 1 1 0万亩 ,占茶园总面积的60 %以上 ,使我省跨入全国茶树无性系良种化先进行列 ;二是要建立完善茶树良种繁育体系 ,这是各级政府抓茶树改良的重要手段。省级在新昌建立茶树良种繁育示范场 ,为全省提供原种接穗与种苗 ,各地要根据需要建设好育苗基地和育苗点 ;三是制定落实有关政策措施。要运用市场机制 ,主要依靠茶农自行解决有关资 ,省政府每年安排一部分茶树改良资金 ,用于省级良种场建设和…     

茶树喷施绿叶素试验

绿叶素液肥是台湾新农化工厂有限公司生产的一种含有氮、磷、钾、镁、锌等中微量多种营养元素的复合型植物叶面肥。为探讨该产品在茶树生产上的增效作用，选择我市茶叶主产地星村镇做茶树喷施绿叶素液肥试验，以探讨茶树喷施绿叶素对长势结构因素的影响及对提高单产的效果，为今后应用该肥液提供科学依据。一、材料与方法1．材料：供试品种为肉桂、毛蟹。2．方法：选择立地条件、土壤状况、茶树长势相对一致的七龄茶树。各品种设四个处理，一次重复。（1）CK（对照）（2）喷绿叶素1000倍液一次。（3）喷绿叶素1500倍液一次。（4）喷绿叶素1…