水稻浸胚法外源DNA导入过程中DNA分子降解研究

以湘早籼８号为受体材料，以易于大量获得的鲤鱼精液ＤＮＡ为分子供体，进行浸胚法ＤＮＡ导入水稻实验，研究了ＤＮＡ分子在浸胚过程中的降解情况。通过定时取样后琼脂糖凝胶电泳、紫外吸收光谱扫描分析，发现水稻胚在浸泡过程中能主动降解外源ＤＮＡ分子，４８ｈ后大部分ＤＮＡ分子被降解成小分子片段、单磷酸脱氧核苷酸、碱基甚或无机成分；紫外吸收光谱扫描发现２２０～２４０ｎｍ有明显的增色效应。鉴于浸胚法诱变优势的普遍性及基因导入的固有困难，推测外源ＤＮＡ浸胚过程中降解后的成分对诱变起更大的作用。     

玉米DNA导入大麦的研究初报

采用两种浸胚法将玉米ＤＮＡ导入大麦湘皮１号,获得矮秆、大穗、高结实率的株行材料。改良浸胚法能大幅度地提高外源ＤＮＡ直接导入的引变频率（由５．９３％提高到７０．８０％）,认为外源ＤＮＡ导入具有双重作用的提法有合理性,生物诱变包含返祖和突变两个方面。同时推断改良浸胚法的本质是外源ＤＮＡ渗入“受体”的“累加”效应,基因转移和突变共同构成分子育种空前的“创造力”。     

水稻浸穗法直接导入外源DNA

以５种外源ＤＮＡ作供体，首次用浸穗法直接导入水稻，设置３种处理时间，研究了处理后第１代和第２代．结果表明：浸穗法向水稻导入外源ＤＮＡ能引起广泛的性状变异，变异率达１．８１％；外源ＤＮＡ供体与受体间亲缘关系的远近影响变异率的高低；所试验的３种处理时间对变异率的影响不太明显．文中设计了水稻浸穗法导入ＤＮＡ的操作技术，并对一些问题进行了讨论     

用浸胚法将外源DNA导入水稻的研究进展

系统地概述了将外源DNA采用浸胚法导入水稻的理论基础、原理、转导机理,浸胚处理及后代分之验证方法;总结了1989以来我国育种工作者采用该方法将外源DNA导入水稻所选用的供体、受体及所创建的水稻新种质类型;报道了笔者用浸胚法将空心莲子草DNA导入水稻增强其耐旱性和创建水稻新种质的研究进展。     

高梁导入外源DNA后代的过氧化物酶及酯酶同工酶酶谱分析

本文对利用花粉管通道法将外源ＤＮＡ导入高梁的后代进行了过氧化物酶及酯酶同工酶酶谱分析。由分析结果看出，所有导入后代均出现了不同于受体的谱带，并且不同程度地出现了杂种酶带，酶带缺失，酶活性增强及酶活性减弱等现象，表明外源ＤＮＡ片段已整合到受体基因组中，并得到表达。     

基因枪介导外源基因转化棉花幼胚方法的研究

以棉花幼胚作为外源基因转化的受体，用基因枪法将β-1，3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花，所构建的植物表达载体pBIBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ（新霉素磷酸转移酶）基因。基因枪转化处理的幼胚经骨那霉素（Kan）筛选培养，已获得了抗性植株。研究表明用基因枪法转化处理棉花幼胚是一种操作简便、重复性好的转化方法，用该法可将外源基因导入幼胚，因而避开了植株离体再生的困难。     

外源DNA导入水稻的初步研究

设计了不同药剂和接种方法处理的胚培法将玉米DNA导入水稻的试验,对导入后代进行单株产量的分析结果表明:a.水稻采用一般胚培法(MS+DNA+胚)导入玉米DNA,未能产生主要经济性状(单侏产量)的有利变异;b.胚经不同药剂(丙酮、氯化钙和十二烷基硫酸钠)处理后,能促进外源DNA的导入;c.采用4%丙酮浸胚12h后。再接种到培养基(MS+DNA)上的方法,导入效果较好。     

外源DNA浸泡水稻种子的电镜观察

利用扫描电镜和透射电镜对水稻ＤＮＡ浸种法受体进行研究，结果显示水稻胚生长点细胞在浸泡过程中内部和表面发生了一系列显微和亚显微结构变化。这些结构变化对外源ＤＮＡ直接导入受体是非常有利的，但ＤＮＡ导入的具体途径还有待进一步的实验来证明。这一观察结果对ＤＮＡ浸种技术的标准化和提高变异频率具有一定的参考价值。     

半野生大豆DNA导入栽培大豆其后代过氧化物酶酶谱分析

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，对利用花粉管通道途径，导入外源ＤＮＡ所获大豆变异后代，进行过氧化物酶酶谱分析，结果表明；变异后代与亲本的谱带间有明显差异，后代含有供体的谱带，这说明了外源ＤＮＡ片段已整合到受体基因组中并在后代中得到了表达。因此，我们认为可以用同工酶酶谱分析的结果作为鉴定外源ＤＮＡ导入大豆的生化指标之一。     

外源DNA导入技术在植物分子育种上的应用研究

报道了外源ＤＮＡ导入技术及其在作物品种改良上应用的研究结果，内容包括水稻、小麦、玉米和高粱等作物ＤＮＡ的制备、外源ＤＮＡ导入技术（花粉管通道技术、浸泡法）、后代性状的变异及变异的筛选、新品系示范栽培等。研究表明，外源ＤＮＡ导入技术将在作物品种改良上起非常重要的作用．     

金黄色葡萄球菌px-1 DNA芯片的制备及检测

提取金黄色葡萄球菌px—1总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E.coli DH5α,从而构成金黄色葡萄球菌px—1的基因文库。用PCR方法扩增基因文库,所得PER产物点于芯片上,从而制各px—1DNA芯片。分别提取不同盐浓度培养的px—1的总RNA,把不同盐浓度培养的px—1的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA。通过杂交检测芯片,并获得杂交图像。     

DNA浸泡法所获水稻优良株系酯酶同工酶分析

对ＤＮＡ供体慈利玉米、受体ＤＨＣＫ籼稻及浸泡后所获优良类型材料的干胚与芽进行了酯酶同工酶分析，找到了与玉米相对应的酯酶酶带，初步分析说明外源ＤＮＡ的功能片段已整合到了受体基因组内．     

一种快速简便的浓核病毒DNA的制备方法

利用家蚕浓棱病毒感染蚕中肠组织,建立了一种快速、简便、高效的浓棱病毒DNA的制备方法。将感染蚕的中肠组织研磨后,10000g离心10min,上清液经过细菌过滤器过滤,滤液直接用蛋白酶K消化,再用酚／氯仿抽提,即可南效获得家蚕浓核病毒DNA。     

外源DNA导入水稻体细胞胚研究初报

以水稻Ｒ２８８的幼穗为外植体，培养在附加激素的ＭＳ固体培养基上诱导出愈伤组织，挑选胚性愈伤组织进行液体振荡培养，建立体细胞悬浮细胞系，诱导出体细胞胚并大量增殖．用水稻紫香糯幼苗为材料提取其ＤＮＡ，以不同浓度ＤＮＡ浸泡体细胞胚，发现体细胞胚的生长发育与试管苗发生了明显变化．试管苗移植大田，获得了种子，植株矮小．初步表明外源ＤＮＡ导入体细胞胚能够诱发变异．     

外源DNA导入水稻引起的种子组分变异

对玉米ＤＮＡ导入水稻后代变异系的种子组分的分析结果表明，与受体相比，直链淀粉含量存在明显差异，清蛋白、球蛋白和谷蛋白比例均发生了变异。氨基酸组分中以极性氨基酸组分变异较大，特别是酸性和碱性氨基酸组分均发生了明显变异。     

反向PCR克隆转基因水稻的外源基因旁侧序列

以反向PCR（IPCR）为基础建立了适合于处理大量材料的克隆转基因水稻中外源基因旁侧序称的技术体系，该方法中用小量法提取转基因水稻总DNA；总DNA用10倍过量的限制性内切酶在50μL反应体积中进行过夜酶切；酶切片段在20μL体积中进行自连接，之后进行套式PCR（nested-PCR)扩增旁侧序列。在套式PCR结合了热启动PCR和降落了PCR技术以增强PCR反应的特异性。用这种方法，本实验室在一周内克隆了35个转基因水稻株系中外源基因的旁侧序列，长度在300－750bp之，PCR产物的特异性用Southern杂交进行了证明，实验结果表明这个方法具有快速、稳定和高效的优点。     

高粱DNA导入水稻的初步研究

采用花粉管通道法,并配合仅剪1/3内颖及遮荫等措施,将高粱DNA导入水稻,获得以下结果:(1)共处理颖花367朵,收87粒种子,D_(?) 代结实率达23.7%;(2)D_1代出现变异,其中2株在穗型上明显倾向供体(高粱);(3)D_2代变异穗型出现分离,初步分析认为变异穗型为显性,受体类型为隐性,符合单基因分离的分离规律.     

整体荧光原位杂交用于检测水稻特异DNA程序的研究

文章报道了整体荧光原位杂交应用于检测水稻特异ＤＮＡ的实验程序。利用该实验方法,以经地高辛（ＤＩＧ）标记的ｒＤＮＡ作为探针,成功地在水稻根尖和花药内部组织检测与探针互补的片段。对于实验方法,结果表明,整体荧光原位杂交的成功与否受到多种因素的影响,包括组织的种类、固定剂的种类以及固定后的处理方法（主要是酶解与否）等。检测根尖ＤＮＡ可以采用φ（福尔马林）＝１％固定加上酶解;检测花药（花粉发育处于单核期）     

减压渗透法将外源DNA导入水稻研究

紫稻(叶和叶鞘紫色,稻谷和米粒分别为黄、白色)为受体,高梁、小麦和小米为外源DNA供体。受体材料的种子播种前用减压渗透法分别导入供体DNA于成熟胚。受体种苗五叶期出现了颜色变异株,紫稻和高梁、小麦以及小米的组合中,幼苗变异率分别为0.36％、1.5％和2.5％。在以后的生长发育过程中,变异株的颜色逐渐趋向受体或供体;始穗期提前或推迟。对供、受体和杂种后代幼芽的可溶性蛋白电泳分析表明:后代明显地不同于亲本。