哺乳动物胚胎干细胞的研究历史和现状

与胚胎细胞相比，胚胎干细胞占有数量优势，与体细胞相比，则有低分化的优势。本研究在综述哺乳动物胚胎干细胞研究历史的基础上，概述了胚胎干细胞的分离方法和存在的问题。     

哺乳动物胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES)是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的多潜能细胞,它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境,ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。自1981年Evans和Kaufman首次成功分离小鼠ES细胞,国内外研究人员已在仓鼠、大鼠、兔、猪、牛、绵羊、山羊、水貂、恒河猴、美洲长尾猴以及人类都分离获得了ES细胞,而且已经证明小鼠ES细胞可以分化为心肌细胞、造血细胞、卵黄囊细胞、骨髓细胞、平滑肌细胞、脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、内皮细胞、黑素细胞、神经细胞、神经胶质细胞、少突胶质细胞、淋巴细胞、胰岛细胞、滋养层细胞等。人类ES细胞也可以分化为滋养层细胞、神经细胞、神经胶质细胞、造血细胞、心肌细胞等。ES细胞不仅可以作为体外研究细胞分化和发育调控机制的模型,而且还可以作为一种载体,将通过同源重组产生的基因组的定点突变导入个体,更重要的是,ES细胞将会给人类移植医学带来一场革命。     

胚胎干细胞与哺乳动物克隆

胚胎干细胞 (Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＥＳ细胞 )是从早期胚胎内细胞团 (Ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ,ＩＣＭ)或原生殖细胞 (Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｌｓ,ＰＧＣｓ)中分离出来的 ,能在体外培养并具有发育全能性的细胞[1 ,2 ] 。在发育阶段上 ,ＥＳ细胞类似早期胚胎的内细胞团 ,具有分化潜能和正常整倍体核型的特点 ,兼有胚胎细胞和体细胞的类似特征 ,既可以进行体外培养、增殖、转化和筛选 ,又可分化为包括生殖系在内的各种组织[3～ 5] 。因此 ,ＥＳ细胞具有十分重要的生物学意义 ,它已成为现今哺乳动物生物工程研…     

哺乳动物胚胎干细胞系建立方法的研究进展

本文概述了近10年来哺乳动物胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ES细胞)系建立的方法及其研究进展概况,并对目前家畜ES细胞建立方法研究中存在的问题及可能解决的途径进行了一些探讨。     

胎生哺乳动物胚胎性别控制研究的新进展

哺乳动物性别鉴定和控制的研究是当今生物学领域的重大课题。提高预先判定后裔性别的能力,将会极大地提高育种计划的经济效果。在生产上,通过胚胎性别鉴定和胚胎移植,可有效地进行动物性别的控制,促进优良家畜的繁殖,增加畜产品的产量,以获得巨大的社会经济效益。因此,为找出一种可改变正常出生性比的方法,许多科研工作者付出了硕大的努力,最近在胚胎性别鉴定上取得了重大的突破。     

胚胎干细胞体外定向诱导分化研究进展

胚胎干细胞是由早期内细胞团分离的一种多潜能细胞 ,在体外分化抑制培养时 ,可保持未分化状态而无限增殖。一旦撤除分化抑制因素 ,或添加适当的诱导剂 ,ES细胞可分化为内胚层、中胚层和外胚层的多种类型的特化细胞。文章综述了体外定向诱导 ES细胞分化为造血细胞、心肌细胞、神经细胞、脂肪细胞、胰岛细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软骨细胞和黑素细胞等的途径和方法。     

胚胎干细胞与胚胎生殖细胞

胚胎干细胞与胚胎生殖细胞同属于胚胎源的多潜能干细胞。胚胎干细胞是从附置前胚胎内细胞团分离而来的,而胚胎生殖细胞来自胎儿原始生殖细胞。二者在现代生命科学的各个领域都有着广阔的应用前景。对胚胎生殖细胞的特性,胚胎干细胞与胚胎生殖细胞的异同以及二者的应用前景作一综述。     

哺乳动物胚胎干细胞分离与培养的研究进展

从胚胎干细胞的来源、分离方法和饲养层细胞等方面,总结了胚胎干细胞分离与培养在近年来所取得的进展。     

胚胎干细胞的分离克隆

从全能性或多能性细胞获取、分化抑制物选择、培养基、分离方法、鉴定、保存等６个方面，对胚胎干细胞的分离培养体系的建立进行了系统综述。     

LIF和IGF-1对牛胚胎干细胞分离的影响

比较了添加 L IF,IGF- 1和 L IF+IGF对牛胚胎干细胞 (ES)分离的影响。结果表明 :1添加10 ng/m L L IF能提高胚胎贴壁率 ,促进内细胞团 (ICM)和 ES细胞的增殖并抑制其分化 ;2添加 10 ng/m L IGF- 1既能提高胚胎贴壁率 ,又能使 ICM明显增殖的时间和传代后集落出现的时间提前 ;3添加 10 ng/m L L IF+10 ng/m L IGF- 1,可以同时发挥两种生长因子的作用效果 ,更有利于牛胚胎干细胞的分离。     

人类胚胎干细胞研究述评

对人类胚胎干细胞(hESCs)的来源、培养方法、建系条件、生物学特性和鉴定方法、遗传操作及其需解决的问题进行了讨论。提出目前研究的重点在于揭示维持ES细胞多能性和自我更新的机理,进一步优化人类和其他哺乳动物类ES细胞的分离、培养、建系方法,探讨其定向分化机理,建立胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)的大规模快速扩增技术;完善hESCs向重要功能细胞(生殖细胞)分化的体系;单细胞比对分析ESCs、畸胎瘤细胞(ECSs)、EGCs、类胚体(EBs)、各级生殖细胞和成体细胞的基因及蛋白表达图谱,以探求生殖细胞、成体细胞、ESCs、ECSs、EGCs的本质区别,积极开展将ES细胞用于治疗人类疾病模型的研究。     

昆明小鼠ES细胞的分离培养及鉴定

[目的]摸索一种适合昆明小鼠ES细胞分离培养的方法,以提高昆明小鼠ES细胞的建系率。[方法]分别采用5种方法分离ICM和ES细胞集落,摸索了以BMSCs作为饲养层时,丝裂酶素处理的合适时间。[结果]连续消化法要明显好于其他4种方法。MMC处理BMSCs 1、1.5、2 h时效果较好,3个时间点无显著差异(P>0.05)。mMEF作为饲养层与BMSCs作为饲养层时获得5代ES细胞相比差异不显著(P>0.05)。[结论]连续消化法分离ES细胞效率较高,饲养层采用MMC处理1~2 h的BMSCs饲养层或常规mMEF饲养层对昆白小鼠ES细胞无明显影响。     

LIF与心肌条件液在小鼠ES细胞分离中的差异比较

通过比较LIF和大鼠心肌条件液在小鼠ES细胞分离培养过程中的差异,从而选择较为合适的培养液用于小鼠ES细胞的分离培养与深入研究.取怀孕3.5 d小鼠囊胚,培养于小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,然后根据ES细胞培养液的不同分成2组,一组添加LIF的ES细胞培养液,另一组添加由大鼠心肌条件液组成的ES细胞培养液.结果显示,小鼠ICM的孵出率在心肌条件液中为76.30%,LIF条件液中为59.35%,两者差异极显著(p＜0.01);在LIF条件液中比心肌条件液中能较早地分离出ICM,时间差分别为11、11、12、10和12 h,平均为11.2 h;对传代的ES细胞集落,培养48 h时周边出现分化现象的ES细胞集落所占的比例在心肌条件液中为51.55%,LIF条件液中为31.69%,两者差异显著(p＜0.05),第五代小鼠ES细胞核型正常率在心肌细胞条件液中为78.6%,稍高于LIF条件液中的76%,差异不显著.     

基于GIS、ES的凉山州土壤数据库设计与实现

凉山州作为我省实施西部大开发战略的两个重点区域之一，以土壤资源为核心的国土资源的综合开发潜力巨大，而目前凉山州资源开发科技含量较低，农业信息化水平不高，严重制约了农业乃至整个经济的发展，基于GIS、ES的凉山州土壤数据库设计与实现就是提高凉山州农业信息化水平和资源开发科技含量的尝试，它利用GIS对图形数据强大的管理和分析功能、ES基于模型和知识的推理功能，结合关系型数据库对属性数据的管理功能，利用实体－联系（E－R）模型设计了实用性强、用户广、操作简便、功能强大的土壤数据库，并应用GIS软件MapInfo、ES开发工具DET1.1和Visial Foxpro、Visial Basic进行程序开发。基于GIS、ES的凉山州土壤数据库设计与实现的建设地市州级土壤数据库的一种尝试，同时也为省级土壤数据库的建设提供了参考。     

BRL-CM在昆白小鼠胚胎干细胞分离培养中的应用

目的:探讨Buffalo大鼠肝细胞条件培养基(BRL-CM)在昆白小鼠胚胎干细胞(ES)分离培养中的应用。方法:用BRL-CM培养生长在STO(一种小鼠成纤维细胞)饲养层上的昆白小鼠的桑椹胚和囊胚,然后由囊胚内细胞团(ICM)得到ES细胞集落,在有饲养层和无饲养层时用BRL-CM培养分离得到的ES集落。结果:桑椹胚在上述培养条件下能发育成囊胚,然后囊胚在饲养层上长出ICM;用0.1%Trypsin-0.016%EDTA离散ICM,接种到饲养层上培养得到ES集落,ES集落能维持早期传代。结论:在分离培养昆白小鼠的ES细胞时,BRL-CM结合STO饲养层可以用来培养桑椹胚和囊胚,桑椹胚可以发育为囊胚并孵出内细胞团;同时,这种培养条件也能维持昆白小鼠ES细胞的增殖和早期传代。     

FKBP38条件性基因敲除胚胎干细胞株的建立

[目的]通过电转的方法,建立FKBP38细胞株.[方法]对自制的MEF细胞进行MMC处理,从而得到Feeder细胞,并在Feeder细胞上培养ES细胞.[结果]通过电转的方法,将FKBP38载体转入ES细胞中,经G418,Ganc筛选克隆和PCR检测,得到FKBP38阳性克隆.[结论] FKBP38 CKO胚胎干细胞株构建完成.