裙带菜凝集素对日本对虾非特异性免疫因子的影响

为了研究裙带菜凝集素对日本对虾非特异性免疫因子的影响,给日本对虾Penaeus japonicus注射了2.3 mg/尾裙带菜凝集素,并于注射后第24、48、72、96、120 h抽血取样,测定对虾体内8种非特异性免疫指标。结果表明:试验组日本对虾血清中的凝集活性、酚氧化酶活性、超氧化物歧化酶活性、碱性磷酸酶活性、溶菌酶活性在24¹20 h时均高于对照组。其中凝集活性、酚氧化酶活性在24 h时最大,分别是对照组的8倍、64倍;超氧化物歧化酶活性在48 h时最大,是对照组的2.6倍;碱性磷酸酶活性、溶菌酶活性在72 h时最大,分别是对照组的2.6倍、4.2倍;抗菌活性在24、72120 h时均高于对照组。其中凝集活性、酚氧化酶活性在24 h时最大,分别是对照组的8倍、64倍;超氧化物歧化酶活性在48 h时最大,是对照组的2.6倍;碱性磷酸酶活性、溶菌酶活性在72 h时最大,分别是对照组的2.6倍、4.2倍;抗菌活性在24、72¹20 h时均高于对照组,并且在24 h时最大,是对照组的1.3倍;吞噬率和吞噬指数在24120 h时均高于对照组,并且在24 h时最大,是对照组的1.3倍;吞噬率和吞噬指数在24⁷2 h、120 h时均高于对照组,并且在72 h时最大,分别是对照组的1.2倍、1.4倍。研究表明,注射裙带菜凝集素后可以明显提高日本对虾的非特异性免疫力。     

裙带菜凝集素对鲫的免疫诱导

将从裙带菜Undaria pinnatifida中提取的凝集素作为免疫诱导制剂,注射到鲫Carassius auratusw体内,在连续注射7 d和9 d时,分别对鲫血清中的溶菌酶、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的酶活性进行测定,结果表明,注射凝集素7 d和9 d时,鲫血清中溶菌酶的酶活性比对照组分别提高18.83%、12.69%,SOD的酶活性比对照组分别提高66.67%、139.99%,CAT酶活性比对照组分别提高16.60%、63.63%。说明凝集素可以明显提高鲫血清中这3种酶的表达水平。     

裙带菜凝集素对鲫的免疫诱导

将从裙带菜Undaria pinnatifida中提取的凝集素作为免疫诱导制剂,注射到鲫Carassius auratusw体内,在连续注射7 d和9 d时,分别对鲫血清中的溶菌酶、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的酶活性进行测定,结果表明,注射凝集素7 d和9 d时,鲫血清中溶菌酶的酶活性比对照组分别提高18.83%、12.69%,SOD的酶活性比对照组分别提高66.67%、139.99%,CAT酶活性比对照组分别提高16.60%、63.63%。说明凝集素可以明显提高鲫血清中这3种酶的表达水平。     

绿原酸对异育银鲫血液非特异性免疫因子的影响

用含不同剂量绿原酸(0~0.04%)的饲料饲喂异育银鲫,分别对异育银鲫在摄食0、10、20、30 d时血液中白细胞数量、血清溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性、碱性磷酸酶活性进行了测定。结果表明,饲料中添加适量的绿原酸对异育银鲫血液中各非特异性免疫因子具有不同程度的正效应,但在效应时间上呈现出非同步的特点,其中血液白细胞以在饲料中添加200 mg/kg绿原酸饲喂30 d时最高,为1.894×107/m l,比对照组提高了43.70%(P<0.05);血清溶菌酶活性和超氧化物歧化酶活性以在饲料中添加200 mg/kg绿原酸饲喂10 d时最高,为5 734.4 U/m l、239.72 U/m l,分别比对照组提高了159.7%、109.9%(P<0.05);而碱性磷酸酶活性则以在饲料中添加25 mg/kg绿原酸饲喂30 d时最高,为9.14 U/100m l,比对照组高145.7%(P<0.05),但在高剂量(400mg/kg)长时间饲喂时,将会抑制异育银鲫血液白细胞的产生及血清碱性磷酸酶活性。     

氧化苦参碱对异育银鲫血液非特异性免疫因子的影响

用含不同剂量(0~400 mg/kg)氧化苦参碱的饲料饲喂异育银鲫,对异育银鲫在摄食0 d、5 d、10 d、15d、20 d、25 d、30 d时血液中白细胞数量、血清溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性、碱性磷酸酶活性等非特异性免疫因子分别进行了测定。结果表明:氧化苦参碱对异育银鲫血液中各非特异性免疫因子具有不同程度的正效应,但在效应时间上呈现出非同步的特点,其中100 mg/kg试验组的异育银鲫血液中白细胞水平和血清溶菌酶活性分别在第15 d和第10 d达到最高,为1 m l 2.59×106个和11 875.79 U/m l,分别比对照组显著提高了90.44%和443.81%(P<0.01);而超氧化物歧化酶和碱性磷酸酶活性在200 mg/kg试验组中分别在第10 d、第5 d达到最高,为121.46 U/m l和11.94 U,分别比对照组高6.89%(P<0.05)和148.75%(P<0.01)。     

鱼类非特异性免疫研究进展

鱼类是兼具特异性免疫和非特异性免疫的低等脊椎动物,而非特异性免疫在抵御外源微生物中发挥重要作用。为此,概述了鱼类非特异性免疫抗原识别以及非特异性细胞毒细胞、吞噬细胞、溶菌酶、抗菌肽、干扰素、补体、白细胞介素、天然抗体、铁传递蛋白等在抵御病原感染方面的研究进展。     

硫酸锌胁迫对克氏原螯虾非特异性免疫因子的影响

将克氏原螯虾(Procambarus clarkii)于浓度为0 mg/L(对照组)、0.40 mg/L、4.04 mg/L及40.37 mg/L硫酸锌(ZnSO4)中分别药浴1 d、2 d、3 d、4 d、7 d、14 d和21 d,测定了肝胰腺和鳃中4种以及血清中6种非特异性免疫因子活性,从免疫学角度探讨ZnSO4对克氏原螯虾的毒性影响.结果显示:21 d内各浓度组在各时间对血清中凝集素活性均无显著影响.血清中溶血素各浓度组活性均表现出随药浴时间延长先逐渐升高再下降的趋势.酚氧化酶(PO)在肝胰腺中各浓度组不同时间之间及相同时间不同浓度组之间的活性差异均不显著,而鳃中在4.04 mg/L以上浓度中药浴2 d内活性显著下降,随药浴时间加长鳃和血清中活性呈增大的趋势.在肝胰腺中4.04 mg/L和40.37 mg/L浓度组药浴1 d、2 d、14 d和21 d的过氧化氢酶(CAT)活性高于或显著高于对照组,药浴3～7 d时低于或显著低于对照组,呈先上升再下降再上升的趋势变化;鳃中始终低于对照组;血清中1～7 d CAT活性均低于对照组,药浴14 d以后显著高于对照组,呈前期抑制后期升高的趋势.酸性磷酸酶(ACP)在4.04 mg/L和40.37 mg/L浓度组中药浴21 d内除40.37 mg/L组药浴3 d时肝胰腺中ACP活性显著高于对照组外,其他时间肝胰腺和鳃中ACP活性主要呈抑制状态,血清中4.04 mg/L组呈先逐渐升高再下降的趋势,而40.37 mg/L组均低于对照组.溶菌酶(LSZ)在4.04 mg/L和40.37 ng/L浓度组中药浴21 d内肝胰腺中活性主要呈前期抑制后期升高的趋势;鳃中4.04 mg/L组LSZ活性先下降再逐渐升高再下降,而40.37 mg/L组活性先升高后下降;血清中各浓度组LSZ活性均高于对照组.结果表明:0.40 mg/L组仅在药浴3 d和4 d时使血清溶血素活性显著升高,而其他时间对其他免疫因子活性均无显著影响;4.04 mg/L以上浓度除对血清凝集素无显著影响外,其他免疫因子活性均发生了显著变化,并且变化规律存在一定的组织差异.     

裙带菜凝集素的分离及性质研究

裙带菜（Undaria pinnatifida)经Tris-HCl缓冲液粗抽提，然后进行硫酸铵分级实验，测定盐析范围为50％硫酸铵饱和度，经50％硫酸铵饱和度分级后，裙带菜凝集素（UPL）纯化倍数为7．7，总活力回收为167％，UPL粗抽提液中糖的质量分数为5．72％。该凝集素在pH为4．0－10．14时均为活性，但在pH为5．0－9．51时活性较高，pH等于4．0时活力保留25％，pH等于10．14时活力保留50％，该凝集素不被D－果糖，葡萄糖，γ－球蛋白所抑制。     

壳聚糖对草鱼非特异性免疫功能的影响

选择平均体重(70.61±1.29)g的健康草鱼450尾,随机分成5个处理组,即基础饲料组、抗生素组、0.25%、0.50%及1.00%壳聚糖组,每个处理设3个重复,每个重复放养30尾鱼,进行为期40d的饲养试验.结果表明,日粮中添加壳聚糖能显著增加草鱼的后肾体指数(P0.05),对草鱼的头肾体指数和脾体指数影响不显著,但与基础饲料组相比,各壳聚糖添加组草鱼的头肾体指数和脾体指数有增加趋势(P0.05).添加0.50%壳聚糖能显著增加草鱼血清总蛋白含量(P0.05),对草鱼血清和肝胰脏总SOD活力影响不显著(P0.05),但有增加趋势.即草鱼日粮中添加适量的壳聚糖能提高机体非特异性免疫能力,其适宜添加剂量为0.50%.     

壳聚糖对异育银鲫非特异性免疫功能的影响

为了解壳聚糖对鱼类非特异性免疫机能的影响,以体重20.5-24.8 g的异育银鲫为研究对象,在其饲料中分别添加0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g/100 g的壳聚糖,在23-25℃水温下饲喂30 d后,分别测定各组鱼的血清、脾脏、头肾的溶菌酶活性和白细胞吞噬活性,以及肌肉、肝胰脏和血清的SOD活性。结果显示,饲料中添加0.5-2 g/100 g的壳聚糖能显著提高异育银鲫的溶菌酶活性（P〈0.05）和白细胞吞噬活性（P〈0.05）,而对SOD活性没有明显影响。     

3个不同养殖群体裙带菜同工酶的电泳分析

对3个不同养殖群体裙带菜Undaria pinnatifida(本地裙带菜、日本裙带菜、自育裙带菜)的孢子叶、茎和叶不同部位的过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)进行了同工酶电泳分析。结果表明:3个裙带菜群体的POD同工酶其孢子叶活力都相对强于其它部位;日本裙带菜茎和叶的各部位POD酶活力相同,但叶中部的酶活力稍强于茎;自育裙带菜茎底部和茎中部的POD酶活力较强些,而叶底部的酶活力较叶中部和顶部的强;本地裙带菜的茎和叶由底部到顶部POD酶活力逐渐变弱。孢子叶EST酶活力要较茎和叶的酶活力强很多,3种裙带菜孢子叶中EST酶活力相同。此外,还对裙带菜的种质、样品处理方法以及3种裙带菜的亲缘关系进行了讨论。     

用复合酶酶解-热水浸提法提取裙带菜孢子叶粉岩藻聚糖硫酸酯的工艺研究

采用正交试验方法,研究了用戊聚糖复合酶及复合纤维素酶酶解—热水浸提法提取裙带菜Undariapinnatifida孢子叶粉中岩藻聚糖硫酸酯的酶解工艺参数。结果表明:用戊聚糖复合酶酶解裙带菜孢子叶粉的最佳酶解参数为酶加量0.12%,温度为50℃,pH为5.5,时间为30 min,岩藻聚糖硫酸酯粗提物得率为5.171%,总硫酸根的质量分数为1.432%,粗提物中糖的质量分数为21.38%;用复合纤维素酶酶解裙带菜孢子叶粉的最佳酶解参数为酶加量0.227%,温度为45℃,pH为4.5,时间为70 min,岩藻聚糖硫酸酯粗提物得率为5.720%,总硫酸根的质量分数为1.118%,粗提物中糖的质量分数为28.24%。用两种复合酶酶解—热水浸提法提取的岩藻聚糖硫酸酯粗提物得率均较水煮法(4.665%)高。     

烟台海域裙带菜营养成分分析及评价

[目的]对烟台海域裙带菜（Undaria pinnatifida）的营养成分进行全面分析,为裙带菜的深加工和综合利用提供依据。[方法]对采自烟台海域的裙带菜的一般营养成分、蛋白质的氨基酸组成、矿物质含量、褐藻多糖含量和甘露醇含量进行测定与分析。并将一般营养成分与采自大连海域和浙江海域的裙带菜进行比较。[结论]烟台海域裙带菜的主要功能性成分褐藻酸,占藻体总量的29.45%,蛋白质含量达14.90%。烟台海域氨基酸组成均衡,赖氨酸是限制性氨基酸,谷氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸和亮氨酸的含量很高,其中,谷氨酸和天门冬氨酸之和占氨基酸总量的25.17%,在非必需氨基酸中占有很大的比重;呈味氨基酸谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸和丙氨酸占氨基酸总量的55.80%。烟台海域矿物质含量很丰富,是矿物质的营养库。[结论]该研究可为生产相关的保健食品和提高裙带菜的利用价值提供依据。     

高温胁迫对裙带菜配子体的生长和生理影响

以裙带菜配子体(Undaria pinnatifida)为试验材料,研究了高温胁迫对其叶绿素a含量、POD活性、脯氨酸含量、丙二醛含量的影响。结果表明:与20℃对照组相比,裙带菜配子体在高温胁迫下,试验组随着时间的增加叶绿素a含量明显下降,且30℃下叶绿素a含量的降幅明显大于25℃;丙二醛的含量随着时间的增加呈现逐渐上升的趋势,且30℃下丙二醛含量的增幅明显大于25℃;POD活性在24h时达到最低,然后略有增加;脯氨酸的含量在高温下随着时间的延长呈现逐渐上升的趋势。该研究结果为进一步揭示裙带菜抗高温分子机制和培育抗高温裙带菜新品种提供了一定参考。     

小肽对凡纳滨对虾幼体生长性能及非特异性免疫能力的影响

在基础饲料中分别添加0(对照组),1%,2%,3%小肽,研究小肽对凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)幼体生长和非特异性免疫力的影响。60 d后测定凡纳滨对虾的生长性能及血清抗菌活力、溶菌酶和酚氧化酶活性,并用哈维氏弧菌进行攻毒试验。结果表明,小肽能显著提高凡纳滨对虾的生长性能(P＜0.05),1%,2%和3%处理组体长增长率分别比对照组增加了17.74%,27.75%和17.46%,体重增长率分别比对照组增加了12.15%,31.16%和19.01%;饲料系数分别比对照组下降了21.57%,33.99%和25.49%;成活率分别比对照组提高了12.23%,18.89%和8.89%。小肽能显著增强凡纳滨对虾的非特异性免疫能力,1%,2%,3%处理组抗菌活力分别比对照组提高了21.05%,42.10%,10.53%;血清溶菌酶比活力分别比对照组提高了16.54%,24.56%,15.54%;酚氧化酶活力分别比对照组提高了25.70%,41.90%,24.02%。哈维氏弧菌攻毒试验结果表明,5 ｄ内对照组累计死亡率为96.7%,高于各处理组,但差异不显著;综合试验结果得知,饲料中添加小肽能显著提高凡纳滨对虾生长性能和血清非特异性免疫能力,2%为适宜添加量。     

复方中草药对凡纳滨对虾生长性能和血清非特异免疫因子的影响

以凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei为对象,投喂添加不同水平的复方中草药饲料,研究中草药对凡纳滨对虾生长性能和血清非特异免疫因子的影响。试验共分7组,A—F组饲料中分别添加质量分数为0．5％、0．9％、1．3％、1．7％、2．1％、2．5％的复方中草药,对照组饲料中不添加。饲养试验共进行56d。结果表明：随着复方中草药添加水平的提高,凡纳滨对虾的增重率和特定生长率逐渐增加,仅F组与对照组差异显著（P〈0．05）;饲料系数和成活率各组间均无显著差异（P〉0．05）;增重率与复方中草药添加水平的回归方程为Y=-125．86X^2＋521．93X＋6063（R^2=0．9561）。由方程可知：当复方中草药水平为2．07％时增重率最高;对虾血清中超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、酚氧化物酶和溶菌酶随着复方中草药添加水平的增加表现出先显著增加然后下降的趋势,E组中4种酶活力均最高;复方中草药对酸性磷酸酶和过氧化物酶活力没有显著影响。     

用裙带菜孤雌生殖的幼孢子体体细胞诱导雌配子体的研究

在裙带菜雌配子体的切碎培养中,通过成熟的卵孤雌生殖获得幼孢子体,经染色体观察其染色体数为30条,而正常幼孢子体的染色体为60条。采用切除假根的方法从孤雌生殖幼孢子体体细胞中诱导出雌配子体。在设定的不同温度下,20℃下诱导5d时开始出现雌配子体,培养60d后雌配子体的诱导率达到100％;15℃下诱导5d后出现雌配子体,培养60d后的诱导率为45％;10℃下诱导45d后才开始出现雌配子体,培养60d后的诱导率仅为12％。将诱导产生的雌配子体切碎,在20℃下培养5d后开始成熟,10d后成熟率为75％,15d后成熟率达到100％,与对照组正常的雌配子体无明显差异（P〉0．05）。使用孤雌生殖幼孢子体诱导产生的雌配子体与正常雄配子体杂交,幼孢子体的形成率为88％,与正常雌雄配子体杂交的幼孢子体的形成率（92％）差异不显著（P〉0．05）。将诱导产生的雌配子体与正常雄配子体混合切碎并撒在维尼纶育苗绳上,30d后培育出藻体长度为1—2mm的裙带菜幼苗。