复方苦芩对细小病毒感染犬血液T细胞亚群和细胞因子的影响

研究复方苦芩对细小病毒感染犬T细胞亚群和细胞因子的影响。建立犬细小病毒感染模型,把动物随机分为6个组,分别为空白对照组,模型组,阳性药物组,复方苦芩高、中、低剂量组,每组20只。将攻毒后6h设定为试验0d,分别于试验0、7、14、21、28、35d采血,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,试剂盒检测IL-2、IL-4、IFN-γ含量。结果显示:与模型组相比,复方苦芩可促进犬机体分泌IL-2、IL-4和IFN-γ,提高外周血CD3+T、CD3+CD4+T细胞百分数,降低CD3+CD8+T细胞百分数。复方苦芩能够调节细小病毒感染犬的免疫机能,提高犬抗病毒能力。     

复方苦芩注射液对人工感染犬细小病毒病的防治

目的:探讨复方苦芩注射液防治犬细小病毒病效果和作用原理。方法:人工感染犬细小病毒,其中预防试验组30只,治疗试验组40只。结果:复方苦芩注射液能显著提高犬的免疫功能,对犬细小病毒病的预防保护率达90%,治疗有效率为70%。结论:复方苦芩注射液能提高犬的免疫功能,对犬细小病毒病有良好的预防效果,且有一定的治疗作用。     

复方苦芩对犬细小病毒致肠黏膜细胞凋亡及相关基因表达的影响

将犬分为空白对照组、模型组、复方苦芩预防组、复方苦芩治疗组,用犬细小病毒接种建立动物模型,复方苦芩防治犬细小病毒病,然后取样,光学显微镜和电子显微镜观察十二指肠黏膜细胞的病变和细胞凋亡,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测Bcl-2和Bax基因的mRNA表达。结果显示,与空白对照组比较,模型组犬十二指肠黏膜病变及炎细胞浸润,电镜下可见细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,细胞Bcl-2基因表达下调,Bax基因表达增加。与模型组相比,复方苦芩防治组肠黏膜病变轻,超微结构变化不明显,细胞Bax基因表达下调,Bcl-2基因表达上调。结果表明,复方苦芩可能是通过促进黏膜上皮细胞的增殖与恢复,调节Bcl-2,Bax基因表达,抑制犬细小病毒引起的十二指肠黏膜超微结构改变和细胞凋亡,而对细小病毒病犬的十二指肠组织结构起保护和促进恢复作用。     

复方苦芩有效成分对犬细小病毒病病犬小肠组织细胞凋亡及基因表达的影响

为探讨复方苦芩3种有效活性成分对人工感染肠炎型犬细小病毒病(canine parvovirus disease,CPVD)病犬小肠组织的保护作用,将50只试验犬随机分为复方苦芩总多糖组、复方苦芩总生物碱组、复方苦芩总黄酮组、空白对照组和模型组。其中,试验药物组均按1.5 mL/kg肌肉注射复方苦芩3种有效成分,2次/d,连续用药7 d后灌服2 mL(5×10~5 PFU/mL)的病毒液进行人工复制病理模型,空白组肌注射生理盐水,模型组只攻毒不给药。接种病毒后经检测为阳性后3天在无菌条件下取各组犬只小肠组织,用TUNEL法检测各组小肠组织细胞的凋亡率,同时采用荧光定量PCR对各试验组小肠组织Bax和Bcl-2 mRNA转录进行相对定量检测,并运用Western blot方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果显示,通过组织切片观察,复方苦芩3种有效活性成分可防止病毒对犬小肠细胞形态的病理作用,可降低细胞凋亡率,并且3种有效成分对小肠组织可增高小肠组织Bcl-2/Bax基因和蛋白表达量,从而减少因病毒所引起的细胞凋亡;结果表明,复方苦芩3种有效成分对CPVD病犬小肠组织均有一定的保护作用,其中复方苦芩总生物碱对CPVD病犬小肠组织细胞凋亡的预防效果最显著。     

鸡IL-1β、IL-2、IFN-γ和MGF对表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒免疫效力的影响

将10日龄的SPF鸡和15、28日龄的商品鸡分别随机分组,同时免疫不同剂量的rFPV-HN（表达NDV HN基因重组鸡痘病毒）和表达不同细胞因子（IL-1β、IL-2、IFN-γ、MGF）的重组鸡痘病毒（rFPVs）。在免疫后不同时间,通过检测血液中抗NDV的HN蛋白抗体、脾脏中CD4＋和CD8＋T细胞的变化及攻毒保护率等指标。结果表明：IL-1β或IFN-γ在免疫后期能促进抗HN间接ELISA抗体的滴度上升,而且产生抗体的整齐度好;IL-1β或IL-2可以显著增加脾脏中CD4＋和CD8＋T细胞含量;IL-1β、IL-2或IFN-γ同样可以提高商品鸡攻毒后的存活率。IL-2和IFN-γ在增加脾脏中CD4＋和CD8＋T细胞的数量及攻毒保护方面表现出一定的协同增强作用。     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响

为探索猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪瘟(CSF)弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响,将20头28 d断奶仔猪随机分为V-I、I-V、V和C4组,5头·组-1.V-I组在接种CSF弱毒疫苗后2d感染PCV2;I-V组在感染PCV2 后2d接种CSF弱毒疫苗;V组只接种CSF弱毒疫苗;C组为空白对照组.共免疫2次,间隔21 d.免疫后定期检测血清CSFV特异性抗体水平、外周血淋巴细胞(PBLC)增殖活性和PBLC中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达水平.结果显示:在CSF弱毒疫苗免疫前或免疫后感染PCV2,均会导致CSFV抗体水平低下,血清抗体阳转率下降,PBLC增殖活性降低.初次免疫后,V-I与I-V组的PBLC内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达量严重不足,其中V-I组的表达量最低.加强免疫后V-I与I-V组的PBLC内IFN-γ与IL-10的表达失衡,IL-2和IL-4的表达缺乏,其中I-V组的细胞因子表达失衡和缺乏更严重.上述研究表明,CSF弱毒疫苗免疫前或免疫后感染PCV2均会影响机体的体液和细胞免疫应答水平,导致PBLC内细胞因子的表达严重抑制和紊乱.     

中草药制剂对鸡免疫器官发育及脾脏中免疫因子表达的动态影响

试验旨在探究复方中草药制剂对黄羽肉鸡育雏期间免疫器官指数及脾脏中IL-2、IL-4、IFN-γ因子表达的动态影响。选取1日龄健康黄羽肉鸡450只,随机分成3个处理组(对照组、抗生素组和中草药组),每个处理5个重复,每个重复30只。分别在21、35、49日龄测定鸡免疫器官指数和脾脏细胞中IL-4、IL-2、IFN-γ的动态表达量。结果显示:中草药组的免疫器官指数显著高于对照组(P<0.05),血清中免疫球蛋白IgG含量与对照组相比显著增加(P<0.05);中草药制剂组黄羽肉鸡脾脏中的IL-4 mRNA表达量在35日龄显著高于对照组和抗生素组(P<0.05),IL-2和IFN-γmRNA表达量在试验期呈增加趋势,其表达量在49日龄时中草药组显著高于对照组和抗生素组(P<0.05),说明复方中草药有提高免疫细胞因子mRNA表达量的作用。试验结果表明,基础日粮中添加复方中草药对黄羽肉鸡免疫器官发育和细胞免疫水平有不同程度的促进作用。     

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子（TF）对新城疫病毒（NDV）弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量（10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份） LaSota疫苗株单独（单独免疫组）、LaSota疫苗株与TF联合（联合免疫组）免疫SPF鸡,14 d后以NDV F₄₈E₉强毒攻毒,同时设立对照组（非免疫攻毒）和空白组（非免疫非攻毒）,并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量（PD₅₀）如下：单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.000 8羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.000 5羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^-3羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著（P<0.01）;攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著（P<0.01）。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD₅₀;在抵抗NDV F₄₈E₉强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。     

硒化党参多糖和大蒜多糖协同增强鸡外周血淋巴细胞和新城疫疫苗的免疫功效

为了验证硒化党参多糖(selenizing Codonopsis pilosula polysaccharide,sCPP)和大蒜多糖(garlic polysaccharide,GP)的协同增强免疫作用及其复方硒化党参多糖-大蒜多糖(sCPP-GP)的功效,为研制新型免疫增强剂提供理论依据,比较了这3种多糖的增强免疫活性。体外试验,用MTT法和RT-PCR法测定了3种多糖对鸡外周血淋巴细胞的增殖及其IL-2和IFN-γmRNA转录的影响;体内试验,将3种多糖配合新城疫疫苗免疫雏鸡,测定鸡外周血淋巴细胞增殖、血清HI抗体效价、血清IL-2和IFN-γ含量的动态变化。体外试验结果显示,3种多糖在合适的浓度均能显著促进淋巴细胞增殖及IL-2和IFN-γmRNA的转录,复方的作用显著强于两个组分药;体内试验结果显示,在免疫后4个时间点,3种多糖均能不同程度地促进T淋巴细胞增殖,提高血清HI抗体效价、提高血清IL-2和IFN-γ的含量,复方的作用显著强于两个组分药。研究结果表明,sCPP和GP能协同增强鸡外周血淋巴细胞和新城疫疫苗的免疫功效,复方sCPP-GP的作用显著强于两个组分药,可以作为新型免疫增强剂的候选方。     

地锦草总黄酮对小鼠免疫功能及细胞因子mRNA表达影响

探讨地锦草总黄酮对小鼠免疫功能及细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-αmRNA表达影响。将小鼠随机分成4组：地锦草总黄酮高剂量组（H组）、中剂量组（M组）、低剂量组（L组）和纯水对照组（C组）,连续灌胃9 d后,检测其单核巨噬细胞吞噬功能、2%绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应、肝脏指数和脾脏指数,并用逆转录酶-聚合酶链式反应的方法检测脾脏IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA表达水平。结果显示,地锦草总黄酮3个剂量组脾脏指数、廓清指数（K）、吞噬指数（α）、24 h足跖增厚值均显著高于C组;M组和H组肝指数显著高于C组（P〈0.01）;3个剂量组均能提高IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA的表达水平,与C组相比,H组最显著。试验结果表明,地锦草总黄酮能有效提高机体的免疫功能及IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA表达。     

鸭IFN-γ,IL-2mRNA荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

为评价疫苗免疫对鸭细胞免疫应答反应的影响,本研究提取鸭脾脏组织总RNA,采用鸭IFN-γIL-2、GAPDH基因特异性引物,建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.结果显示IFN-γ、IL-2、GAPDH基因扩增标准曲线相关系数均高于0.99;3者扩增效率相近,均接近于100％;融解曲线呈特异性单峰;各基因组内和组间变异系数均小于2％.应用该方法检测不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷鸭后脾脏组织IFN-γ和IL-2 mRNA的相对表达水平.结合免疫后抗体水平及攻毒保护结果,比较不同佐剂对禽流感灭活疫苗免疫应答的影响.结果显示,金黄色葡萄球菌毒素A重组蛋白(rSEA)佐剂组IFN-γ和IL-2 mRNA表达水平显著高于其他免疫组(P＜0.05).结果表明,建立的qRT-PCR特异性、重复性和稳定性良好,能够快速、准确检测鸭体内细胞因子的表达水平,为进一步评价疫苗免疫效果奠定了基础.     

复方参芩对人工感染心肌炎型细小病毒病犬的疗效试验

本试验为探讨复方参芩对人工感染心肌炎型细小病毒病犬的疗效,将犬分为空白对照组、模型组、阳性药物对照组、复方参芩组,用犬细小病毒接种建立动物模型,用复方参芩预防犬细小病毒病,应用生物信号采集系统的心电图技术测定试验动物的心率、心电图,取心脏石蜡包埋、切片、镜检。试验结果显示,攻毒后3 d,模型组犬心率和心电图异常率增加,心肌损害严重;复方参芩组犬心率保持正常,心电图异常率显著低于模型组犬,心肌组织与空白对照组相比差异不显著。试验犬感染病毒第5天,空白对照组犬未出现死亡,模型组犬死亡率为100%,复方参芩组保护率为80%,阳性药物对照组保护率为70%。表明复方参芩能有效预防心肌炎型犬细小病毒病。     

黄芪多糖对犬脾淋巴细胞细胞因子mRNA表达的影响

探讨黄芪多糖(APS)对犬脾淋巴细胞细胞因子mRNA表达的影响。10μg/mL APS作用于ConA或LPS刺激的犬脾淋巴细胞,RT-PCR方法检测相关细胞因子mRNA表达。结果表明,APS对IL-2、IFN-γ和TNF-αmRNA表达有显著增强作用,促进IL-2和IFN-γmRNA表达的效果显著优于ConA,而对IL-4 mRNA表达没有明显影响;在上述相关细胞因子mRNA表达抑制时,APS能使其表达显著提高。结论:APS通过对犬脾脏T淋巴细胞Th1型和Th2型细胞因子mRNA表达的整体调节来促进细胞免疫。     

沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4、IFN-γ mRNA表达的影响

本试验以绵羊外周血淋巴细胞为研究对象,研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖率,IL-2、IL-4、IFN-γ基因mRNA表达量的影响,为全面揭示沙葱黄酮的免疫调节活性机制和相关产品的开发提供试验依据。试验采用MTT法研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖率的影响,使用RT-PCR法研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞IL-2、IL-4、IFN-γ基因mRNA表达量的影响。结果显示,沙葱黄酮具有促进绵羊外周血淋巴细胞增殖的作用,对绵羊外周血淋巴细胞IL-2mRNA表达无明显调节作用,可上调IFN-γmRNA表达,下调IL-4mRNA表达。综上,沙葱黄酮具有促进绵羊外周血淋巴细胞增殖及免疫调节活性的作用。     

PCV2多表位靶向性疫苗仔猪免疫应答及疫苗免疫效力评价

制备猪圆环病毒2型(PCV2)多表位靶向性疫苗探讨其免疫应答类型及对仔猪免疫效力。用参考疫苗和PCV2多表位疫苗免疫21日龄PCV2和PRRSV抗原、抗体双阴性仔猪,流式细胞仪检测外周血T、B细胞含量和Th1/Th2比值,荧光定量RT-PCR检测IL-17、TGF-β及IFN-γ基因转录和ELISA测定IL-2、IL-4和IL-10蛋白表达,以期确定免疫应答类型。通过PCV2抗体效价和仔猪免疫攻毒保护试验评价疫苗免疫效力。结果显示,参考疫苗(A组)和PCV2多表位疫苗(B组)T细胞含量于免疫后7,14 d显著升高;Th1细胞在7～28 d显著升高,而Th2细胞含量无明显变化,使得Th1/Th2比值发生明显偏移,其中B组发生偏移程度较A组轻,表明疫苗免疫发生以Th1为主的T细胞免疫应答。A和B组IL-17和IFN-γ转录水平均显著升高,其中B组在7～14 d达到峰值,显著高于A组,显示B组细胞免疫活化和非特异性反应更强。外周血中IL-2蛋白含量A和B组均有所升高,组间差异不明显;IL-4蛋白含量A组在免疫后35 d明显高于B组,说明A组体液免疫强于B组。TGF-β基因转录水平和IL-10蛋白含量在免疫后无明显变化,显示均未导致免疫抑制的发生。A和B组疫苗均能刺激机体产生抗体,保护仔猪抵御PCV2强毒攻击,但B组疫苗免疫效力高于A组。结果表明,PCV2多表位靶向性疫苗主要刺激Th1介导的细胞免疫应答,激活IL-17和IFN-γ基因转录和IL-2、IL-4蛋白表达,有效保护免疫仔猪抵御PCV2强毒的攻击,具有良好的免疫保护效力。该研究为PCV2新型疫苗的研制和推广应用提供了技术和数据支撑。     

复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒作用机理研究

为探讨复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒(CPV)感染F81细胞作用机制,以F81细胞为宿主细胞,复方苦芩和黄芪多糖作药物对照,从复方苦芩总多糖对CPV的直接灭活作用、阻滞作用、抑制吸附、穿入及其复制5个方面探讨复方苦芩总多糖抗CPV活性机理.结果显示,复方苦芩总多糖在CPV病毒复制过程中均有一定的抑制作用,其中直接灭活作用效果优于复方苦芩组,P＜0.05,复制试验效果优于复方苦芩组,P＜0.05,与阳性药物组差异不显著,P＞0.05.从而表明复方苦芩总多糖体外抗CPV感染F81细胞效果明显,且主要通过直接灭活CPV和抑制其复制而发挥作用.     

黄芪多糖对PCV2阳性猪外周血免疫细胞及相关细胞因子的影响

检测外周血T淋巴细胞、嗜中性粒细胞、CD4+、CD8+细胞百分数及IL-2、IL-4和IFN-γ含量的变化,研究黄芪多糖(APS)对PCV2阳性猪免疫功能的调节作用。结果显示,APS能显著增加外周血T淋巴细胞、NBT阳性细胞、CD4+T细胞百分数及IL-2、IL-4、IFN-γ含量,显著降低CD8+T细胞百分数,推测APS通过上调CD4+细胞百分数、CD4+/CD8+及Th1反应恢复正常免疫机能。     

抗鸭传染性浆膜炎中药组方对鸭免疫功能的影响

在成功筛选出防治鸭传染性浆膜炎效果较好的中药组方P基础上,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测21日龄雏鸭外周血淋巴细胞(PBMC)IFN-γ和IL-6 mRNA的表达水平,研究该组方对鸭只免疫器官的影响。结果表明,P1组(预防组)鸭脾脏指数和胸腺指数显著或极显著高于y组(阳性对照组)与K组(健康对照组)(P0.05;P0.01),P2组(治疗组)鸭脾脏指数和胸腺指数极显著高于K组(P0.01);P1组极显著提高鸭外周血淋巴细胞IFN-γ mRNA的表达量(P0.01);P2组显著提高IFN-γ mRNA的表达量(P0.05);P1组、P2组IL-6 mRNA的表达量有升高的趋势(P0.1)。说明组方P能促进机体免疫器官的发育和分泌IFN-γ及IL-6,提高机体抗病力和免疫调节能力。     

鸡IFN-γ重组鸡痘病毒对鸡传染性腔上囊炎MB43弱毒疫苗免疫鸡免疫应答的影响

将重组鸡痘病毒（rFPV—IFN-γ）与IBDMB43弱毒疫苗联合接种SPF鸡，研究重组鸡IFN-γ对IBD疫苗免疫效果的影响。结果显示，rFPV—IFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rFPV-IFN-）＂）及rlFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rIFN-γ）在免疫后第2周即可检出ELISA抗体，比MB43疫苗单独免疫组早1周。用IBDVGx株攻击后，MB43＋rFPV-IFN-γ组和MB43＋rIFN-γ组免疫鸡的脾只有个别淋巴细胞核浓缩、核崩解，少数滤泡萎缩变性坏死；胸腺损伤程度轻于MB43疫苗单独免疫组和非免疫对照组。免疫后1周，3个免疫组外周血CD8^＋T淋巴细胞含量均显著高于非免疫对照组，CD4^＋T淋巴细胞含量变化不明显；攻毒后第2周，3个疫苗免疫组CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量均显著升高，各组之间CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量无明显差异。证实，rFPV—IFN-γ和rIFN-γ可加强疫苗的细胞免疫和体液免疫应答。     

EgM9免疫犬引起细胞因子表达的变化规律研究

用重组表达蛋白EgM9免疫犬,通过实时定量PCR方法检测IFN-γ和IL-4表达的变化规律.用Trizol试剂提取新鲜全血的总RNA,取0.5μg总RNA,采用实时定量PCR法逆转录扩增IFN-γ、IL-4和内参基因G3PDH,扩增产物经电泳分离后,用凝胶图像分析仪照相和扫描分析,检测其相对表达量.IFN-γ、IL-4...