中国西南地区的草地资源分析

根据中国草地资源调查资料(农业部畜牧兽医司,1996)、中国草业统计(2009)和相关文献,在实地调查的基础上,以中国西南地区的天然草地资源、冬闲田资源、林间草地为研究对象,分析了中国西南地区的草地资源状况。结果表明,1)西南地区天然草地总面积35.58×10⁶ hm²,占该区域土地总面积的32.59%,可利用草地面积29.04×10⁶ hm²,各省可利用草地面积占天然草地面积比例都在70%以上;2)按照以服务畜牧业为主要原则,将天然草地资源划为4个区域:热带湿润灌草丛区、亚热带湿润灌草丛区、亚热带半湿润灌草丛区和高原温带湿润灌丛草甸区;3)西南地区岩溶面积达52.23×10⁶ hm²,占土地面积的29.50%,共有292个岩溶县。石漠化面积达11.11×10⁶ hm²,占岩溶面积的21.27%,有88个石漠化严重县;4)西南地区农闲田可利用面积为961.46×10⁴ hm²,农闲田已利用面积为193.11×10⁴ hm²,占农闲田可利用面积的20.09%。冬闲田种草已利用面积共计118.58×10⁴ hm²,占农闲田可利用面积的12.33%,占农闲田已利用面积的61.40%。5)西南地区灌丛、疏林草地面积合计为1 894.84×10⁴ hm²,占草地面积的29.81%,占可利用草地面积的36.06%。     

豫南地区天然草地类型和利用措施的探讨

为了解豫南地区天然草地的特点和利用现状,对豫南草地开展样方和样地调查。结果表明：豫南山区草地面积为8.64×10⁴ hm²,占全省草地面积的16.54%,共有3类25个型,其中,热性灌草丛面积最大,占66.01%,低地草甸和暖性灌草丛次之,分别占18.14%和15.85%;豫南天然草地平均草层高度41.17 cm,平均盖度89.15%,平均产草量为3.96×10³ kg/hm²,草地载畜量为2.06×10⁵羊单位。综上,豫南天然草地利用率低,大部分属于未利用或者轻度利用。     

含水量和乳酸菌添加剂对多花黑麦草青贮品质的影响

本试验旨在研究含水量和乳酸菌添加剂对多花黑麦草青贮品质的影响,探究优质多花黑麦草青贮饲料的调制方法。试验选用孕穗期的多花黑麦草为原料,原料含水量设85.23%(W₁),74.70%(W₂)和65.70%(W₃)3个水平,乳酸菌添加浓度设置对照组0 cfu/g鲜样(L₀),10⁵ cfu/g鲜样(L₁),10⁶ cfu/g鲜样(L₂),10⁷ cfu/g鲜样(L₃)4个水平。桶装青贮42 d后开盖,取样测定青贮饲料的青贮品质。结果表明,在高含水量(85.23%)的条件下,无论是否添加乳酸菌,丁酸的含量和氨态氮/总氮均未能达到优质青贮的条件,青贮失败;当含水量为74.70%时,添加乳酸菌组的青贮品质优于未添加组,且随着添加浓度的增加青贮品质更佳;在含水量为65.70%的条件下,无论是否添加乳酸菌添加剂,青贮饲料均能获得较好的青贮品质,但添加乳酸菌后效果更佳。因此,W₃L₃(含水量65.70%+10⁷ cfu/g鲜样)处理的青贮效果最佳。     

猪圆环病毒Ⅱ型体外诱导3D4/2细胞炎症模型的建立

【目的】通过对猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）体外感染3D4/2细胞浓度、时间与细胞炎症水平进行探讨,建立PCV2体外感染3D4/2细胞炎症反应模型,以期为后期药物调控PCV2诱发3D4/2细胞炎症反应的研究奠定基础。【方法】将3D4/2细胞分为对照组及10⁰、10^-1、10^-2和10^-3 PCV2感染组,每组3个重复。对照组用DMEM培养,各PCV2感染组用不同稀释倍数PCV2液培养,2 h后均更换为含5%胎牛血清（FBS）的DMEM维持液进行培养,培养4、8、12和24 h后分别收集细胞及细胞上清液。采用Griess法检测一氧化氮（NO）水平,DCFH-DA荧光探针法检测活性氧（ROS）水平,酶标法检测还原型谷胱甘肽（GSH）水平,分光光度法检测黄嘌呤氧化酶（XOD）和髓过氧化物酶（MPO）活性,ELISA法测定白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-10、γ干扰素（IFN-γ）、IL-8、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）以及环氧合酶1（COX-1）和COX-2的分泌水平。【结果】10⁰至10^-3 PCV2作用4、8、12和24 h均能够成功感染3D4/2细胞。与对照组相比,10⁰ PCV2在感染3D4/2细胞4、8、12、24 h后ROS水平均极显著升高（P<0.01）,10^-1至10^-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后ROS水平显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）;10⁰至10^-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后,细胞内NO浓度及MPO活性显著提高（P<0.05）,细胞上清液中的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、IFN-γ、IL-8和MCP-1水平及COX-1活性均显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）,其中10⁰ PCV2感染3D4/2细胞后,各炎症因子水平上升最显著,且随着时间的延长,NO浓度逐渐升高,XOD活性逐渐降低。【结论】PCV2可诱导3D4/2细胞炎症反应,且10⁰ PCV2体外感染3D4/2细胞4~12 h是建立炎症模型的最佳条件。     

哈萨克羊肝片吸虫感染情况调查

<正>伊犁州地处新疆中西部伊犁谷地,位于东经80°9′⁸4°56′,北纬42°14′84°56′,北纬42°14′⁴4°50′,东西长360 km,南北最宽处275 km。占新疆总面积的3.4%。年降水量一般为20044°50′,东西长360 km,南北最宽处275 km。占新疆总面积的3.4%。年降水量一般为200⁵17.6 mm,是新疆平原区降水量最丰富的地区,年蒸发量1 200517.6 mm,是新疆平原区降水量最丰富的地区,年蒸发量1 200¹ 900 mm,大气相对湿度为65%左右,属大陆性气候。拥有天然草场2 000多万hm1 900 mm,大气相对湿度为65%左右,属大陆性气候。拥有天然草场2 000多万hm²,是新疆维吾尔自治区重要的畜牧业基地,养殖羊的品种大多为哈萨克羊种。近年来,养羊专业     

内蒙古典型草原生态系统服务功能价值评估研究

本文参照Constanza等的思路与方法,以内蒙古典型草原生态系统有机物生产为基础,分别采用市场价值法、替代市场法等估算其主要服务功能的经济价值。结果表明:内蒙古典型草原生态系统服务功能的总经济价值3325.9×10⁸元/a,其中,气体调节价值272.3×10⁸元/a,占8.19%;水土保持价值2988.0×10⁸元/a,占89.84%;涵养水源价值为18.2×10⁸元/a,占0.55%;有机物质生产价值27.52×10⁸元/a,占0.83%;生物多样性保护价值16.1×10⁸元/a,占0.48%;生态旅游价值3.8×10⁸元/a,占0.11%;在各种服务功能中,水土保持价值最为重要;因此,加强草原生态环境建设对于维持区域生态安全具有重要意义。     

犬肠道平滑肌肉瘤的病例报告

<正>肠道平滑肌肉瘤是源自于肠黏膜肌层或固有肌层平滑肌细胞的间叶性肿瘤,是犬第二大常见肠道肿瘤^[1]。平滑肌肉瘤通常生长在犬的盲肠和空肠处,发病年龄平均为10.5岁。手术切除是肠道平滑肌肉瘤最常用的治疗方法^[2]。犬肠道肿瘤无典型的临床症状,极易与肠道异物和肠套叠等肠道疾病混淆而造成误诊^[3]。本院接诊了1例肠道平滑肌肉瘤病例,经手术切除和术后护理,患犬恢复良好,现报告如下。1 病例介绍金毛巡回猎犬,8岁3个月,雄性未绝育,     

苜蓿对盐碱的适应性

我国约有盐渍化土地1亿公顷,其中盐土地和盐土荒地2667×10⁴hm^2[1],约占全国耕地的21%^[2]。甘肃省河西走廊地区次生盐渍化十分严重,致使大面积农田变为盐碱地,成为低产田或弃耕地,使得土地的利用率受到限制。     

无血清悬浮培养PK-15细胞及其对猪圆环病毒2型增殖的影响

【目的】 建立基于无血清悬浮培养PK-15细胞生产猪圆环病毒2型（PCV2）疫苗的工艺，提高PCV2疫苗生产效率，降低PCV2疫苗生产成本。【方法】 首先采用直接驯化法对贴壁生长的PK-15细胞进行无血清悬浮培养驯化，并在无血清悬浮培养体系下，采用连续传代的方法考察驯化成功的PK-15细胞的传代和生长稳定性。研究不同感染复数（MOI）（0.10、0.05、0.01和0.001）和不同PK-15细胞接种密度（CDI）（1.0×10⁶、3.0×10⁶、5.0×10⁶/mL）对PCV2增殖的影响，同时对感染病毒前后的细胞培养液中葡萄糖、氨基酸及代谢副产物乳酸和氨进行初步分析。【结果】 贴壁PK-15细胞经过30 d的直接驯化可以快速适应无血清悬浮培养，且驯化过程中细胞平均比生长速率由0.1 d^-1增加到0.6 d^-1；悬浮PK-15细胞可以至少连续稳定传15代，连续传代过程中平均比生长速率在0.6 d^-1附近波动，且细胞活率始终>90%；以1.0×10⁶/mL接种，第4天可达到峰值活细胞密度6.2×10⁶/mL，并可维持1 d，第4天前活率均>90%，此后快速下降；病毒增殖最佳工艺参数为：感染复数为0.05，细胞接种密度为1.0×10⁶/mL，最终收获时病毒滴度可达10^6.2TCID₅₀/mL；对细胞感染前后的代谢分析发现，病毒感染后细胞对葡萄糖和多数氨基酸代谢快于感染前，且感染组在感染后72 h附近出现葡萄糖和谷氨酰胺耗竭并伴随代谢副产物乳酸和氨快速积累，之后细胞改变代谢途径并利用乳酸。【结论】 30 d的直接驯化可以获得悬浮PK-15细胞株，PK-15细胞可用于PCV2增殖，结果可为大规模无血清悬浮培养PK-15细胞生产PCV2疫苗提供一定理论和实践基础。     

大肠杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的研究

试验旨在研究大肠杆菌（E.coli）对奶牛子宫内膜上皮细胞（bovine endometrial epithelial cells,BEECs）的体外炎性损伤,探究大肠杆菌引发炎性反应的最佳浓度、作用时间及机制。首先,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵、1×10⁶、2.5×10⁶、5×10⁶ CFU/mL）诱导刺激细胞3、6和9 h,通过倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测D_{450 nm}值,检测大肠杆菌对细胞活性的影响;其次,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞3、6和9 h,用ELISA方法检测细胞上清液中白介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的分泌量;最后,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞6和9 h,用Western blotting检测核因子κB抑制蛋白α（IκBα）和p65蛋白的磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,大肠杆菌感染细胞9 h后,1×10⁶、2.5×10⁶和5×10⁶ CFU/mL大肠杆菌组细胞活性均极显著降低（P<0.01）,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组显著降低（P<0.05）;大肠杆菌感染细胞9 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α极显著升高（P<0.01）;大肠杆菌感染细胞6 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IκBα、p65蛋白磷酸化水平和IL-6均极显著升高（P<0.01）,5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌组IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结果表明,大肠杆菌可以刺激奶牛子宫内膜上皮细胞产生炎性反应,且当细胞与5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌作用6 h或与5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌作用9 h为最佳。     

全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10⁶/mL～1×10⁶/mL接种,细胞密度最高达6×10⁶/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为：接毒时细胞密度2×10⁶/mL～3×10⁶/mL、接毒量0.1MOI～1MOI、接毒后48 h～72 h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^9.25TCID₅₀/mL。试验鸡分别免疫0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.3 mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。     

天祝县草地有毒植物的种类、危害及防治

本文对天祝县天然草地有毒植物进行了调查。结果显示：天祝县有毒植物共计50种,隶属12科21属,分布总面积21.36×10⁴ hm²。草原类草地有毒植物主要是瑞香科狼毒和禾本科醉马草,草甸类草地常见有毒植物分属豆科、毛茛科、杜鹃花科、龙胆科、菊科以及玄参科等,分布范围广。主要危害种类为棘豆属植物、狼毒和醉马草,分布面积分别为7.95×10⁴ hm²,0.67×10⁴ hm²和0.33×10⁴ hm²;危害最严重的为棘豆属植物,平均密度24～66株/m²,严重的达90株/m²以上,盖度25%以上,产草量占群落干草总产量的35%左右。虽然人工拔除和化学灭除有毒植物效果明显,但受各种客观因素影响难以大面积推广,应总结推广毒草防除的新技术和新方法。     

2022年青海省都兰县天然草地有害生物调查

本文对都兰县天然草地有害生物进行调查，结果表明，全县草地有害生物发生面积为38.13×10⁴ hm²，危害面积为29.90×10⁴ hm²。其中草原鼠害发生面积为26.86×10⁴ hm²，危害面积为21.97×10⁴ hm²；草地虫害发生面积为9.20×10⁴ hm²，危害面积为7.00×10⁴ hm²；毒害草发生面积为2.07×10⁴ hm²，危害面积为0.93×10⁴ hm²。通过调查，分析存在的问题，提出合理建议，为都兰县草地有害生物防控提供依据。     

MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定

提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5'端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×10⁵ CFU/mL,文库总容量为1.1×10⁶ CFU,平均插入片段长度为1190 bp,阳性重组率为100%。入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库,平均滴度为1×10⁵ CFU/mL,文库总容量为1.2×10⁶ CFU,平均插入片段长度为1087 bp,重组率为100%。构建的表达文库具有较高的质量,为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。     

大豆凝集素单克隆抗体的制备及鉴定

为获得分泌抗大豆凝集素(SBA)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以纯化的SBA为抗原,免疫BALB/c小鼠,加强免疫3 d后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,应用有限稀释法和间接ELISA 方法克隆筛选出2株分泌抗SBA单克隆抗体的杂交瘤细胞系A7、F12。细胞上清抗体效价均在1∶2×10³以上,腹水抗体效价均为1∶1×10⁶,单抗亚型鉴定结果均为IgG2b型,分子质量为189.6 ku,亲和常数为7.1×10⁷ mol/L,Western blotting结果表明,2株单抗具有较高的特异性。该McAb的制备为建立SBA定量检测方法奠定了基础。     

猪轮状病毒VP4基因重组腺病毒的构建及抗体水平评价

【目的】构建猪轮状病毒（Porcine rotavirus,PoRV）流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒,为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列（登录号：MH898990.1）合成PoRV VP4基因,将得到的目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV进行重组,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-VP4;腺病毒穿梭载体经过Pme Ⅰ内切酶线性化处理后与含有腺病毒骨架pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组获得重组质粒pAd-VP4,对重组质粒进行Pac Ⅰ酶切鉴定,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。将重组质粒转染HEK293A细胞获得重组腺病毒rAd-VP4,对该重组腺病毒进行扩大培养并测定重组腺病毒的半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）;通过RT-PCR检测其体外表达情况,Western blotting检测其反应原性;将制备的重组腺病毒用不同病毒滴度和不同免疫次数对小鼠进行腹腔免疫,收集血清通过ELISA法测定IgG抗体水平。【结果】RT-PCR扩增出1条大小为2 343 bp的rAd-VP4重组腺病毒条带,测序结果正确,表明重组腺病毒rAd-VP4构建成功,测得rAd-VP4病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀,Western blotting结果表明,重组腺病毒rAd-VP4在蛋白水平上得到了正确表达,蛋白的分子质量约为87 ku。小鼠IgG抗体检测结果表明,在用10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4免疫后的第35和42天,小鼠血清中的IgG抗体水平显著高于10^5.3 TCID₅₀ TGE-PED-PRV三联活疫苗IgG抗体水平（P<0.05）;10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第35和42天产生的抗体水平显著高于10^5.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05）,而10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第28天产生的抗体水平显著高于10^6.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05）。10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4的2次免疫和3次免疫产生的IgG抗体在不同免疫时间均差异不显著（P>0.05）。【结论】本研究成功构建了重组腺病毒rAd-VP4,其病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀。10^6.5和10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4分别在第42和28天产生较高的IgG抗体水平,2次免疫和3次免疫对产生IgG抗体水平均无显著影响。试验结果可为开发PoRV重组腺病毒候选疫苗提供参考。     

中国小型生猪定点屠宰企业约1万家 单个企业屠宰能力小

<正>2012年年底全国生猪定点屠宰企业总数为1.47万家,其中,中大型生猪定点屠宰厂(场)数量仅为0.46万家左右,小型生猪定点屠宰场的数量为1.0万家左右,占屠宰量场总数量的近70%。在中大型生猪定点屠宰厂(场)中,依然有大部分企业的屠宰能力低于50万头/年,在20³0万头/年;估计年屠宰能力大于50万头生猪屠宰厂(场)数量最多占全国生猪定点屠宰企业总数量的10%30万头/年;估计年屠宰能力大于50万头生猪屠宰厂(场)数量最多占全国生猪定点屠宰企业总数量的10%¹5%左右;     

牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV)是国内近几年发现的引起犊牛腹泻的新病原，为了建立快速、准确且能定量分析BNeV的检测方法，本试验根据GenBank上发布的BNeV聚合酶基因(RdRp)序列设计合成了1对特异性引物和1条探针，并通过优化反应体系，成功建立了BNeV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法并对临床样品进行检测。结果表示，该方法最佳上下游引物浓度均为500 nmol/L,探针浓度为400 nmol/L,在1×10⁸～1×10¹拷贝/μL之间呈现良好的线性关系，线性相关系数R²=0.996,扩增效率为105.9%;该方法特异性较强，在多个犊牛腹泻相关病原中，只检测出BNeV;敏感性较高，对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×10¹拷贝/μL,而普通PCR对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×10³拷贝/μL;重复性较好，组内变异系数和组间变异系数均小于3%;对2021年3-5月采自内蒙古地区牧场的37份犊牛粪样中BNeV的检出率为35.1%,...     

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究

为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示：Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48～72 h病毒滴度达到峰值10^8.625 TCID₅₀/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD₅₀为10^3.000 TCID₅₀/0.2 mL。以10^7.676 TCID₅₀的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^7.676 TCID₅₀/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD₅₀的Y17215...     

青海省囊谦县鼠疫分离菌株病原学研究

对青海省囊谦县分离的36株鼠疫菌进行糖醇酵解实验、毒力因子、质粒谱和鼠疫菌差异区段(DFR)分型研究,结果表明,其中33株为青藏高原型菌株,1株为祁连山型,其余2株与青海省疫源地生态型菌株均不相同。21株鼠疫菌均含有4个毒力因子,占58.3%(21/36)。63.89%(23/36)的受试菌株Pgm阳性,22.22%(8/36)的受试菌株Pgm阴性,Pgm混合型菌株为13.89%(5/36)。5型和36型为该地区主要基因组型。囊谦县36株鼠疫菌共携带3种质粒,均为规范化质粒,组成1种质粒谱：6×10⁶、45×10⁶、65×10⁶。