绵羊肺炎支原体新疆流行株的分离鉴定及其膜蛋白P80基因序列分析

本研究对新疆沙湾县疑似绵羊肺炎支原体(MO)感染的病料进行病原的分离鉴定,并对分离株进行形态学、生化和分子生物学鉴定。分离鉴定出MO13株,提取MO分离株的基因组,经PCR技术扩增MO分离株膜蛋白P80基因,将扩增序列与Gen Bank中已知的MO法国14811株膜蛋白P80基因序列进行比较。结果表明,该序列核苷酸的同源性为97.11%,推导氨基酸序列的同源性达到98.28%。该基因存在60处碱基突变,其中24处是同义突变,36处为错义突变,表明MO不同地域分离株膜蛋白P80存在一定的遗传变异。     

山东省鸡鼻气管鸟杆菌的分离与鉴定

【目的】对山东省鸡鼻气管鸟杆菌进行分离鉴定。【方法】采集山东省不同地区有呼吸道症状的病(死)鸡,进行鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)的分离,根据培养特性及生化试验和玻片凝集试验结果对分离的菌株进行鉴定;应用PCR方法对分离菌株16SrRNA基因的一段保守序列进行扩增,应用琼脂扩散沉淀试验(AGP)对分离菌株的血清型进行鉴定,并对分离株进行药敏试验。【结果】试验共分离到5株ORT,所有分离菌株均能扩增到1条长671bp的特异性片段,而阴性对照菌株的扩增结果为阴性;5株ORT分离菌株可分为3个血清型,其中血清A型3株、血清B型1株、血清D型1株;分离ORT菌株对羟氨苄青霉素、头孢曲松、丁胺卡那、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。【结论】从山东省病死肉鸡中分离鉴定到5株ORT。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株的分离与鉴定

对江苏泰兴某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎病料进行实验室分离培养,成功分离到1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,并对其进行生化特性、双抗夹心ELISA鉴定。为进一步分析该分离株的血清型,针对ApxIVA和ApfA保守基因设计2对检测引物,PCR结果表明:该分离株未扩增出预期大小的片段,说明该分离株很有可能是1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株,其血清型还有待进一步鉴定。     

链球菌的分离鉴定及药敏试验

为分离和鉴定疑似链球菌感染病料,该试验采用革兰氏阳性菌选择性培养基进行分离培养,并进行生化试验鉴定及药敏试验。结果表明:6份病料中分离出6株链球菌菌株,根据生化试验鉴定表推断出,有4株为C群,1株为D群,1株为E群。药敏试验结果表明,先锋必和青霉素对链球菌有较好的抑制作用,此结果为链球菌病的研究和防治提供一定的理论依据。     

16S rRNA与Vitek-32对临床感染猪肠球菌鉴定结果比较

旨在利用两种常用的细菌分型方法对感染猪的肠球菌的鉴定结果进行比较和分析.将从河南洛阳、济源、许昌、南阳等地送检病猪体内分离的42株革兰阳性球菌纯培养后,分别用16S rRNA基因序列比较和Vitek-32全自动细菌鉴定系统进行鉴定.Vitek-32对42株分离茵中的34株鉴定到种的水平,分别是粪肠球茵(E.faecalis)10株、屎肠球菌(E.faecium)2株、铅黄肠球菌(E casseliflavus)22株;另有8株未成功鉴定.16S rRNA基因序列分析对42株分离菌成功的鉴定结果是为粪肠球菌12株,屎肠球菌30株.经比较发现,Vitek-32鉴定的10株粪肠球菌中除1株被16S rRNA鉴定为屎肠球菌外,其余9株均相同;Vitek-32鉴定的2株屎肠球菌与16S rRNA鉴定结果相同;Vitek-32鉴定的22株铅黄肠球菌除了1株被16S rRNA鉴定为粪肠球菌外,其余全部被鉴定为屎肠球菌;8株未能被Vitek-32鉴定的肠球菌被16S rRNA方法分别鉴定为粪肠球菌(2株)和屎肠球菌(6株).在感染猪的肠球茵分型鉴定中,Vitck-32对粪肠球菌鉴定结果与16S rRNA比较具有较高的一致性(75%);而对于屎肠球菌的鉴定结果与16SrRNA比较出现了较大的差异(93.3%).     

两株禽绿脓杆菌的分离鉴定与致病性研究

[目的]从临汾、平遥等地养殖场采集发病鸡病料,对禽绿脓杆菌进行分离鉴定,及耐药分析和致病性研究。[方法]通过分离培养,形态特征观察,生化试验,16S rDNA基因PCR扩增与测序分析,药敏试验及动物致病性试验,以鉴定禽绿脓杆菌。[结果]经鉴定共分离2株禽绿脓杆菌,分离菌株G1株和G2株接种雏鸡在24 h内死亡率可达到100%,将分离株的16S rDNA基因序列与NCBI中绿脓杆菌序列进行Blast比对,分离菌株与绿脓杆菌不同菌株的同源性高达99%以上,分离菌株对环丙沙星、恩诺沙星、亚胺培南、哌拉西林和替卡西林等抗生素敏感。[结论]本研究通过对山西地区禽绿脓杆菌分离株的鉴定,旨在为进一步研究其致病机制、临床用药和治疗提供理论依据。     

广东地区鸡传染性囊病的研究

本文报道传染性囊病(IBD)血清学调查情况及两株传染性囊病病毒(IBDV)的分离和鉴定过程。这两毒株的鉴定是通过血清学、病理学、理化性质测定和电镜观察等方法而确定下来的。 通过对广东省五个地区17个鸡场的血清学调查,发现其中13个鸡场存在IBD沉淀抗体。由此推论,可能我省已有不少鸡场存在着IBD。本文并分析了一些鸡场爆发鸡新城疫的可能原因是IBD的免疫抑制作用。 在血清学调查的基础上,成功地分离到两个IBDV株。 在病毒的鉴定过程中,将分离株接种到易感小鸡后,引起法氏囊产生典型的病理学变化,包括水肿、表面见条纹或黄色冻胶样物等。接种病毒3天后,便见囊萎缩。组织学观察发现淋巴细胞坏死,网状细胞增生等炎症反应。接种病毒1月后,囊有明显的再生作用。两分离株均不能使小鸡产生明显的临诊症状,其它器官组织一般无肉眼病变可见。 将分离株接种鸡胚后,鸡胚于3～7天死亡。胚体出现充血、出血、皮下水肿、肝变黄绿色、且呈斑驳状坏死等病变。 琼脂凝胶沉淀试验表明,两个分离株均能与美国IBD阳性血清产生明显的沉淀线。在病毒中和试验中,用两个分离株感染鸡后,其康复血清能中和美国IBD—Lukert病毒株,其中和指数均大于4.2. 本试验对其中一分离株进行了毒价测定、电镜观察和理化性质鉴定。对7天龄和1月龄     

两株石斛内生炭角菌的鉴定及活性成分初步研究

对石斛内生炭角菌进行鉴定及活性成分初步研究。从流苏石斛的茎和长苏石斛的叶片中分离出两株炭角菌,将其编号为lsjz和csyz。运用形态学和分子生物学相结合的方法对这两株菌进行鉴定,结果表明：lsjz和csyz为Xylaria vertostda。并测定了这两株菌的发酵终点、胞内及胞外多糖含量、胞内及胞外水溶性蛋白含量、抑菌活性等。     

鲁西地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验

奶牛乳房炎是奶牛常见病和多发病之一,给奶牛饲养业带来了巨大的经济损失。本试验对鲁西多个奶牛场的奶牛临床型乳房炎病原菌进行分离、鉴定,从90份样品中分离出118株细菌,经培养特性、染色镜检、生化鉴定等试验,鉴定出无乳链球菌58株,占分离菌的49.15%;大肠杆菌25株,占分离菌的21.19%;金黄色葡萄球菌23株,占分离菌的19.49%,真菌12株,占分离菌的10.17%。分别对所有分离株进行16种药物的敏感性试验,结果表明;除真菌外所有菌株对诺氟沙星、氧氟沙星高度敏感,对临床常用的青霉素、链霉素等具有较高的耐药性。     

犬细小病毒的分离与鉴定

采用细胞培养法对疑似犬细小病毒的粪便和内脏进行了分离和鉴定,并对分离到的病毒进行生物学特性鉴定和动物回归试验。结果共分离到3株CPV,分离株在猫肾细胞F81产生明显细胞病变,血凝效价达1∶27～1∶210,细胞病变能被犬细小病毒阳性血清所抑制,接种幼犬后,分离株3可以引起试验犬发病死亡。     

新疆牛羊布鲁氏菌流行株种及生物型鉴定

【目的】掌握新疆畜间布鲁氏菌病流行株的流行病学特征,为新疆制定切实可行的布鲁氏菌病综合性防控措施提供科学依据和技术支撑。【方法】应用传统分离病原方法从牛羊病料中获得疑似布鲁氏菌11株,应用分子生物学方法对分离菌株进行布鲁氏菌属与种型鉴定,应用常规生化试验对AMOS-PCR鉴定的羊种Brucella进行生物亚型鉴定。【结果】9株分离株均为布鲁氏菌,而且经AMOS-PCR分型方法鉴定均为羊种菌。进一步采用传统细菌分类鉴定,9株布鲁氏菌均为羊种生物3型。【结论】新疆近两年人感染布鲁氏菌的流行菌株为羊种生物3型,应用AMOS-PCR方法可以安全、快速对布鲁氏菌流行株进行种型鉴定而确定传染源,为新疆制定布鲁氏菌病的综合防制策略莫定基础。     

规模猪场中猪呼吸道病原菌的分离与鉴定

1999年以来，对宁夏两大规模养猪场和一些个体养猪场中以呼吸道症状为特征的病猪进行了诊断调查，猪群发病率为10％－20％，病死率约15％。采取病死猪的肺脏等分离材料，分离到10株细菌；经鉴定表明，有4株为多杀性巴氏杆菌，3株为胸膜肺炎嗜血杆菌，3株为大肠杆菌。采取具有流鼻，歪鼻子症状的患猪鼻腔分泌物10份，分离到13株细菌，经鉴定有8株为支气管败血波氏杆菌，2株为球菌，2株为多杀性巴氏杆菌，1株为大肠杆菌。上述菌株经动物试验表明，除2株鼻腔中分离到的球菌对实验动物无致病性外，其它均有致病性。另外，对分离的4株多杀性巴氏杆菌，经荚膜抗原型鉴定为B型。     

麋鹿致病性大肠杆菌的分离鉴定

从死亡麋鹿的心血、肝脏和肾脏各分离、纯化获得3个分离株,并对分离细菌进行了菌株鉴定及致病性分析。分别应用常规生理生化鉴定、人工感染试验及16S rRNA基因序列分析等手段,确认3个分离株均为致病性大肠杆菌。     

禽致病菌ESBLs和AmpC酶的检测及药敏分析

用全自动微生物鉴定系统(VITEK-32)鉴定了禽分离致病菌,分别进行了β-内酰胺酶(BLA)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶的检测,并用试管两倍稀释法测定了各种抗生素对非产酶菌、产ESBLs菌及产AmpC菌的抗菌活性。结果表明,鉴定分离的20株致病菌有大肠埃希菌15株、阴沟肠杆菌1株、铜绿假单胞菌1株、法氏柠檬酸杆菌1株、肺炎克雷伯菌1株及鹑鸡肠球菌1株,其中法氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌及鹑鸡肠球菌系兽医上首次检出。报道所分离的20株致病菌均产β-内酰胺酶,其中产ESBLs 9株,同时产ESBLs和AmpC酶1株。产酶菌株对抗生素的耐药性严重,而抗生素/抑制剂联用能降低药物对细菌的MICs。     

不同血清型禽霍乱病原对小白鼠的交互保护试验

我们曾按照Carter的间接血凝鉴定荚膜法和Namioka的试管凝集鉴定菌体法对来自吉林省的禽霍乱多杀性巴氏杆菌分离株进行了血清学定型。52株的定型结果是:39株为5:A,6株为5:—,7株为8:—。据文献报道引起禽霍乱的多杀性巴氏杆菌的血清型主要是5:A和8:A,而菌体型中的05和08的荚膜都是A群,所以分离的52株,实质上只是05和08的两种不同的菌体型。     

鸡枞菌菌圃微生物的分离纯化及初步鉴定

为分析鸡枞菌菌圃内部微生物的相关联系,采用平板涂布法,分离纯化了菌圃中可培养的微生物,并对可培养微生物的主体类群进行了鉴定。结果表明,对鸡枞菌菌圃中可培养的微生物进行分离,得到383株细菌和放线菌,其中339株为革兰氏阳性、44株为革兰氏阴性;得到47种丝状真菌,其中能根据菌株形态学特征进行初步鉴定的有43株,另有4株未能鉴定。     

仔猪水肿病大肠杆菌的分离鉴定及抑菌试验

试验采集辽宁农业职业技术学院种猪场16份疑似仔猪水肿病病料,进行细菌分离和生化鉴定,并进行大肠杆菌药敏试验。结果表明,分离到大肠杆菌13株,全部为致病性大肠杆菌。应用微量平板凝集试验,对分离的13株致病菌进行了血清型鉴定,鉴定出11株共有5种血清型,其中以O139血清型最多,共有5株,占能定型分离致病菌株的45％,各菌株的耐药菌谱不同,大多数菌对氟苯尼考,头孢呋新敏感,对新霉素、环丙沙星、丁胺卡那霉素、氟哌酸、庆大霉素较敏感,对氧氟沙星、头孢唑啉、氨苄西林、红霉素不敏感。     

河南省信阳市鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和血清型分析

对河南省信阳市送检的疑似鸭疫里默氏杆菌感染病鸭进行病原菌的分离鉴定。根据培养特性和生化鉴定结果分离出6株鸭疫里默氏杆菌;经平板凝集试验确定出血清1型1株,血清2型2株,另外3株未定型;人工感染试验表明,分离菌株对樱桃谷肉雏鸭有很强的致病性。     

新疆番茄生长及其果实加工过程中霉菌污染的监测

[目的]确定新疆番茄果实生长及其加工过程中的霉菌组成,了解不同加工番茄产地所分离霉菌的差异与分布特征以及是否有产毒霉菌污染.[方法]对番茄生长与加工过程中不同环节进行样品采集与霉菌分离,并根据菌落形态特征、显微特征、生理生化和ITS序列分析等方法对分离获得的霉菌进行鉴定.[结果]共分离鉴定45株霉菌,曲霉为优势菌17株,其次为青霉9株,镰孢菌6株,赤霉菌4株,木霉2株,其它类型霉菌7株.[结论]番茄生长土壤与番茄果实中均分离鉴定出产毒真菌黄曲霉菌和木贼镰孢霉,从番茄叶片中分离到产毒真菌尖孢镰孢菌.     

柑橘采后青霉病原中寄生病毒的筛选与鉴定

【目的】从采后霉烂柑橘上分离青霉病原菌，并筛选和鉴定病原中寄生的青霉病毒。【方法】以柑橘园腐烂的柑橘为材料，挑取分生孢子在PDA培养基上进行划线分离，根据总基因组电泳图谱筛选具有基因组额外核酸片段的病毒菌株，并使用RT-PCR扩增额外片段测序鉴定相应病毒。【结果】根据菌落形态初步分组，分离到两类菌落特征差异明显的青霉菌(共25株),其中具灰绿色菌落的青霉16株，具暗黄绿色菌落的青霉9株。扩增两类青霉的代表菌株(DY10和DY18)的ITS并测序，鉴定结果显示，DY10和DY18分别为意大利青霉(Penicillium italicum)和指状青霉(P.digitatum)。青霉菌株总基因组电泳筛选发现，DY9、DY11、DY12、DY17菌株中存在约6000 bp的基因组额外片段，推测可能为指状青霉病毒1 (PdV1)同种不同病毒株的基因组。根据PdV1基因组设计特异性引物，RT-PCR扩增出约500 bp的条带，测序序列与PdV1基因组同源序列的一致性高达99.7%,将所分离的病毒鉴定为PdV1同种的不同病毒株。【结论】本研究从腐烂柑橘上分离鉴定意大利青霉16株和指状青霉9株，并从指...