褪黑素与盐酸多巴胺在猪精液冷冻保存中的应用效果

为给改良猪精液冷冻稀释液配方提供参考数据,分析了不同浓度褪黑素和盐酸多巴胺对猪精子冷冻后畸形率和顶体完整率的影响。结果表明,10mmol/L褪黑素及3种浓度的盐酸多巴胺(0.1mmol/L,1mmol/L,10mmol/L)均能有效改善冻后猪精子的畸形率和顶体完整率,两种试剂均可在猪精液冷冻中进一步推广应用。     

谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响

研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。     

谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响

研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。     

中药提取物川芎嗪及葛根素在猪精液冷冻中的应用效果初报

为了进一步提高猪精液的冻后品质,为中药提取物在猪精液冷冻中的应用提供参考数据,采用手握法采集成年种公猪精液,预处理后用添加不同剂量盐酸川穹嗪(0、0.08、0.10、0.12 mmol/L)和葛根素(0、0.001、0.01、0.10 mmol/L)的稀释液稀释,经平衡、冷冻、解冻后采用考马斯亮蓝对精子进行染色,然后在显微镜下检查精子畸形率和顶体完整率。结果表明,不同浓度的盐酸川穹嗪均能显著降低冻后精子的畸形率,显著提高冻后精子的顶体完整率,其中0.12 mmol/L盐酸川穹嗪效果最好。一定量葛根素不能显著降低冻后精子的畸形率,也不能显著提高冻后精子的顶体完整率。     

乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响

[目的]探索乳铁蛋白在牛精液冷冻中的应用效果,为乳铁蛋白在家畜精液保存中的研究与应用提供初步的参考数据。[方法]在常用稀释液(果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液)的基础上,分别添加不同浓度(250、500、1000mg/L)的乳铁蛋白,观察乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响。[结果]3种浓度的乳铁蛋白对精子的冻后活力、复苏率、VAP、VSL、VCL、畸形率、顶体完整率及低渗肿胀率均没有显著影响。[结论]在该试验条件下,乳铁蛋白未能显著提高牛精液的冻后质量。     

荷斯坦种公牛冻精质量的综合分析研究

牛冻精质量与精子活力对牛群质量的提高和改良有着重要作用,在奶牛业生产和育种中占有至关重要的地位。按照国家技术监督局发布的《牛冷冻精液质量检测方法》(GB4143—84),测定了荷斯坦种公牛的冷冻精液解冻后的成活率、顶体完整率、精子活力、每剂量精液中呈直线前进运动精子数、畸形率、每剂量菌落数和剂数因素分析。测定了荷斯坦种公牛的冷冻精液解冻后的成活率≥10%;顶体完整率≥92.2%;精子活力≥40%;每剂量精液中呈直线前进运动精子数≥1.73×107个;畸形率≤13.5%;每剂量菌落数小于500个。测定结果表明,荷斯坦种公牛的冷冻精液质量指标均达到国家标准。我们应用多元回归分析的原理,系统地分析了荷斯坦种公牛的原精各主要指标(射精量、原精密度、原精活力)及冻后精子复苏率对冻后精子活力和冻精质量剂数的影响程度,以及它们之间的相关程度的大小。分析结果说明,要想提高冻精质量与精子活力这一质量指标,就要提高原精质量(活力、密度、冻后精子复苏率);而提高冷冻精液剂数这一数量指标,就要提高射精量、原精密度。且只有通过提高种公牛营养水平,提高采精技术和冷冻技术才能达到高质量冻精生产。     

水牛卵母细胞玻璃化冷冻后孤雌激活方法的优化

[目的]了解玻璃化冷冻一解冻及不同孤雌激活条件对水牛卵母细胞发育潜能的影响,为构建完善的水牛卵母细胞孤雌激活培养体系奠定基础.[方法]利用玻璃化冷冻法对水牛体外成熟卵母细胞进行冷冻保存1～2d,解冻复苏后进行孤雌激活,以新鲜的体外成熟卵母细胞为对照,探讨离子霉素浓度、6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)浓度和处理时间对玻璃化冷冻复苏后水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响.[结果]与新鲜的体外成熟卵母细胞相比,玻璃化冷冻—解冻复苏后水牛体外成熟卵母细胞孤雌激活的卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率均极显著降低(P＜0.01).水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,以3.5 μmol/L离子霉素激活5 min联合2mmol/L 6-DMAP培养2h的孤雌激活效果最佳,其卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率分别为60.6％、45.1％、33.7％和14.8％.[结论]水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,其激活阈值发生改变,因此不宜采用与新鲜体外成熟卵母细胞一致的激活程序进行孤雌激活.     

品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响

[目的]明确品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响及其互作关系,为解决鸡精液冷冻保存不稳定的困境及加快新品种培育进程提供技术支持.[方法]采集黑丝羽乌骨鸡(简称乌鸡)和黄土二鸡(简称黄鸡)2个品种的公鸡精液,分别添加0、25、50和100μmol/L白藜芦醇,以二甲基乙酰胺(DMA)为抗冻剂制备细管冻精,在液氮面上1 cm处(高冷冻速率)或3 cm处(低冷冻速率)冷冻,通过冻后精子活力、脂质过氧化水平和线粒体膜电位水平评价鸡精液冻后品质.[结果]黄鸡精液冻后精子活力显著高于乌鸡(P<0.05,下同),但线粒体膜电位水平差异不显著(P>0.05,下同);高冷冻速率下的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于低冷冻速率,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平差异不显著;不同白藜芦醇添加量下,鸡精液冻后精子活力和脂质过氧化水平差异不显著,但线粒体膜电位水平差异显著.双因素组合时,品种×冷冻速率、品种×白藜芦醇和冷冻速率×白藜芦醇间均存在交互作用,其中,乌鸡×高冷冻速率组合的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于黄鸡×高冷冻速率组合,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平无显著差异.三因素组合时,鸡精液冻后脂质过氧化水平最低的组合是乌鸡×低冷冻速率×50μmol/L白藜芦醇,线粒体膜电位水平最高的组合是乌鸡×低冷冻速率×0μmol/L白藜芦醇.[结论]鸡精液冷冻保存时其品种、冷冻速率和白藜芦醇间存在二元互作效应或三元互作效应.因此,只有充分考虑鸡品种、冷冻速率和抗氧化剂间的互作效应,才能切实提高鸡冷冻精液的品质.     

SpermCryo无卵黄冷冻液对食蟹猴精子冷冻保存的影响

为了建立运用商品化人类精子无卵黄冷冻液SpermCryoTM All-round冷冻保存食蟹猴精子的方法,比较了快速(-435℃/min)、中速(-183℃/min)和慢速(-69℃/min)的降温速率以及不同冷冻平衡时间(10和30 min)对食蟹猴精子冷冻保存的效果.结果表明,在液氮上方冷冻平衡10 min对食蟹猴精子的复苏活力显著高于30 min.用快速和中速冷冻速率保存的精子的复苏活力较高,冻存精子的复苏活力明显高于慢速冷冻速率保存的精子.该研究建立和优化的SpermCryo无卵黄冷冻液冷冻保存食蟹猴精子的方法,可简单快速完成精子的冷冻保存,并获得较高的冷冻复苏存活率.该研究结果对深入研究灵长类动物精子冷冻损伤的机制和在辅助生殖中的应用具有重要意义.     

猪精液冷冻方法试验

试验表明,初冻温度是影响猪精液冷冻效果的重要因素。冻前及冷冻过程中,不同温度下制作的冻精活率差异极显著(P<0.01)。精液降至8℃、采用-70～-90℃的初冻温度,冷冻效果最好,不同剂型和剂量的冷冻效果差异不显著(P>0.05),本试验,30毫升块状和15毫升塑料安瓿冷冻后精子活率达0.39～0.40,复苏率达57％。     

驴精液冷冻保存的研究

试验以解冻后精子的活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率等几个重要评定指标为依据,筛选了几种驴冻精的冷冻稀释液配方,将其中较好的稀释液作为对照组,再分别进行细管冻精、颗粒冻精和添加不同剂量安钠咖的对比试验.结果表明:5号稀释液的冻后精子活力要显著高于其他4种稀释液(P0.05),精子活力达到0.31,顶体完整率达62.8%;细管冻精的活力要显著高于颗粒冻精(P0.05);在冷冻液中添加安钠咖2mg·mL-1能显著提高解冻后精子的活力(P0.05),使顶体的膨胀率降低9%.     

咖啡酸苯乙酯通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解猪精液常温保存氧化应激的作用机制

【目的】探究咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解氧化应激对猪精液的影响及其分子机制。【方法】选取8头成年（1—2岁）、健康状况良好长白种公猪进行鲜精采集,将质检合格的样品混池待用。试验设计如下：首先,在常温基础稀释液中分别添加0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 g·L^-1浓度的CAPE,将精液样品与各个浓度组依次混合后放置室温平衡,随即转入17 ℃电子恒温冰箱进行常温保存。全自动精子分析仪（CASA）测定1—5 d精子运动学参数（总活率与渐进性活力）,筛选出最佳适宜浓度为0.06 g·L^-1。其次,将0.06 g·L^-1 CAPE与400 μmol·L^-1的H₂O₂建立氧化胁迫模型,在第1、3、5天分别采用CASA测定精子总活率与渐进性活力,荧光探针技术评估质膜完整性与顶体完整性,抗氧化试剂盒检测过氧化氢酶（catalase,CAT）与超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,在第5 天利用实时荧光定量 PCR技术测定AMPK/FOXO3a信号通路下游靶向基因（AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT）及凋亡基因BAX的mRNA表达水平,蛋白免疫印记技术测定AMPK、p-AMPK蛋白表达。【结果】（1）浓度筛选试验中,0.06 g·L^-1的CAPE在保存第3 天显著提高精子的总活率并维持至第5天（P<0.05）,不仅如此,精子的渐进性活力在第1 天显著高于其他处理组（P<0.05）。（2）氧化胁迫试验中,H₂O₂处理组的精子质膜完整性、顶体完整性、总活率、渐进性活力、SOD与CAT活性在保存的第5天均极限显著低于空白组与CAPE+H₂O₂混合组（P<0.001）,而空白组与CAPE+H₂O₂混合组的总活率、顶体完整性、CAT与SOD活性不存在显著差异（P>0.05）。与CAPE+H₂O₂混合组相比,H₂O₂处理组AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT的mRNA表达水平显著降低（P<0.05）,BAX的表达水平显著升高（P<0.05）,而空白组与CAPE+H₂O₂混合组的AMPK、SOD1、CAT与BAX不存在显著差异（P>0.05）。在蛋白表达水平中,CAPE+H₂O₂混合组与H₂O₂组相比,AMPK、p-AMPK 与p-AMPK/AMPK比率显著提升（P <0.05）。【结论】在常温基础稀释液中添加0.06 g·L^-1CAPE可通过促进磷酸化AMPK的表达,诱导AMPK/FOXO3a信号下游抗氧化分子的转录,继而缓解H₂O₂介导的氧化危害对精液品质产生的影响,延长精液的保存时间,但CAPE保护精子氧化损伤更为深入的分子机制仍需作进一步探究。     

不同稀释液2—5℃保存鸡精液的研究

试验使用不同稀释液在2—5℃稀释保存鸡精液,测定了体外保存的精子活力和pH值变化。随保存时间的延长,不同稀释精液的精子活力和pH值下降幅度有差异。精子活力与pH值密切相关。精液稀释保存24小时的受精率以BPSE液最高(86.37％),与新鲜未稀释精液的受精率无显著差异;不同稀释液的受精蛋孵化率均无显著差异。用BPSE液加氧和减压保存的效果均无改进。Lake液以1:1(精液:稀释液,v/v)的倍数稀释,保存24小时后精子活力和pH值明显低于较高稀释倍数(1:2或1:3);保存24小时的受精率显著低于输精前加入BPSE液调整Lake液后的受精率。     

四种冷冻保护剂对鸡精液冷冻效果的比较

采用浓度为12%的甘油、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基甲酰胺(DMF)作为冷冻保护剂,分别添加到A液(乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、磷酸氢二钾、果糖、TES);B液(氯化镁、乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、果糖、EDTA-Na2)2种基础液中,进行常温保存和冷冻试验.常温保存结果发现:甘油对精子毒害作用最大,在A、B 2种基础液中精子生存指数分别为(8.40±0.114),(8.30±0.055)(P<0.01);其次是DMF,而DM-SO及DMA对精子的毒害作用最小.冷冻保存结果发现,以DMSO和DMA作为冷冻保护剂,精子解冻后活率优于DMF和甘油(P<0.01).     

中华蜜蜂精液的冷冻贮存技术(英文)

中华蜜蜂精液在液氮（－ １９６ ℃） 中贮存１２１ ｄ,精液与含有８％ 二甲亚砜的三羟基氨基甲烷缓冲稀释液以１∶１．５ 混合,不用平衡,在广口保温瓶中距液氮面２ ｃｍ 或５ ｃｍ 处预冻,在３５～３９ ℃水浴中解冻,可产生较好的解冻后活力比率（超过６０％ ）．当室温高于２０ ℃时（４ 月份）,样本必须于１３ ℃下平衡０．５ ｈ 左右,其解冻后活力比率可达３０％ ．春季采集并冷冻的样本,其解冻后活力不如冬季采集并冷冻的．用在液氮中贮存了１～１２１ ｄ 的精液分别以 ４～５ μ Ｌ的剂量给 ２４ 只处女王人工授精,４ 只开产但首先产的不是受精卵．解冻后的精液能够于１３ ℃下保存４６ ｈ．磺胺不能用于精子冷冻．     

氯、锌离子对猪精子钙通道和若干酶活调控作用的研究

为了研究了氯离子、锌离子等对猪精子钙通道的调控作用及其机理。将由健康公猪采得的精液经纱布过滤后分为三组,每组6个重复。第一组精液不加任何物质,第二三组精液分别加氯化钠液和硫酸锌液,混匀并静置2.5 h后,观测精子活力和精子、精清中离子含量与酶活。结果表明：（1）在猪精液中分别加适量的氯离子、锌离子,能刺激精清中钙离子向精子中转移,使得精子内钙离子含量显著地(P＜0.05)增加,精清中钙离子有一定程度的(P＞0.05)减少;（2）加锌或加氯离子,精子活力极显著(P＜0.01)地增强;（3）加锌离子组,精子内碱性磷酸酶、碳酸酐酶、腺苷酸环化酶活性极显著地(P＜0.01)提高,cAMP含量极显著地(P＜0.01)增多;精清内碱性磷酸酶、腺苷酸环化酶活性极显著地(P＜0.01)提高,cAMP含量显著地(P＜0.05)增多;（4）加氯离子组,精清内碱性磷酸酶、腺苷酸环化酶活性极显著地(P＜0.01)提高,精清内cAMP含量显著地(P＜0.05)增多;但精子内碳酸酐酶、腺苷酸环化酶活性和cAMP含量都无显著的(P＞0.05)变化。上述结果表明：猪精液加适量锌离子或氯离子,对精子细胞钙通道功能可能都有上调作用,并能提高精液中碱性磷酸酶、腺苷酸环化酶、碳酸酐酶活性,增加精液中cAMP含量,增强精子活力。     

季节变化对夏洛来种公牛精液品质的影响

从洛阳市白马寺种公牛站挑选年龄、健康状况相近且性欲旺盛的夏洛来种公牛5头,对其生产性能指标按春(3—5月)、夏(6—8月)、秋(9—11月)、冬(12—2月)4个季节连续五年的记录进行统计分析。结果表明:(1)采精量随季节变化不明显(P>0.05)。(2)原精活力:夏季(0.46±0.04)与春(0.70±0.01)、秋(0.65±1.01)、冬季(0.69±0.01)差异极显著(P<0.01)。(3)冻后活力:春、秋、冬季均极显著高于夏季(P<0.01),说明季节对夏洛来种公牛精液冻后活力具有明显影响。(4)精液密度:夏季与春、冬季差异极显著(P<0.01),夏季与秋季差异显著(P<0.05)。(5)精液冻后畸形率:夏季的夏洛来种公牛精子冻后畸形率极显著地高于其它季节(P<0.01)。(6)精液冻后的顶体完整率:夏季的夏洛来种公牛冻精顶体完整率极显著地低于冬、春季节(P<0.01),显著地低于秋季(P<0.05)。     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

复方中草药制剂对新西兰兔精液品质的影响

选取6～7月龄新西兰公兔12只,随机分为试验组和对照组,每组6只,研究以淫羊藿、菟丝子、熟地黄等为主要成分的复方中草药制剂对新西兰公兔精液品质的影响。结果表明:实验组公兔在饲喂该复方中草药制剂8～14和15～21d内的射精量、精子密度和活率等指标与对照组公兔精液品质相比差异极显著(P<0.01);停药后10d内,实验组和对照组公兔的射精量差异显著(P<0.05),精子密度和活率差异极显著(P<0.01);但是整个试验过程中精子畸形率两组间差异不显著。说明该复方中草药制剂可以用来改善公兔的精液品质,有利于生产实践中进一步发挥优良公兔的种用价值。