海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的流行病学研究

2000年5月～2003年11月,采用实地调查、取样及从各县水产技术推广站获取流行病学资料等方法,跟踪调查了浙江省沿海12个海水网箱养殖场大黄鱼弧菌病的发病情况,并对患病濒死大黄鱼进行了病原菌的分离及病理学观察。研究结果表明:该病发病率高、发病范围广,流行时间为6～10月份,7～8月份为高峰期,一般死亡率为30%～40%,最高可达80%以上。主要病原为溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)和哈氏弧菌(V harveyi),可引起大黄鱼肝、肾、脾等组织严重病变。发病原因主要是由于养殖密度过高、养殖环境条件恶化,夏季高温使得弧菌大量繁殖,在鱼体由于各种原因造成损伤时,诱发了疾病的爆发。     

应用药物筛选法治疗大黄鱼弧菌病

<正> 大黄鱼原为我国海洋渔业的四大主捕对象之一,70年代前平均年产量12万t,70年代末起,由于酷渔滥捕和环境污染,大黄鱼资源急剧下降,80年代后资源枯竭,昔日的大宗产品而今成为珍稀品种。 福建省闽东水产研究所科技人员经过多年的深入研究,取得大黄鱼人工繁殖成功,使大黄鱼的人工养殖成为现实。但是,随着大黄鱼社会化、规模化养殖的蓬勃发展,各种病虫害的发生也越来越频繁,尤其是具有发病时间长、发病率和死亡率高的弧菌病,成为大     

养殖大黄鱼病原弧菌多重PCR检测技术的建立和应用

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是浙江省养殖大黄鱼(Pseudnosciaena crocea)弧菌病的主要致病菌.本研究选择针对溶藻弧菌和副溶血弧菌的胶原酶基因,哈维氏弧菌的部分ToxR基因的特异性,优化设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,建立了一种检测致病性弧菌的多重PCR检测方法.经过琼脂糖凝胶电泳后的条带分析判断,可以在一个PCR管中同时成功地检测这3种病原细菌,含溶藻弧菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌3种致病弧菌核酸的阳性对照样品分别扩增出大小为737 hp、382 bp和271 bp的预期产物,其灵敏度是102～102 CFU/mL.将该方法应用于检测人工感染后的养殖大黄鱼病鱼肝脏和肾脏,结果在6份组织样本中,5份检出原始感染菌株,与API 20E鉴定结果相符;对弧菌病流行季节采集的未发病的16份养殖大黄鱼组织样本和16份水体样本进行抽检,结果在1份大黄鱼组织样本中检出哈维氏弧菌,7份水体样本中检出这3种弧菌中的1种或2种,鉴定结果与API 20E鉴定结果符合率为93.75%.说明该方法不仅可以检测发病鱼,还可以检测无病症带菌大黄鱼以及带菌水样,且说明海洋水体中存在着大黄鱼弧菌病的致病菌.结果说明,多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,可以缩短检测时间,降低检测成本,该方法的建立对养殖大黄鱼弧菌病的快速诊断和分子流行病学的调查具有重要意义.     

大黄鱼弧菌病的诊治

本文概述了大黄鱼弧菌病的症状、病理变化,病原菌的分离、鉴定以及应用药物敏感试验,筛选有效药物治疗大黄鱼的过程和效果。     

大黄鱼感染致病弧菌的检测及其病害的预测预警

为预防与控制大黄鱼溃疡病的发生,本研究利用特异多重PCR技术,对象山县养殖大黄鱼的3种致病弧菌感染情况进行了流行病学调查。每月在各定点网箱组随机采集大黄鱼肝、肾、脾、肌肉等组织进行感染情况的检测。结果显示,3种致病弧菌对大黄鱼的感染率存在一定的差异性。溶藻弧菌、哈维弧菌对大黄鱼的感染率整体高于副溶血弧菌;从感染组织分析,与肝脏、肾脏相比3种致病弧菌更易感染肌肉、脾脏;3种致病弧菌对不同鱼龄的大黄鱼感染率各不相同。研究还表明,3种致病弧菌在各个采样时间点均有感染,其中7—9月为弧菌感染高峰期,而台风后的感染率较台风前都有一定提高。另外,根据大黄鱼溃疡病发生与3种致病弧菌感染率关系的研究可知,在大黄鱼溃疡病暴发前几天,弧菌的感染率都会显示出较高数值。因此,可以通过3种致病弧菌对大黄鱼感染的分子流行病学调查与分析来预测预警病害的发生和流行。     

养殖大黄鱼低温弧菌病病原的研究

浙江沿海深水网箱养殖大黄鱼冬天发生大量死亡，从病鱼体内分离出致病力较强的细菌GYC0227。人工感染试验证实这株菌为大黄鱼的病原菌。对细菌进行了形态、生理生化特性的测定，并进行了16S rRNA分子鉴定。PCR扩增获得了GYC0227菌株大小约1．5kb的16S rDNA部分基因片段，产物经回收纯化，克隆到pMD18-T载体，转化大肠杆菌TG1，对阳性克隆子进行酶切及PCR鉴定，并测序，将测定的序列递交NCBI进行BLAET同源序列比对，与溶藻弧菌的标准菌株的16S rDNA具有96％的同源性。结合菌株的生理生化特性，GYCD227菌株属于溶藻弧菌。该菌适应于低温生长，生长温度范围为7—25℃，并测定了其对14种药物的敏感性。     

网箱饲养的大黄鱼病害防治

福建省闽东地区开展大黄鱼网箱养殖有10年了 ,至今全省大黄鱼养殖网箱已发展到2 0余万只 ,成为浅海养殖的龙头产业。近年来 ,由于网箱集中连片 ,布局不合理 ,海区水域环境有机质负荷急剧增大 ,呈现富营养化趋势 ,造成网箱饲养的大黄鱼大面积发病 ,且鱼病种类多、发病率高、危害大 ,对这一新兴的养殖业健康稳定发展起着严重的阻碍作用。因此 ,加强对大黄鱼病害防治技术的研究已刻不容缓。现就其主要病虫害的防治技术阐述如下。一、细菌性疾病1.弧菌病病原　　弧菌症状　　体表溃疡为其典型特征 ,随环境条件、感染途径的不同而有差别 ,并常有…     

海水养殖鱼类弧菌病的研究进展

综述了由鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、灿烂弧菌等弧菌引起的海水养殖鱼类弧菌病的典型症状、病原学、病理、检测技术以及防治等方面的研究进展。笔者对弧菌病的防治方法提出了一些有益的见解,另外对弧菌病的研究方向也进行了探讨和展望。     

养殖大黄鱼溶藻酸弧菌病病原菌传染途径的研究

从养殖大黄鱼病鱼的肝脏和脾脏内分离、纯化到溶藻酸弧菌，经回归感染试验证实它是该病的致病菌。使用法国生物一梅里埃公司生产的自动细菌鉴定仪(ATB)进行细菌鉴定，该菌株的生理生化特性符合溶藻酸弧菌的特性。研究结果表明，养殖大黄鱼溶藻酸弧菌病病原菌传染途径，主要是从水经伤口传染到体内，在试验条件下传染率为60％。病原菌在30℃时生长很快，20℃时生长慢，10℃时基本不生长，对氟苯尼考、四环素和乙酰螺旋霉素等7种药物敏感。     

常见病害防治方法

病名：大黄鱼弧菌病 病原：溶藻弧菌（Vibrio alg4nolyticus）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、哈维氏弧菌（Vibrio harveyl）。     

3种致病弧菌感染对大黄鱼血液生化指标的影响

溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、哈维弧菌Vibrio harveyi、副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus是引起大黄鱼溃疡病的3种主要致病菌。本研究将试验大黄鱼随机分成4组,分别腹腔注射0.2 ml的哈维弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和灭菌生理盐水,在感染20d中的不同时间采样,通过检测血清糖类、脂类及蛋白质代谢产物含量,血清蛋白质含量及酶活性,血清电解质含量等有关血液生化指标来比较3种致病弧菌对大黄鱼血液生化指标的影响。结果表明,大黄鱼血液生化指标的变化主要发生在感染后的1～4d,主要表现为总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、K、Fe显著升高(P<0.05),尿素氮、肌酐、血糖、胆固醇、Na、Cl显著降低(P<0.05),甘油三酯、P、Ca、Mg无显著变化(P>0.05),说明致病菌感染对大黄鱼组织器官的生理机能和代谢水平均产生了影响。反映鱼体受感染后从应激反应发生至生化指标变化主要出现在致病菌感染前期,提示血清生化指标的检测可以作为大黄鱼“溃疡病”早期感染的监测指标。     

大黄鱼几种暴发性疾病及防治方法新探

本文报道了网箱养殖大黄鱼的苗种时期一些暴发性疾病及防治新方法。大黄鱼主要有白点病等纤毛虫性疾病,(鱼师)本尼登虫病、弧菌病、肠炎病、烂尾烂嘴病、肝萎缩等暴发性疾病。本文着重介绍了上述几种病的量新防治方法。     

大黄鱼网箱养殖技术初探

近年来,随着大黄鱼人工工厂化育苗的成功,为大黄鱼人工养殖提供了大量苗种,大黄鱼海水网箱养殖在福建发展迅猛,已成为目前主要海水网箱养殖品种。 1998年作者在福建福安海域进行大黄鱼网箱养殖试验,经十个月精心管理,使尾均 125克的大黄鱼苗种养成尾均 460克的成鱼,并获得产量 9.56吨。现将试验结果报告如下： 　　一、材料与方法 　　1.养殖海区：海域水质良好无污染,水深 7～ 15米,水流往复流,潮流和缓,流速不超过 1米 /秒,透明度 30～ 100厘米,盐度 16‰～ 21‰;该海域四面环山,是一个良好的避风港湾。 　　2.渔排结构…     

不同环境条件对溶藻弧菌粘附大黄鱼肠粘液的影响

研究了不同环境条件下溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用。采用细菌计数法测定溶藻弧菌的粘附作用。粘附的细菌经SYBR GreenⅠ染色后在荧光显微镜下观察，用数码相机拍照后在电脑上计数。试验结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附量随菌浓度的升高而升高，并在1—1．5h内趋于饱和；粘附作用在15—30℃、pH偏酸时较强；盐度在5—35范围内对前肠粘液的粘附作用影响不明显，后肠粘液的粘附作用在此范围内随盐度增大而加强，在盐度为0时，溶藻弧菌对前、后肠粘液都无粘附作用；56℃热处理5min及60℃处理1h均能大幅减弱溶藻弧菌对两种肠粘液的粘附作用，表明溶藻弧菌表面的某些热敏结构在粘附作用中起着重要作用。根据以上结果，可以认为溶藻弧菌能够很好地粘附于大黄鱼肠粘液层，其粘附作用受温度、盐度、pH值等环境因子影响很大，溶藻弧菌表面的某些热敏结构可能在粘附过程中起着重要作用。研究结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用是可控制的，这对于鱼类养殖疾病的控制有一定的参考价值。     

氟苯尼考对大黄鱼的急性毒性及体外抑菌试验

采用倍比稀释法,研究氟苯尼考对哈氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌等8种大黄鱼(Pseudosciaena crocea)致病弧菌的体外抑菌效应;同时以棋盘微量稀释法进行五倍子、黄连、乌梅与氟苯尼考的联合用药试验,并研究了该药对养殖大黄鱼的急性毒性效应.结果表明,氟苯尼考对所选弧菌的最小抑菌浓度(MIC)在0.39～0.78 μg/mL,且其MBC值与MIC值相等或为对倍关系;联合用药显示,MIC值比单独使用时略有降低,FIC指数为1.00～0.75,其中以氟苯尼考和五倍子的协同作用最为显著;氟苯尼考口服给药对大黄鱼具有较高安全性,96 h LD50＞1 000 mg/kg,对大黄鱼的安全浓度SC＞100 mg/kg.     

应用间接荧光抗体技术快速检测花鲈病原菌——鳗弧菌

以花鲈（Lateolabrax japonicus)弧菌病的病原菌-鳗弧菌（Vibrio anguillarum)W-1为抗原，制备兔抗血清；利用异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔免疫球蛋白（FITC-IgG）为荧光标记二抗，并以罗丹明标记的牛血清白蛋白为背景染色，建立检测鳗弧菌的间接荧光抗体快速检测技术。应用该技术对人工感染后的花鲈组织（肌肉、鳃、肠、肾）样品和养殖水体样品进行了鳗弧菌检测，结果显示间接荧光抗体技术不仅可以用于诊断发病的感染花鲈，也可用于检测带菌状态或未发病的感染花鲈。     

海水网箱养殖大黄鱼诺卡氏菌病及防治

2003年9～11月,在浙江台州大陈岛海水网箱养殖大黄鱼出现了一种以体表和脾、肾等内脏出现白色或淡黄色结节为主要症状的疾病,该病危害严重,持续时间长,造成大批鱼死亡.但目前国内外还没有大黄鱼该病的报道,经细菌分离培养和光镜、电镜观察,均发现长或短的丝状分枝状杆菌.根据病鱼的症状及病原菌的基本生物学特性初步断定为诺卡氏菌病。     

海水养殖动物致病性(Pathogenicity)鳗弧菌(Vibro anguillarum)的研究综述

鳗弧菌（Vibrio anguillarum）广泛存在于沿岸海水、沉积物和海洋动物体中。是海水鱼、虾、贝类的一种常见的细菌性病原。随着海水养殖业的日益发展．致病性鳗弧菌对养殖动物的危害也越来越严重。主要对鳗弧菌的生物学性状、检测技术、鳗弧菌病症状和病理变化及海水养殖动物鳗弧菌病的防治作了简单回顾，并对鳗弧菌病的诊断、防治方法及其研究方向进行了探讨和展望。     

大黄鱼感染哈维氏弧菌后血液生化指标的变化及组织病理学观察

从患病大黄鱼病灶中分离出病原哈维氏弧菌,并人工回接感染大黄鱼,病鱼出现典型的皮肤溃疡症。测定大黄鱼血液各项指标发现,病鱼单核细胞、嗜中性粒细胞、血栓细胞百分率明显下降,而淋巴细胞百分率增加,均呈极显著差异(P<0.01)。患病大黄鱼总蛋白为(12.8±3.95)g/L,对照组鱼为(19.4±4.33)g/L,病鱼球蛋白、甘油三脂、血糖含量也明显低于对照组(P<0.01)。然而病鱼谷丙转氨酶为(37±5.11)IU/L,对照组为(28±5.54)IU/L;病鱼谷草转氨酶为(164±47.19)IU/L,对照组为(117±21.84)IU/L,均呈极显著差异(P<0.01)。研究结果说明,病鱼肝脏和肾脏组织受损。对患病大黄鱼进行病理组织学观察,结果发现病鱼病变组织头肾、肝出现不同程度的变性以及坏死。细胞超微病变观察发现,头肾肾小管上皮细胞变性、坏死。肝细胞胞浆内脂滴积累多。血清指标的测定可以作为大黄鱼哈维氏弧菌病细菌感染的指标。     

大黄鱼养殖疾病及其治疗

1 细菌性疾病主要是弧菌病,病原为副溶血弧菌（vibrio　para-hemolyticus）或溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）,它们均为弧菌科,弧菌属。两者症状和防治方法都比较相似。副溶血弧菌引起的症状为:患病初期,病鱼食欲下降,游动迟缓,平衡失调,体表皮肤有淤斑,鳃浅红色,腹部膨大,肛门红肿;解剖濒死病鱼发现肝、脾、肾、肠均充血,肝脏肿大呈土黄色,肠道内有黄色粘液。治疗:根据大黄鱼的发病情况,在饵料中掺入庆大霉素或土霉素、卡那霉素、丙氟哌酸（环丙沙星）等抗菌药物,用量为投饵量的1％～3％,连续投饵5天。待大黄鱼食欲