越橘离体茎尖包埋玻璃化超低温保存

为越橘种质资源保存提供新途径，试验研究了越橘组培苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存方法。结果显示适宜的条件包括：剥取顶芽茎尖（长1.0～1.5 mm），在（25±2）℃黑暗条件下预培养1 d；使用移液枪吸取茎尖与藻酸盐溶液，滴入氯化钙溶液中形成包埋球（直径4 mm）；包埋球在加载液中加载1.5 h（室温）；包埋球转入PVS2溶液处理4 h(0℃)；将装有包埋球的冷冻管投入液氮保存1 h；取出液氮中的冷冻管迅速转入37℃水浴锅中解冻1～2 min，在室温下取出包埋球，在卸载液中卸载20 min；卸载的茎尖在再生培养基上（25±2）℃黑暗培养5 d；之后在正常光照条件下培养30 d。所测试的8个越橘基因型平均再生率为57.9%，最高再生率为78.5%，最低为41.7%。     

宜兴百合脱毒技术

1997～2000年以宜兴百合为试材，对3种脱毒方法(茎尖培养、热处理结合茎尖培养、花药培养)进行研究。结果表明，珠芽经(50±1)℃热水处理40min，培养30d后，切取0.8～1.0mm茎尖培养的脱毒效果最好，脱毒率达100%；(38±1)℃热空气处理后切取茎尖培养也能提高脱毒效果。只有通过病毒鉴定的试管苗，方能用于生产。     

珍稀树种花榈木组培不同外植体的无菌繁殖体系构建

为构建花榈木组织培养的无菌繁殖体系,采用随机区组试验方法研究不同药剂组合对其籽苗茎段、幼苗茎段和叶片、成年植株茎段和嫩叶等外植体的消毒效果。结果表明:籽苗茎段以70%乙醇消毒30 s+0.1%升汞灭菌8 min+培养基中添加PPM 0.5 m L/L的消毒效果最好;幼苗外植体最佳采集时间为4月,茎段用70%乙醇浸泡30 s+(50 mg/L利福平+50 mg/L氯霉素)混合液浸泡30 min+0.1%升汞浸泡8 min消毒效果最好,叶片用70%乙醇浸泡30 s+(50 mg/L利福平+50 mg/L氯霉素)混合液浸泡30 min+0.1%升汞浸泡6 min消毒效果最好;成年植株叶片以4月采集较好,最佳消毒方法为70%乙醇浸泡30 s+(50 mg/L利福平+50 mg/L氯霉素)混合液浸泡30 min+0.1%升汞浸泡12 min,成年植株茎段尚未取得理想消毒效果。     

胡杨休眠茎尖的包埋玻璃化法冷冻保存研究

【目的】建立适合胡杨休眠茎尖的冷冻保存方法,对珍稀濒危植物胡杨种质资源进行保存。【方法】取深冬胡杨休眠茎尖,无菌处理后,包埋在3%褐藻酸钙胶球中,对包埋后的胶球进行蔗糖预培养,预培养后的胶球再用玻璃化保护液进行处理。研究预培养过程中蔗糖浓度、预培养时间及不同玻璃化保护液和处理时间对胡杨休眠茎尖存活率的影响。【结果】含有休眠茎尖的褐藻酸钙胶球在0.8 mol/L蔗糖溶液中预培养24 h,经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(4 000)+5%二甲基亚砜],于室温下处理30 min后再进行冷冻保存,可以获得较好的存活率。【结论】在优化的条件下,胡杨休眠茎尖存活率可高达77%,对保存后再生的幼芽进行遗传稳定性检测,未发现变异。采用液氮冷冻保存胡杨休眠茎尖是可行的。     

不同方法脱除菊花体内3种病毒效果的研究

【目的】探讨脱除菊花体内菊花B病毒(CVB)、黄瓜花叶病毒(CMV)及烟草花叶病毒(TMV)3种病毒的最佳方法。【方法】以菊花品种"墨菊"为材料,采用茎尖培养法、病毒唑结合茎尖培养法及热处理结合茎尖培养法对脱除CMV、CVB、TMV的效果进行研究,其中病毒唑结合茎尖培养法采用L9(34)正交试验,对茎尖长度、病毒唑质量浓度及处理时间进行筛选,热处理结合茎尖培养法中热处理采用昼夜变温并逐步升温的方式。【结果】茎尖培养法中以长度为0.4～0.5mm茎尖的脱毒效果最佳,茎尖成活率为66.7%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为61.9%,63.2%,55.0%;病毒唑结合茎尖培养法中以茎尖长度为0.4～0.5mm、病毒唑质量浓度为10mg/L、处理时间为42d组合的脱毒效果最佳,茎尖成活率为53.3%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为88.2%,86.7%,81.3%;热处理结合茎尖培养法中以试管苗热处理60d后,剥取长度为0.4～0.5mm的茎尖进行培养的脱毒效果最佳,茎尖成活率为56.7%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为100.0%,100.0%,94.1%。【结论】3种脱除菊花体内病毒的方法中,热处理结合茎尖培养法的脱毒效果最佳。     

马铃薯延薯9号茎尖脱毒及成苗分析

马铃薯传统种植方法易引起病毒积累和品种退化,目前国内外利用茎尖脱毒防止马铃薯退化,保证马铃薯高产、稳产已成为一种趋势。本文探究不同消毒方法、不同浓度激素配比的诱导培养基、不同茎尖大小、不同培养条件对茎尖成苗及脱毒对马铃薯品种延薯9号的影响。结果表明:自来水冲洗1～2 min+75%乙醇1 min+0.1%升汞5 min+无菌水冲洗2次,可达到理想的消毒效果;诱导培养基MS+1.0 mg·L~(-1) IAA+1.0 mg·L~(-1) GA_3+30 g·L~(-1)蔗糖+8 g·L~(-1)琼脂、茎尖分生组织0.3～0.4 mm、光照强度2 000 lx条件下,光照时长16 h·d~(-1),培养温度26℃时成苗效果最好。     

三尖杉愈伤组织诱导及其分化的初步研究

以三尖杉茎尖、嫩叶为外植体,应用正交设计法对愈伤组织诱导及其继代分化进行了研究。结果表明,不同外植体灭菌的难易程度相差较大,叶片较茎尖容易;叶片用体积分数为75%的酒精浸泡30-45 s,经体积分数为0.1%HgCl2溶液灭菌12 min,效果最好;茎尖则用体积分数为75%酒精浸泡1 min,经体积分数为0.1%HgCl2溶液灭菌12 min,效果较好;诱导叶片、茎尖愈伤组织的最佳培养基配方为MS+NAA 1.0 mg.L-1+2,4-D 1.0 mg.L-1;愈伤组织在继代培养基上均能进行分化,其中结构紧密的茎尖愈伤组织在MS+6-BA3.0 mg.L-1培养基上继代培养能诱导分化形成不定芽。     

甘蔗茎尖胚状体脱毒苗快繁技术研究

以茎尖为供体诱导胚状体分化成苗,完善与改进甘蔗脱毒健康种苗生产技术.以甘蔗新台糖22号为材料,比较茎尖胚状体、茎尖与腋芽3种分化成苗繁育方法在不同时期接种、不同激素水平下的组培苗增殖速度、苗素质及脱毒效果.结果表明,组培苗繁殖速度以茎尖胚状体分化苗最快,增殖5代后扩繁2 589倍,茎尖297倍,腋芽104倍,培养基以6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.01～0.1mg/L增殖效果最好;组培苗质量与繁殖速度相反.本试验中出现不正常生长的苗有白化苗、细弱小苗、玻璃化苗、疯长苗等4种,茎尖胚状体苗发生率1.77%,茎尖苗1.56%,腋芽苗0.31%;不同处理间组培苗生根及移栽成活率差异不显著,生根率茎尖胚状体苗75.3%、茎尖苗76.9%、腋芽苗76.6%,移栽成活率茎尖胚状体苗94.8%、茎尖苗95.4%、腋芽苗95.1%,生根培养基以NAA 7.5 mg/L+ABA2.5mg/L最好;去除甘蕉宿根矮化病(RSD)、花叶病方面,以茎尖胚状体苗最好,RSD去除率95%、花叶病去除率100%,茎尖苗RSD去除率70%、花叶病去除率75%,腋芽苗未能去除RSD、花叶病.说明应用茎尖胚性细胞再生植株,脱毒效果好,繁殖速度快,可克服门前脱毒苗生产中试管苗扩繁量小、成本高的难题.     

包埋玻璃化法超低温保存沙生柽柳休眠茎尖的研究

[目的]采用包埋玻璃化法,对沙生柽柳休眠茎尖成功地进行冷冻保存。[方法]将沙生柽柳休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理的时间对沙生柽柳休眠茎尖存活率的影响。[结果]含沙生柽柳茎尖的胶球在0.8mol/L蔗糖溶液中培养24h可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油＋45%（0.4mol/L）蔗糖＋10%聚乙二醇（分子量4000）＋5%二甲基亚砜]在25℃处理20min可以明显提高存活率,在优化条件下存活率可高达48.3%。[结论]蔗糖浓度和预培养时间是决定沙生柽柳茎尖存活率的关键因素。     

唐菖蒲籽球发育特点及其碳水化合物代谢变化

为探讨唐菖蒲籽球发育特点及其碳水化合物代谢与籽球生长发育的关系,以品种Rose Supreme和Advanced Red为试材,研究了籽球生长发育进程和蔗糖、淀粉、可溶性糖、还原糖质量比及淀粉酶活性变化规律。结果表明,唐菖蒲籽球生长发育可分为籽球形态建成和籽球快速膨大期2个阶段。籽球形态建成初期,碳水化合物代谢水平较低,15周时,籽球内可溶性糖和蔗糖质量比分别达50和30 mg/g左右,还原糖质量比仅为16 mg/g,淀粉酶活性为3 mg/(g.min)左右。籽球快速膨大期,碳水化合物代谢水平较高,籽球内可溶性糖、蔗糖、还原糖含量快速上升,在种植后第22~23周达到峰值,分别为90、46和30 mg/g左右,淀粉酶活性下降到0.7 mg/(g.min)左右,淀粉积累速度加快;而接近半枯期时碳水化合物代谢速度减慢。碳水化合物代谢2品种相近,但籽球发育进程不同。因此,唐菖蒲碳水化合物代谢水平的高低与籽球生长发育进程密切相关。     

尖叶石竹组织培养及快繁技术

以尖叶石竹(Dianthrus spiculifolius Schur)茎尖为植物材料,通过不同激素与MS培养基配比试验,筛选出尖叶石竹茎尖的愈伤组织诱导与植株再生的最适培养基,建立尖叶石竹植株再生体系。结果表明,外植体(茎尖)以酒精浸泡5s,次氯酸钠浸泡3min为宜;MS+2,4-D(2,4-二氯苯乙酸)2.5mg·L-1+6-BA(6-苄氨基嘌呤)1mg·L-1诱导愈伤组织的效果最好;用此培养基继续培养可得不定芽;不定芽接种于MS培养基15d可产生根系;株高约6cm生根苗移栽于河沙中成活率可达90%以上;在一个繁殖周期内尖叶石竹的增殖倍数约300倍。     

百合病毒脱除技术研究

为了探究生产脱毒百合种球的最佳途径,通过对5种百合进行茎尖切块大小、热处理方式以及病毒唑浓度三方面的试验,探茎尖培养、茎尖培养结合热处理、茎尖培养结合病毒唑、茎尖培养加热处理结合病毒唑4种方法对LVX,CMV,LSV 3种病毒的脱除效果。结果显示:综合考虑存活率和脱毒率,单纯的茎尖培养难以脱除病毒,3种方法结合脱毒的效果最好。即茎尖培养(0.5～0.8mm)加热处理(变温热处理)结合病毒唑(10mg/L)的方法脱除病毒的效果最好。     

越橘品种‘Koralle’茎尖繁殖体系建立

以越橘品种‘科利尔’(Vaccinium vitis-idaea L.‘Koralle’)茎尖为试材,对影响茎尖离体培养的取材时期、外植体的消毒、培养基和激素配比等因素进行研究,旨在建立茎尖快繁体系。结果表明:休眠期水培促萌的嫩芽污染率较低,最利于茎尖诱导成活。采用正交试验设计筛选出最佳灭菌处理为75%酒精30 s+0.1%升汞4 min+2%次氯酸钠2 min,污染率和成活率分别为5.64%和84.15%;适于茎尖增殖培养的培养基和激素组合为WPM(改良)+1.0 mg·L-1ZT+0.1 mg·L-1GA3,增殖系数、苗高分别为4.85和2.74 cm。     

马铃薯脱毒种薯扦插快繁技术研究

以陇薯3号马铃薯脱毒茎尖为试材,扦插生产微型薯,研究了植物生长调节剂、扦插深度、扦插基质、基质装填方法等因素对马铃薯茎尖扦插成活率和单株结薯数的影响.结果表明,用NAA 50 mg/L+IBA 50 mg/L浸泡茎尖基部15 min,扦插于装填1/3基质(蛭石+腐熟羊粪)的营养钵(每隔7 d添加一次基质,直至装满)中,扦插深度为茎尖的1/2,扦插成活率达85;以上,单株结薯8～10个.     

包埋玻璃化法超低温保存灰杨休眠茎尖的研究

采用包埋玻璃化法,对灰杨休眠茎尖进行了超低温保存研究。将灰杨休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中的蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理时间对灰杨休眠茎尖存活率的影响。结果表明:含灰杨茎尖的胶球在0.8 mol/L的蔗糖溶液中培养24 h,可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(分子量4 000)+5%二甲基亚砜]在25℃处理20 m in,可以显著提高其存活率,在优化条件下存活率可高达58.3%。     

华南地区唐菖蒲籽球规格对其商品种球繁育的影响

唐菖蒲(Gladiolus hybridus Hort.)的商品种球通过籽球培育途径生产.为探讨籽球大小对商品种球繁育的影响,采用3个不同规格的籽球进行繁种试验.结果表明,以周径2.1～3.0 cm的籽球繁育商品球效果较好,达到商品种球规格(周径＞6 cm)的种球占所收种球的50％以上,折合每667 m2可生产15 0...     

马铃薯品种辽薯6号茎尖脱毒及快繁技术研究

以马铃薯品种辽薯6号为试材,研究不同消毒方法、不同浓度激素配比的诱导培养基、不同茎尖大小、不同培养条件对茎尖脱毒和成苗效果的影响。结果表明:自来水冲洗1~2 min,0.05%次氯酸钠溶液浸泡10min后用无菌水冲洗3~5次,可达到理想的消毒效果;茎尖分生组织0.3~0.4 mm(带2个叶原基)、诱导培养基:"MS+1.0 mg/L BA+0.05 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂"、光照时长14 h/d、光照强度2 000 lx条件下培养温度28℃时成苗效果最好。     

青薯10号茎尖脱毒及快繁技术研究

以马铃薯品种青薯10号为试材,研究不同消毒方法、不同浓度激素配比的诱导培养基、不同茎尖大小、不同培养条件对茎尖脱毒和成苗效果的影响。结果表明:自来水冲洗1~2min,0.05%次氯酸钠溶液浸泡10min后用无菌水冲洗3~5次,可达到理想的消毒效果;茎尖分生组织0.3~0.4 mm(带2个叶原基)、诱导培养基:MS+1.0 mg/l BA+0.05 mg/l NAA+30g/l蔗糖+7g/l琼脂、光照时长14 h/d、光照强度2000lx条件下培养温度28℃时成苗效果最好。     

福农39甘蔗健康种苗繁育

以福农39甘蔗为材料,通过预处理、茎尖培养、增殖培养、生根培养、病毒检测、炼苗移栽,以期建立健康种苗繁育体系。结果表明:经50℃水浴15min,在温度为35℃、相对湿度为80%、光照强度为1 000lx的培养箱中培养约7d,甘蔗茎段侧芽萌发率达97%。在MS+2,4-D1.0 mg·L~(-1)+6-BA1.0 mg·L~(-1)+AC5.0g·L~(-1)培养基中,茎尖均生长良好。在MS+6-BA1.5mg·L~(-1)+KT0.5mg·L~(-1)继代培养基中,增殖系数为13.6。在1/2MS+NAA1.0mg·L~(-1)生根培养基中,生根率达100%。经检测,组培苗无花叶病和宿根矮化病发生。炼苗移栽后存活率达到86%。由此,建立起福农39甘蔗健康种苗繁育体系。     

甘薯脱毒苗的快繁技术

甘薯脱毒苗是目前利用茎尖培养防治植株病毒病最有效方法.我公司脱毒中心在2000年脱毒薯田间对比试验中,用甘薯茎尖培养并获得的植株增产16%～17.9%.脱毒甘薯苗对农业生产带来巨大经济效益和社会效益.其快繁技术要点如下: