人源抗菌肽LL-37对畜禽病原菌的抑菌活性及体外稳定性研究

测定LL-37对常见畜禽病原菌的抑菌活性及其体外稳定性,并与常用抗生素抑菌活性进行对比。结果表明,LL-37抗菌肽具有广谱的抑菌作用,能够有效抑制细菌生长,但在抑菌效果上弱于常用抗生素如阿莫西林等;LL-37的稳定性较差,在pH=8的碱性环境及消化酶作用的条件下,LL-37的抑菌效果大大降低。研究结果证明LL-37具有一定的抑菌效果,但其抑菌活性和稳定性还有待提高。     

抗菌肽BSN-37的抑菌活性及其稳定性分析

试验旨在研究抗菌肽BSN-37的抑菌活性和稳定性。采用微量倍比稀释法测定抗菌肽BSN-37的最小抑菌浓度(MIC),菌落计数法分析抗菌肽BSN-37对大肠杆菌CVCC1568的杀菌动力学特征,扩散法测定抗菌肽BSN-37的盐离子稳定性、酸碱稳定性、血清稳定性、胰酶稳定性、热稳定性、反复冻融稳定性、室温保持稳定性、药效保持时间稳定性。结果显示,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌(大肠杆菌和沙门氏菌)的MIC为1.5625～25μg/mL,对革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)的MIC为1.5625～12.5μg/mL,对真菌(白色念珠菌)没有活性;抗菌肽BSN-37可在90min内完全杀灭大肠杆菌CVCC1568;除了Fe2+和胰酶会影响抗菌肽BSN-37的抑菌活性外,在75～100℃的高温、150～250mmol/L高浓度盐离子(Na+、K+、Ca2+和Mg2+)、20%～25%饱和浓度的Cu2+、pH 4～10、20%～25%的血清、10～12次的反复冻融、10～12d室温保存等条件下仍能保持较好的抑菌活性,药效保持时间可达7.5d。本试验结果表明,抗菌肽BSN-37具有替代抗生素成为新抗菌药物的潜力,为抗菌肽BSN-37的临床应用提供了理论依据。     

抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定

为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。     

禽源烟曲霉菌和黄曲霉菌的分离鉴定及几种中药抑菌作用研究

【目的】对保定市临床真菌感染病鸭进行菌株分离鉴定,并筛选分离菌株的体外抑菌药物。【方法】通过形态学观察、PCR扩增、测序及动物回归试验对菌株进行鉴定,并采用微量稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)及体外药敏试验统计菌落数量和直径来探究石菖蒲、黄柏、决明子、苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英对烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)的体外抑菌活性。【结果】成功分离到烟曲霉菌和黄曲霉菌。动物回归试验结果显示,雏鸡出现与病鸭相似的症状,剖检可见肝脏长出灰白色结节,且病变组织出现肉芽肿病变,说明2种病原菌均可使雏鸡感染。烟曲霉菌MIC₈₀结果显示,石菖蒲、黄柏、决明子和苦参MIC₈₀分别为8、16、32和64μg/μL,辣蓼、白头翁和蒲公英均为128μg/μL;黄曲霉菌的MIC₈₀结果显示,石菖蒲、决明子和黄柏MIC₈₀分别为8、16和32μg/μL,苦参和辣蓼均为64μg/μL,白头翁和蒲公英均为128μg/μL。体外药敏试验结果显示,在石菖蒲浓度为16...     

蠔猪刺和乌樟水提物对禽源大肠埃希菌和沙门菌抑菌作用研究

为了解察蠔猪刺、乌樟水提物的体外抗菌活性及其与常用抗生素的联合抑菌效果.选择大肠埃希菌ATCC25922标准菌株及临床采样分离纯化的大肠埃希菌和沙门菌为检测菌,采用微量内汤稀释法和棋盘稀释法分别测定蠓猪刺和乌樟水提物的最小抑菌浓度(MIC)及其与常用抗生素的部分抑菌浓度指数(FIC).结果表明,蠔猪刺和乌樟与常用抗菌药物合用表现出协同或相加效应.     

千里光不同浓度乙醇提取物的体外抑菌作用研究

分别用4种不同浓度的乙醇溶液,通过过滤和乙醚萃取,然后进行冷冻干燥,对千里光粉末进行提取,制备千里光不同乙醇提取物冻干膏,再分别配成一定浓度的生理盐水溶液。用琼脂平板打洞法和试管稀释法,从最小抑菌浓度和最小杀菌浓度等方面,研究了千里光不同浓度乙醇提取物生理盐水溶液对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌ATCC638、肺炎链球菌5种病原菌体外抑菌作用。结果表明,所制备的提取物水溶液对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌、蜡样杆菌和金黄色葡萄球菌ATCC638没有明显的抑菌作用;对肺炎链球菌抑菌作用很明显,其中以千里光70％乙醇提取物的抑菌效果最好。     

复方板黄口服液对畜禽常见病原菌的体外抑菌作用研究

为了研究板黄口服液对畜禽常见病原菌的体外抑菌作用,研究通过体外试验观察药物对禽巴氏杆菌、鸡葡萄球菌、鸡白痢沙门杆菌、肺炎克雷伯菌、牛巴氏杆菌、牛大肠杆菌的抑菌效果。结果表明:板黄口服液对鸡葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)为125 mg/m L,对牛巴氏杆菌、禽巴氏杆菌、鸡白痢沙门杆菌、肺炎克雷伯菌、牛大肠杆菌的MIC均为250 mg/m L。说明板黄口服液对禽巴氏杆菌、鸡葡萄球菌、鸡白痢沙门杆菌、肺炎克雷伯菌、牛巴氏杆菌、牛大肠杆菌有很好的抑制作用。     

常用中草药对水产动物致病菌体外抑菌效果研究

试验旨在探讨黄柏、诃子、知母、苏木等常用中草药对水产动物致病菌的体外抑菌效果,为今后水产养殖细菌性疾病的防控提供参考。以美人鱼发光杆菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌临床分离株为试验菌株,以抑菌圈直径、最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）及联合抑菌指数（FICI）作为检测指标,研究常用中草药对水产病原菌的抑菌活性。采用水提法提取中草药有效成分,并通过琼脂平板打孔法测定中草药对水产致病菌抑菌圈,微量肉汤稀释法测定中草药MIC和MBC及微量肉汤棋盘稀释法测定联合抑菌指数（FICI）。结果显示,16种中草药对水产致病菌具有不同程度的抑菌作用。药敏试验结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种水产致病菌均具有抑菌效果,抑菌圈直径在10.5~29.0 mm之间,而4种病原菌对马齿苋均表现为耐药;MIC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MIC值为7.81~250.00 mg/mL;MBC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MBC值为7.81~500.00 mg/mL;联合抑菌试验结果显示,苏木与夏枯草、女贞子及青皮联用仅对美人鱼发光杆菌起到协同抑菌作用,对嗜水气单胞菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌均无抑菌作用,女贞子和青皮组合仅对哈维氏弧菌抑菌作用为相加作用,该组合在抑菌效果上对其他病原菌表现为无关或颉颃作用,其他药物组合在抑菌效果上对4种病原菌则表现为无关或颉颃作用;联合抑菌圈测定结果表明,中草药联合使用对4种病原菌抑菌作用不一。本试验结果表明常用中草药对水产动物致病菌具有一定程度的抑菌作用。     

广东五种常见中草药的体外抑菌试验

为测定鸭脚木皮、木蝴蝶、火炭母、岗梅根、倒扣草（鲜）这5种广东常见中草药的体外抑菌活性,采用琼脂平板打孔法、试管倍比稀释法和平板培养法,分别测定其对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的抑制效果.结果表明：大肠杆菌、链球菌对火炭母呈高度敏感,最小抑菌浓度（MIC）分别为1/40、1/80,最小杀菌浓度（MBC）分别为1/40、1/80;链球菌对鸭脚木皮、木蝴蝶均呈高度敏感,最小抑菌浓度（MIC）分别为1/20、1/10,最小杀菌浓度（MBC）分别为1/20、1/10;岗梅根、倒扣草（鲜）对六种菌均无抑制作用.     

迷迭香酸与抗菌药联合对含fosA3基因细菌抑菌效果的研究

试验旨在探讨迷迭香酸与抗菌药联合体外抗含fosA3耐药基因大肠杆菌的效果。本试验对临床分离的细菌进行鉴定,确定细菌所含耐药基因种类,用牛津杯法测定迷迭香酸的抑菌活性,平板涂布法测定迷迭香酸的杀菌活性,采用96孔反应板二倍微量稀释法分别检测迷迭香酸与抗菌药的最小抑菌浓度(MIC),再用微量棋盘稀释法测定迷迭香酸与抗菌药联合作用后的分级抑菌浓度指数(FICI)。结果显示,分离到含fosA3耐药基因大肠杆菌;迷迭香酸的MIC为640 μg/mL,迷迭香酸与环丙沙星、左旋氧氟沙星、黏杆菌素、加替沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢噻呋钠联合应用后其FICI≤0.5,有协同作用;与头孢曲松钠、诺氟沙星、痢菌净联合应用后0.5fosA3基因大肠杆菌有一定的抑菌活性和杀菌活性,其与部分抗菌药联合应用后,抗菌药体外抗菌活性显著增强。     

防治奶牛乳房炎中药组方的筛选及其抑菌杀菌作用研究

试验根据中兽医治疗奶牛乳房炎的辨证施治原则,筛选出抑制引起奶牛乳房炎主要病原菌（金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）的最佳中药组方,为其临床防治提供新的途径与方法。选用蒲公英、马齿苋、金银花、紫花地丁、赤芍、白芍、菊花、黄芩、漏芦、红花10味中药,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选抗菌中药组方中的最佳优选因素,再通过L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方配比;采用牛津杯法测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌效果;采用二倍稀释法和平板计数法分别测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选出了抗菌中药组方最佳优选因素：赤芍、黄芩、红花、菊花和白芍;L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方最佳配比为黄芩：赤芍：菊花：白芍：红花=3：3：3：1：2;新药组方对大肠杆菌的抑菌直径为17.39 mm,MIC和MBC分别为62.50、125.00 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为25.44 mm,MIC和MBC均为31.25 mg/mL。本研究成功筛选出了一种对奶牛乳房炎主要致病菌具有良好抑菌、杀菌作用的中药新配比组方。     

38种中草药对半滑舌鳎源哈维氏弧菌的抑杀效果比较分析

为明确中草药对半滑舌鳎源哈维氏弧菌(Vibrio harveryi)的抑杀效果,选择38种常用中草药,采用牛津杯打孔法测定了中草药对半滑舌鳎源哈维氏弧菌的敏感性。结果哈维氏弧菌对五倍子、诃子和黄连等9种中草药高度敏感,其抑菌圈直径为22～27 mm;对大黄、虎杖和秦皮等10种中草药敏感,其抑菌圈直径为12～19 mm;对其他中草药无抑菌作用。同时,采用微量二倍稀释法和液体涂布法测定了上述19种中草药对哈维氏弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:上述中草药对哈维氏弧菌均具有抑杀作用,其MIC和MBC分别为1.5～50 mg/mL和3.1～100 mg/mL,其中以五倍子的抑杀效果最好,对哈维氏弧菌的MIC为1.5 mg/mL,MBC为3.1 mg/mL。     

貂源铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性检测

采用微量稀释法测定了20种药物对临床分离的27株貂源铜绿假单胞菌的体外最小抑菌浓度(MIC),以美国临床检验标准委员会(CLSI)的临界浓度做为判断标准,判定了貂源铜绿假单胞菌对20种药物的耐药谱.结果显示:临床分离的菌株以耐药菌为主,且88.9％的菌株呈多重耐药,菌株耐药谱型达10种,对哌拉西林(74.1％)、强力霉素(70.4％)、卡那霉素和妥布霉素(48.1％)耐药性最为严重,对头孢菌素类(77.8％～100％)、氟喹诺酮类(88.9％～96.3％)、碳青霉烯类(88.9％～92.6％)、多肽类(96.3％)药物敏感率较高.     

3种动物专用抗菌药在鸡肠道沙门菌的流行病学临界值的建立

为建立3种动物专用抗菌药（氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星）在鸡肠道沙门菌的流行病学临界值（ECOFFs）,本研究选取2017年分离自广东省各地兽医站和养殖场的166株鸡肠道沙门菌,采用琼脂稀释法测定3种动物专用抗菌药的最小抑菌浓度（MIC）,利用非线性回归分析法及NRI（normalized resistance interpretation）和ECOFFinder程序分析处理MIC数据,并最终确定氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星对鸡肠道沙门菌的ECOFFs。结果显示,氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星对沙门菌的MIC范围分别为2~>512、4~>512和0.015~64 μg/mL;MIC₅₀和MIC₉₀分别为256和>512、16和>512、0.5和16 μg/mL。氟苯尼考和安普霉素的MIC值呈明显的单峰或双峰分布,且界限明显,而达氟沙星的MIC值出现了不连续多峰分布。综合3种分析方法,最终确定氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星的ECOFFs分别为16、16和0.125 μg/mL。本研究初步得到了3种药物在鸡肠道沙门菌的ECOFFs,为沙门菌耐药判定标准的制定提供了参考。     

16味蒙药对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O8的体外抑菌效果研究

为筛选对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌（S.aureus）和大肠杆菌O8（E.coli O₈）具有良好抑菌作用的蒙药,本试验采用牛津杯法测定金银花、黄连、何首乌、地榆、五味子、秦皮、穿心莲、甘草、蒲公英、夏枯草、虎杖、柴胡、黄柏、苦参、石榴皮、板蓝根16味蒙药的抑菌圈直径,微量稀释法和平板法测定蒙药的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）,棋盘法测定敏感蒙药对E.coli O8和S.aureus的协同指数（fractional inhibitory concentration index,FICI）。结果显示,黄柏、金银花、黄连、五味子、蒲公英、秦皮6味蒙药对S.aureus的抑菌圈直径为10.22~22.44 mm,MIC为15.6~250 mg/mL;五味子、金银花、黄连、秦皮4味蒙药对E.coli O8的抑菌圈直径为11.29~26.41 mm,MIC为15.6~500 mg/mL;黄柏与黄连联合用药对S.aureus的FICI为0.36,为协同作用,黄连与地榆联合用药对E.coli O8的FICI为0.48,为协同作用。综上所述,金银花、黄连、五味子、秦皮、蒲公英、黄柏6味蒙药对S.aureus综合抑菌效果达极敏或高敏;金银花、黄连、五味子、秦皮4味蒙药对E.coli O8综合抑菌效果达极敏或高敏,黄柏、黄连、秦皮在抑制S.aureus的组方中可优先考虑,黄连与地榆在抑制E.coli O8的组方中可优先考虑。     

Study on the Effect of the Rosemarinic Acid Combined with Antibacterial Agents on the Bacterial with Gene fosA3

This research was aimed to investigate the effect of rosemarinic acid combined with antibacterial agents against bacterial carrying gene fosA3 in vitro.Resistance gene types were determined by identification of bacteria isolated in clinics.Antibacterial activity and fungicidal activity of rosemarinic acid were tested by oxford cup method and spread-plate method.The minimal inhibiton concertration (MIC) of rosemarinic acid and antibacterial agents were tested through twice micro-dilution method,fractional inhibitory concentration index (FICI) of rosemarinic acid combined with antibacterial agents were determined by microdilution checkerboard techniques.Escheriohia coli carrying multidrug resistance gene fosA3 was isolated.The MIC of rosemarinic acid was 640 μg/mL,when application of rosemarinic acid combined with ciprofloxacin,levofloxacin,coly-mycin,gatifloxacin,amikacin,ceftazidime,ceftiofur sodium,FICI≤0.5,showed an additive effect;With ceftriaxone sodium,norfloxacin,mequindox,0.5fosA3 Escheriohia coli.Antibacterial activities of antibacterial agents against the fosfomycin resistance gene fosA3 Escherichia coli were enhanced significantly by rosemarinic acid.     

Epidemiological Cut-off Values (ECOFFs) of Salmonella from Chicken Intestinal Tract for Three Animal-specific Antibiotics

In order to establish epidemiological cut-off values (ECOFFs) of Salmonella for three animal-specific antibiotics (florfenicol,apramycin and danofloxacin) in Guangdong province.A total of 166 strains of Salmonella isolates from chicken intestinal tract from veterinary clinics and farms in Guangdong province in 2017 were recruited in this study,the minimum inhibitory concentrations (MIC) of florfenicol,apramycin and danofloxacin were determined in triplicate for each bacterial strain using the agar dilution method on Mueller-Hinton agar plates according to the CLSI reference method (CLSI-M100-S26).ECOFFs were calculated for the MIC data sets by application of nonlinear regression analysis,NRI(normalized resistance interpretation) and ECOFFinder software.MIC distribution of florfenicol,apramycin and danofloxacin against Salmonella from 2 to >512,4 to >512 and 0.015 to 64 μg/mL,respectively.MIC₅₀ and MIC₉₀ for apramycin,florfenicol and danofloxacin were 256 and >512,16 and >512,0.5 and 16 μg/mL,respectively.MIC distribution of apramycin and florfenicol presented obvious unimodal shape,while that of danofloxacin was a discontinuous multi-peak.The ECOFFs of florfenicol,apramycin and danofloxacin were recommended to be 16,16 and 0.125 μg/mL,respectively.In present study,the ECOFFs of Salmonella from chicken intestinal tract for apramycin,florfenicol and danofloxacin were determined,which provided scientific basis for resistance surveillance.