用3AB-ELISA鉴别猪口蹄疫病毒感染与疫苗免疫猪的研究

选择大肠埃希氏菌口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDiseaseVirus,FMDV)与3AB多肽非结构蛋白为主要抗原物质,选择过氧化氢-四甲基联苯胺为底物溶液,以A-G蛋白-辣根过氧化物酶为酶结合物质,对猪口蹄疫病毒感染和疫苗免疫猪进行3AB-ELISA鉴别试验。采用相关试验方法对采集自健康猪、人工感染FMDV的猪和FMD疫苗免疫猪的867份血清进行检测,3AB-ELISA对健康猪血清检测的特异性为97.63%,对疫苗免疫猪血清检测的特异性为98.90%,由此表明使用3AB-ELISA方法鉴别FMDV感染猪和疫苗免疫猪的效果佳,用3ABELISA来鉴别猪FMDV感染和疫苗免疫猪相较于VIAA-AGID检验法检测效率高,且操作过程以及方法更为简单,是有效的鉴别方法。     

3A蛋白间接ELISA试验检测猪口蹄疫感染抗体的研究

用表达的口蹄疫3A蛋白作为包被抗原，建立了间接ELISA试验，对口蹄疫病毒感染血清、免疫血清和其它非口蹄疫病毒血清进行了检测研究。结果表明，3A蛋白间接ELISA试验对口蹄疫具有较好的特异性，可以区分感染口蹄疫病毒的猪血清和疫苗免疫猪血清。     

区分动物疫苗免疫与病毒感染的口蹄疫非结构蛋白3AB鉴别诊断试剂盒的研制

以口蹄疫非结构蛋白3AB作为抗原的ELISA，适用于鉴别诊断感染和注苗动物。以3ABC基因片段为模板，经RT-PCR扩增得到3AB基因片段，与pET32a连接后，转化宿主菌BL21（DE3）plysS，IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE和Westemblot结果表明，表达的重组3AB蛋白，分子量约为50Ku，ELISA结果显示，重组3AB蛋白可用于猪、牛口蹄疫病毒感染与疫苗免疫抗体的鉴别诊断。     

免疫猪群口蹄疫非结构蛋白抗体与免疫剂量的关系

为了鉴别免疫猪群3ABC抗体阳性猪是免疫动物受到病毒感染引起的,还是疫苗中残留的非结构蛋白引起的,通过检测免疫动物体内的3ABC抗体和病毒感染情况,探讨3ABC抗体的出现与免疫剂量的关系。选取60日龄保育猪20头,分成A、B、C、D 4个组,分别注射猪口蹄疫O型灭活疫苗(OS/99株)1、2、4、6m L/头。每组猪分别在免疫前1 d以及免疫后3、7、14、30和60 d,采集血清和鼻咽拭子,使用口蹄疫3ABC间接ELISA检测试剂盒、口蹄疫多重RT-PCR检测试剂盒以及病毒分离试验,检测3ABC抗体和病毒感染情况,发现保育猪在低剂量(1 m L/头或2 m L/头)免疫后没有检测到非结构蛋白抗体,而高剂量(4 m L/头或6m L/头)免疫后出现非结构蛋白抗体阳性率升高,而且出现非结构蛋白抗体阳性的动物中没有检出病毒感染或病毒核酸。检测结果提示这些免疫猪群非结构蛋白抗体的形成与免疫剂量有关。     

用口蹄疫病毒非结构蛋白鉴别感染动物与疫苗免疫接种动物

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的发生于偶蹄类动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行。疫苗接种是防控口蹄疫暴发的有效措施之一,而要控制口蹄疫的流行,首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。以口蹄疫病毒非结构蛋白(NSPs)为抗原,分别利用口蹄疫病毒非结构蛋白2C、3B、3AB和3ABC作为鉴别诊断抗原,检测动物体内的NSPs抗体,可有效的区分感染动物与疫苗免疫接种动物。目前,许多实验室已展开此项工作的研究,这为防控口蹄疫打下了良好的基础。     

NSP—ELISA鉴别FMDV感染与免疫

利用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC多肽作为抗原，建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验(I—ELISA)。通过对336份正常牛血清、508份注射疫苗牛血清、60份人工感染牛血清和58份豚鼠免疫血清的检测，确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。试验证明，该方法简易、快速，灵敏度比VIAA—AGID高。     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。     

口蹄疫病毒非结构蛋白基因的克隆表达及免疫活性的研究

从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定.结果表明,3AB基因和3ABC基因可以在大肠埃希菌中高效表达,且表达产物能够与FMDV阳性血清产生免疫反应.进一步摸索重组蛋白的纯化条件,制备纯化蛋白,以纯化的表达产物为包被抗原进行间接ELISA检测,结果表明,重组蛋白具有特异的免疫学活性,能够用于鉴别FMDV感染动物血清和免疫动物血清.     

猪口蹄疫疫苗临床免疫效果评估

为了解2款口蹄疫疫苗免疫效果的差别,采用蔗糖密度梯度离心法测定疫苗抗原含量,并采用ELISA方法对猪群免疫前后进行相应抗体检测.结果表明,疫苗X的抗原含量显著高于疫苗Y.免疫疫苗X的母猪群,抗体阳性率及离散度变化均优于疫苗Y;仔猪免疫疫苗X后,抗体的阳性率快速升高并达到较高的效价,但是仔猪免疫疫苗Y后,抗体的阳性率出现...     

牛口蹄疫病毒VP2结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立

为建立牛口蹄疫(FMD)抗体的检测方法,本研究将口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因,通过pPROEXTM HTb表达载体在大肠杆菌DH5α中表达,获得大小为35ku的重组VP2蛋白(rVP2),western blot证实rVP2可与FMDV5种血清型的牛阳性血清发生特异性反应。以纯化复性的rVP2为抗原建立了FMDVrVP2间接ELISA方法。重复性试验证实批内、批间变异系数均小于10%。特异性交叉试验表明,该抗原不与常见的其他7种牛病阳性血清发生交叉反应。检测非免疫无口蹄疫国家牛阴性血清的特异性为100%;检测感染血清敏感性为97.3%;检测O-AsiaⅠ的二价苗免疫牛血清,与4种商品化试剂盒比较,其符合率分别为69.0%、95.0%、90.4%和86.8%。实验结果表明建立的ELISA方法可以用于口蹄疫感染和免疫抗体检测。     

猪口蹄疫疫苗的研究进展

口蹄疫是畜禽生产中最重要的经济传染病之一,严重影响国内和国际猪、牛、羊等偶蹄动物及其产品贸易并造成巨大的经济损失。口蹄疫的有效防控措施主要通过接种灭活疫苗进行预防,但灭活疫苗存在一定的不足,研究者仍不断开发新型疫苗。本文针对猪口蹄疫疫苗的最新研究进展作一综述。     

关于通过监测非结构蛋白抗体来评价口蹄疫疫苗纯度的研究进展

口蹄疫(Foot and Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的在偶蹄动物间传播的A类烈性传染病。大多数发展中国家一直都通过注射灭活疫苗的办法来控制该病的流行,如何评价和控制口蹄疫疫苗质量成为关键。OIE建议,通过监测接种至少两次口蹄疫疫苗的动物血清是否产生非结构蛋白抗体,来评价口蹄疫疫苗纯度,从而为兽用生物制品厂家提供一种可供参考的质控方法。总之,使用高效的新型疫苗并结合不同检测方法,给预防和消灭FMD带来希望。     

国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

不同方法检测猪O型口蹄疫疫苗抗体效价与攻毒保护相关性研究

为评价不同检测方法检测的口蹄疫疫苗抗体效价与免疫保护率的相关性,使用O型液相阻断ELISA、正向间接血凝试验、VP1结构蛋白抗体ELISA三种检测方法对免疫不同类型O型口蹄疫疫苗的60头猪进行血清抗体跟踪测定,免疫21 d后,分别用OZK/93和O/(XJ/10-11/MYA/98)毒株进行攻毒保护实验.数据统计和分析结果显示,0型液相阻断ELISA试验测定的抗体效价与攻毒保护率存在着极显著的正相关性(P＜0.01),相关系数为0.75;正向间接血凝试验测定的抗体效价以及VP1结构蛋白抗体ELISA法测定的S/P值与攻毒保护率之间均不存在线性相关关系(P＞0.05).试验表明,O型液相阻断ELISA抗体检测方法可作为田间猪O型口蹄疫疫苗免疫效果的评价方法.     

北疆地区3个规模化猪场猪O型口蹄疫抗体监测结果及免疫程序分析

为了查明北疆地区3个规模化猪场O型口蹄疫病毒的抗体阳性率及免疫合格率,并提出针对该病的最佳免疫程序,分别采集北疆地区3个规模化猪场的公猪、后备母猪、哺乳母猪、妊娠母猪、7日龄、14日龄、21日龄、30日龄、40日龄和55日龄仔猪等不同猪群的血液,分离血清,共计1 500份。采用间接ELISA方法检测其抗体。结果显示,3个规模化猪场不同猪群的口蹄疫抗体阳性率及免疫合格率之间差异显著(P≤0.05),口蹄疫总体抗体阳性率为86.4%。3个猪场口蹄疫抗体阳性率分别为90.3%、90.6%、78.4%,不同猪群的抗体阳性率分别为公猪100%、后备母猪100%、哺乳母猪100%、妊娠母猪100%、7日龄仔猪91.9%、14日龄仔猪92%、21日龄仔猪87.6%、30日龄仔猪83.4%、40日龄仔猪73.9%、55日龄仔猪58.2%。综合本研究结果及该猪场前期的免疫程序,建议仔猪的口蹄疫免疫程序为40日龄首次免疫,54日龄二次免疫。     

两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对常用的兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测方法,在检测猪血清抗体时的敏感性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的最佳试剂盒。采用上述两种阻断ELISA试剂盒对170份猪血清样品进行ELISA检测。结果表明,两种试剂盒的阳性检出率相差不大,阳性检出率分别为5. 29%和5. 88%。本试验表明:兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于口蹄疫血清学筛选性试验。     

口蹄疫病毒3D蛋白对DNA疫苗免疫效果的影响

将携带O型FMDV China99株P1-2A、部分2B及3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDV China99株3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素(PHA)刺激后的增殖活性，以间接ELISA方法检测血清FMDV特异抗体变化，并以微量中和试验检测中和抗体水平。结果表明，FMDDNA疫苗与3D蛋白共同免疫豚鼠后，抗体水平没有明显提高，攻毒后的保护率为25％。     

猪O型口蹄疫病毒重组结构蛋白的纯化及间接ELISA方法的建立

将猪O型口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus,FMDV）的VP0、VP1、VP3基因,通过SUMO融合表达载体在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达,获得大小为55、48和40 ku的融合蛋白,Western blotting检测结果表明,表达的蛋白质具有良好的生物学活性。采用亲和层析法纯化表达产物,分别以纯化的SUMO-VP0、SUMO-VP1、SUMO-VP3蛋白为抗原建立了FMDV的间接ELISA检测方法。200份田间血清样品的检测结果表明建立的SUMO-VP0-ELISA、SUMO-VP1-ELISA、SUMO-VP3-ELISA检测方法均具有良好的特异性和敏感性。     

不同抗体检测方法对猪口蹄疫疫苗临床免疫效果的评估

口蹄疫依然是危害我国养猪业的重大动物疫病之一,我国目前主要采用以免疫控制为主的策略防控猪的口蹄疫。口蹄疫临床免疫效果主要通过群体免疫抗体合格率进行评价,检测方法和试剂盒种类繁多。为了解猪口蹄疫0型、A型二价灭活疫苗的免疫效果及不同抗体检测方法（试剂盒）的差异,本试验选用临床常用的5个品牌的ELISA抗体检测试剂盒（液相阻断法、固相竞争法和间接法）及病毒中和试验共4种检测方法,检测猪场免疫的口蹄疫0型和A型疫苗的抗体,结果显示疫苗免疫效果良好,不同检测方法抗体阳性率变化趋势相似,说明目前各ELISA检测方法具有良好的适用性,同时,本文也分析了不同试剂盒检测结果存在差异的原因,为生产一线评估口蹄疫免疫效果提供数据参考。