甜樱桃砧木吉塞拉(Gisela)叶片再生体系研究

 以甜樱桃矮化砧木‘Gisela 5’和‘Gisela 6’的组培苗为试材，研究建立叶片的离体再生体系。结果表明，Gisela 6的再生能力高于Gisela 5；叶片正面接触培养基比背面接触培养基更有利于分化再生。用新梢顶端1~3节新展开的叶片制备外植体，分别接种在WPM+BA 7 mg/L+IBA 0.3 mg/L和WPM+BA 5 mg/L+IBA 0.5 mg/L的培养基上，黑暗处理15 d，Gisela 5的最高分化频率为75.1%，Gisela 6为100%。再生芽苗在三角瓶中生根容易，移人大田后生长正常。     

甜樱桃矮化砧木RUS-25离体叶片再生植株技术研究

利用甜樱桃矮化砧木RUS-25无菌试管苗的叶片作外植体,进行离体叶片再生植株研究,结果表明,培养条件、激素种类和配比均影响不定芽的再生,最适宜的激素配比为MS 6-BA2.0mg/L IBA0.5mg/L NAA0.2mg/L,不定芽诱导率为90.3%。     

甜樱桃砧木离体叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

叶片再生效率的高低直接影响目的基因转化的成功率,为建立稳定、高效的樱桃不定芽离体再生体系,以30～40d苗龄的甜樱桃砧木ZY-1的组培继代苗为试材,取上部幼嫩叶片或不含腋芽的茎段,分别从培养基生长调节剂配比、接种材料类型、叶片接种部位、接种方式以及培养条件等方面进行了不定芽再生技术研究。结果表明,培养基中添加7.0mg/L的6-BA与0.5～1.0mg/L的IBA配比时不定芽再生率和出芽数均较高,TDZ和NAA不适于诱导ZY-1叶片再生不定芽;接种继代苗茎段比叶片再生率高;接种叶片以选择嫩叶横切2刀、远轴面向下接触培养基的方式为好;叶片不同部位处理以带叶柄的基部叶块最易再生;叶片接种后在25℃室温条件下,先暗培养3周再照光,利于不定芽的再生。     

樱桃砧木叶片再生系统建立及抗菌肽基因转化

 以优良樱桃砧木新品系98-1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化，建立了高频率再生系统，并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0—2.0 mg/L、NAA 0.3—0.5 mg/L、GA 0.5 mg/L、AgNO3 5.0—10.0 mg/L。农杆菌及受体感受态是影响转化的关键，延迟筛选可提高叶片中转化细胞对卡那霉素的抗性而利于再生。PCR及Southern Blot检测为阳性，表明抗菌肽基因已整合到樱桃砧木98.1基因组。     

甜樱桃矮化砧木吉塞拉(Gisela)的离体叶片再生植株研究

用甜樱桃矮化砧木吉塞拉（Ｇｉｓｅｌａ）５号、７号（Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ ｘ Ｐ．ｃａｎｅｓｃｅｎｓ）无菌生根苗的叶片作为外植体，进行不定芽再生植株的研究。以ＷＰＭ＋ＢＡ ５～７ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１～１．０ｍｇ／Ｌ做培养基，不定芽再生率高达７０％；吉塞拉５号的再生率明显高于７号；培养基中高浓度的细胞分裂素抑制吉塞拉７号的不定芽再生。不定芽的增殖、生根、温室锻炼、大田移栽均已获得成功，同时观察了植株在大田的生长状况。该成果可用于樱桃转基因育种和多倍体植株培育的研究。     

秋水仙素诱导樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'获得六倍体再生植株

 以三倍体樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'（Prunus ceransus × P. canescens）的离体叶片为外植体,采用秋水仙素诱导处理再生出六倍体植株。将外植体首先在加有秋水仙素（50 mg. L-1）、生长素（IBA 0.5 mg. L-1）和细胞分裂素（BA 5.0 mg. L-1）的改良WPM液体培养基中培养5 d,再转移到不含秋水仙素（其它成分相同）的固体培养基上继续培养56 d,再生出形态变异明显的新梢。采用流式细胞仪鉴定染色体倍性,确定其为六倍体新梢。六倍体植株与三倍体的'吉塞拉6号'植株形态学上有明显差异。六倍体的试管苗已在大田移栽成活,并已成功高接在甜樱桃大树上。     

香玲核桃离体叶片再生体系的建立

为解决核桃种质资源的实验室保存及转基因研究等问题,研究了暗培养时间、叶片放置方式及不同浓度激素组合(BA、NAA、TDZ)对香玲核桃叶片再生的影响。试验结果表明,最适宜的暗培养时间为14d;近轴面放置效果最好;不同组合的激素配比对叶片再生不定芽能力不同,最适宜香玲核桃叶片再生的培养基为:MS+BA0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+TDZ1.0mg·L-1+sucrose30g·L-1+agar6g·L-1,在该培养基上,离体叶片不定芽再生率达60%,每叶片平均再生不定芽数超过1.1个。筛选得到了香玲核桃离体叶片的最适分化及生根培养基,对离体再生培养条件进行优化,为香玲核桃的种质资源保存及遗传转化研究奠定了基础。     

樱桃砧木的抗旱性研究

以山樱桃、莱阳矮樱桃、中国樱桃和考特砧木的2年生盆栽极佳甜樱桃为试材,进行干旱处理,测定干旱胁迫下叶片的相对含水量(RWC)、超氧化物酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量、光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和水分利用率(WUE)的变化,比较供试砧木的抗旱性。结果表明,山樱桃抗旱性最强,其次是考特,中国樱桃和莱阳矮樱桃抗旱性较差。     

无核君迁子离体叶片的植株再生

以"赞圆无核"君迁子组培苗叶片为试材,研究了基本培养基类型、植物生长调节物质浓度和暗期处理对离体叶片不定芽再生的影响,并获得了完整的再生植株。结果表明:最适宜的基本培养基为MS(1/2N),最佳的生长调节剂组合为5.0mg·L~(-1) ZT+0.10mg·L~(-1) IAA,其愈伤组织诱导率、不定芽形成率及平均出芽数分别达到99.1%、87.3%和5.4个;暗培养4周,再转为光下培养2周效果最佳;将叶片再生植物转入(1/2N)MS+0.5mg·L~(-1) ZT+0.01mg·L~(-1) IAA培养基中继代培养,以1/2MS+1.0mg·L~(-1) IAA+20g·L~(-1)蔗糖+7g·L~(-1)琼脂培养基诱导生根,生根率60.5%;生根苗大田移栽成活率63%。     

''''宫藤''''富士苹果叶片离体再生体系的建立

以'宫藤'富士苹果组培苗为试材,对叶片离体再生体系进行了研究.不同激素种类、浓度配比及叶片放置方式的试验结果表明:以MS为基本培养基添加5.0 mg/L 6-BA、1.0mg/LNAA叶片远轴面接触培养基(叶片反放)可得到最高的再生效率,为73.3%,6-BA对叶片再生效果要好于TD2,且提高NAA浓度并不能提高TDZ对再生频率和再生叶片平均再生芽数的影响.再生植株在生根诱导培养基(1/2 MS 1.0 mg/L IBA)、生根培养基(1/2 MS)上进行培养后移入营养土成活率可达100%.     

新红星苹果离体高效再生体系的建立

为了建立新红星苹果离体高效再生体系,以苹果品种新红星为试材,研究了不同基本培养基、激素质量浓度、外植体类型以及暗处理时间对其再生频率的影响。结果表明3种外植体的最适基本培养基均为MS培养基;叶片的再生效果最好,其次为黄化茎段,茎段最差,最高再生频率分别为74.1%,51.9%,42.6%;叶片和茎段的最佳暗处理时间为3周,黄化茎段的最佳暗处理时间为2周。新红星苹果再生的最佳外植体为叶片,最佳培养基为MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L,最佳暗处理时间为3周。     

珠美海棠叶片离体培养与植株再生

将珠美海棠试管苗叶片接种于附加NAA0.3 mg·L-1和不同体积分数的6-BA(1.0～6.0 mg·L-1)的MS培养基中进行离体培养,结果表明,6-BA为1.0～3.0 mg·L-1的处理芽再生率为6.7%～31.8%,而根的再生率为26.7%～28.3%.6-BA为4.5和6.0 mg·L-1处理芽再生率分别高...     

红将军苹果离体叶片高频再生体系研究

以中熟红富士品种红将军组培苗的叶片为试材,研究了离体叶片诱导再生不定芽过程中不同激素种类与组合、暗处理时间、取叶部位等因素对再生率的影响。结果表明,试管苗继代培养3～4代,当代培养25～30d,取顶部嫩叶3～4枚,剪除叶片边缘,将剪切的叶片中部以近轴面接触在最佳诱导分化培养基上:MS+TDZ1.0mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖30g/L,培养基pH值5.8,黑暗培养10d后,转入光照培养条件下,再生频率达100%,再生芽数平均4.6个。叶片再生不定芽分化后15～20d转接到苹果继代培养基MS+BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L上,当不定芽长度约2cm时再转接到1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+Ac0.5g/L+蔗糖2%的生根培养基上,光培养15d后,生根率可达86.0%。     

砂梨叶片再生不定梢的研究

研究了3个砂梨栽培品种翠冠、)青、西子绿离体叶片不定梢再生能力。翠冠再生能力最强,)青其次,而西子绿未能再生。一定时期的暗培养是翠冠叶片再生的必要条件。对翠冠再生过程不同时期的叶片样品进行扫描电子显微镜观察表明,在试验开始的10d后就出现了类分生组织结构,在2个月后观察到充分发育的梢,且最终形成的梢的数量远少于所形成的分生组织数量。     

桃叶片再生不定芽的研究

以桃栽培品种曙光、金童5号和甜桃王试管苗叶片为外植体,研究了基本培养基、植物生长调节剂种类及质量浓度组合、基因型和试管苗继代次数等因素对叶片再生的影响。结果表明,适宜暗培养的培养基为LP+1.5mg·L-1TDZ+0.15mg·L-1NAA;光培养基为LP+0.5mg·L-1TDZ+0.3mg·L-1KT+0.3mg·L-1NAA和LP+0.6mg·L-1TDZ+0.3mg·L-1KT+0.4mg·L-12,4-D;金童5号和曙光具有较强的再生能力,再生率分别为21.8%和14.5%;曙光和金童5号试管苗继代第1～11次叶片的再生能力与继代前3次愈伤组织相比形成率较高;曙光再生苗在培养基1/2MS+0.5mg·L-1NAA上生根率为100%,平均生根条数为7.9。     

不同培养条件对幸香草莓离体叶片再生的影响

以草莓品种幸香叶片为外植体,研究了叶龄、暗培养、不同颜色的滤光膜、AgNO3、不同激素配比等对叶片再生不定芽的影响,建立了高效再生体系。结果表明,5周的叶龄、暗培养5￣6周、附加AgNO31.0￣4.0mg/L利于不定芽的分化;不同颜色滤光膜对草莓分化不定芽的效应不同,红膜、黄膜、绿膜能显著提高再生频率,红膜处理能滤去紫外光、蓝紫光、绿光,再生频率达最大,蓝膜对再生频率无影响,紫膜对再生频率起显著抑制作用;MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.1mg/L暗培养6周最适于不定芽分化,再生频率达98.9%,平均再生不定芽3.8个。     

甜樱桃品种吉列玛叶片再生不定梢的研究

在基本培养基NN69或WPM上附加BA和低浓度的NAA，IAA，IBA作培养基，诱导甜樱桃品种吉列玛试管苗的叶片产生了不定梢。以WPM附加BA 3mg/L和IAA0．3mg/L的处理，不定梢再生率最高为33．3％。     

樱桃不同基因型再生植株的比较

对甜樱桃(PrunusaviumL.)、杂种优系F系(P.avium L.×P.pseudocerasusL.)和H系(P.cerasus L× P.pseu-docerasusL.)等不同基因型的离体再生植株方式进行了比较研究。结果表明,不同遗传背景的樱桃试材,其再生方式和途径存在差异。其中甜樱桃品种美早的离体叶片在WPM+6-BA2.0mg·L-1+IAA2.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1培养基上,不定芽再生率可达到90%,H10、萨米脱、F10、F8在6-BA(2～2.5mg·L-1)、IAA(1.0～2.0mg·L-1)的激素配比,也获得了76%、86%、80%、64%的再生率;杂种H10叶柄接种于改良MS+6-BA2.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1的培养基,可以得到40%的再生率,其他品种仅有H8的叶柄获得了少量的再生植株;杂种F10的幼嫩节间接种于LS+6-BA1.0mg·L-1+NAA2.0mg·L-1+CH100mg·L-1培养基,最高再生率为40%,6-BA(1～2mg·L-1)和NAA(1～2mg·L-1)配比,H8、H10的离体节间再生率最高分别为25%和30%;杂种H8整体根在MS+6-BA1.0mg·L-1+2,4-D2.0mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+NAA0.05mg·L-1的培养基上,再生率为96.7%,6-BA(0.5～2mg·L-1)和2,4-D(0.5～2.0mg·L-1)配比,H10、F8、F10离体根再生率分别为93.3%、96.7%和93.3%。