GnRH受体基因的结构和行为特征

在分析了人ＧｎＲＨ受体基因结构特征的基础上，对大鼠，小鼠和绵羊的ＧｎＲＨ受体基因进行描述。不同动物ＧｎＲＨ受体基因的结构特征基本相同。ＰＣＲ分析表明编码ＧｎＲＨ受体的基因位于染色体的特一位置。在ＧｎＲＨ受体基因上存在多个启动子和转录起始位点与多重调节序列，表明ＧｎＲＨ受体基因的活动是复杂的高度调节的。     

大豆黄酮肌注仔猪对垂体GnRH受体水平的影响

利用大豆黄酮肌内多次注射不同性别的仔猪（７日龄、雌雄各８只），以研究其对垂体ＧｎＲＨ受体的调节作用。结果表明，仔猪垂体ＧｎＲＨ受体水平上升。处理后母仔猪垂体ＧｎＲＨ受体最大结合量显著高于对照组（Ｐ〈０．０５）；公仔猪受体特异性结合量增加（Ｐ〉０．０５）。大豆黄酮处理对公、母仔猪ＧｎＲＨ受体特异性结合的解离常数无影响。     

鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素（ｃＧｎＲＨ－Ｉ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ）单独或与鸡ＬＨ（ｃＬＨ）协同处理短期（３ｈ）培养的鸡卵泡颗粒细胞，以观察鸡ＧｎＲＨ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明：随着卵泡的成熟，孕酮分泌量逐渐增加，到Ｆ１卵泡时增加最明显；在本实验所用细胞孕酮分泌都有明显促进作用，ＧｎＲＨ－Ⅱ使Ｆ２至Ｆ４卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加，而对Ｆ３卵泡颗粒细胞作用量明显，用鸡ＧｎＲＨ－Ⅱ的促进作用更明     

寒地粳稻外源基因转化途径研究初报

试验研究了寒地粳稻（ＤＳ２＃）成熟胚为受体的ＪＱ７００型基因枪转化，寒地粳稻（ＤＳ３＃）下胚轴愈伤悬浮细胞与细胞团为受体的农杆菌ＬＢＡ４４０４共培养转化，以及寒地粳稻（ＤＳ２ＧＧ＃）未受精胚囊为受体的花粉管通道等转化途径的初步尝试。结果首先在基因枪转化途径上得到突破——成功地将ＮＰＴⅡ基因、ＧＵＳ基因及抗虫基因（Ｂ．ｔ）的ＤＮＡ片段导入寒地粳稻（ＤＳ２＃）成熟胚。以ＧＵＳ基因组织化学法检测外源基因的表达，结果转化水稻细胞的短暂表达为阳性。经过一系列组织培养过程，诱导获得了绿色转基因水稻植株，取其叶片进行外源基因的稳定遗传与表达检测，结果ＧＵＳ基因组织化学检测亦为阳性，Ｏｌｙｍｐｕｓ倒置显微镜镜检结果——转基因水稻（ＤＳ２＃）植株叶片的叶脉等维管组织中ＧＵＳ基因表达更强烈。本文只是对转化途径进行研究，关于Ｂ．ｔ基因的整合与表达的检测工作正在进行中     

大豆黄酮对青年母猪GnRH,LH和抑制素分泌的影响

利用植物雌激素大豆黄酮静脉内注射正常间情期青年母猪（ＩＤ猪）和去卵巢青年母猪（ＯＶＥ猪），前者每公斤体重注射２ｍｇ大豆黄酮，后者每ｋｇ体射注射２０μｇ大豆黄酮，两者均以仅注射溶剂为对照，大豆黄酮处理后第２小时和第３小时ＩＤ猪血清ＧｎＲＨ峰值显著高于处理前和对照，但ＧｎＲＨ平均水平无显著差异，血清ＬＨ和抑制素浓度在大豆黄酮处理后均显著降低（Ｐ〈０．０１）。ＯＶＥ猪血清ＬＨ浓度在注射大豆黄酮后第１小时     

大豆黄酮对体外灌流垂体前叶组织促黄体素分泌的影响

对德国格丁根微型猪垂体前叶组织进行体外灌流培养，研究大豆黄酮对垂体促黄体素（ＬＨ）分泌的影响。结果表明，灌流２４ｈ后，大豆黄酮灌流组（Ⅰ组１００ｎｇ／ｍｌ；Ⅱ组２μｇ／ｍｌ）和雌二醇灌流组（Ⅲ组１００ｐｍｏｌ／Ｌ；Ⅳ组２００ｐｍｏｌ／Ｌ）ＬＨ分泌水平低于对照组（Ⅴ组空白对照；Ⅵ组助溶剂对照），雌激素抑制效应明显较强。灌流４８ｈ，Ⅰ、Ⅱ组ＬＨ峰值和平均水平均显著高于对照组，Ⅲ、Ⅳ组则明显低于对照组。促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）刺激后１～２ｈ，Ⅰ、Ⅱ组ＬＨ平均水平、峰值和脉冲频率均明显高于刺激前，而且显著高于对照组；Ⅲ、Ⅳ组却明显低于对照组和Ⅰ、Ⅱ组。大豆黄酮、雌激素对垂体体外ＬＨ分泌没有明显的剂量差异。无ＧｎＲＨ刺激时，大豆黄酮对离体垂体ＬＨ分泌表现为抑制效应，但抑制强度较弱；长期以大豆黄酮灌流培养垂体，或加以ＧｎＲＨ刺激，大豆黄酮对ＬＨ分泌具促进作用。     

遗传工程稻叶绿体psbA基因的克隆及结构分析

分别制备了遗传工程稻ＧＥＲ－１及其ＤＮＡ供体（慈利玉米）、ＤＮＡ受体（水稻湘早籼８号）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ），对三者之间的多种限制性内切酶酶切图谱比较表明，ＧＥＲ－１的ｃｐＤＮＡ基本与ＤＮＡ受体水稻一致。进一步克隆了ＣＥＦ－１的ｐｓｂＡ基因，并构建其酶切图谱、测定其３＇非翻译区（３＇ＵＴＲ）序列，初步认为该基因的序列结构与水稻相同，从而排除了ＧＥＲ－１的性状变异是由其ｐｓｂＡ基因发生变化所致     

GnRH主动免疫对绵羊血清睾酮含量的影响

用碳二亚胺将ＧｎＲＨ与牛血清白蛋白联结，加入弗氏完全佐剂主动免疫８只３月龄雄性绵羊，结果表明免疫后至少在１２０天内会引起睾丸发育停滞，第二性征抑制，血清睾酮水平降低，其含量与手术去势组动物差异不显著，免疫组绵羊生长发育与手术组无明显差异，达到了去势的效果。     

遗传工程稻叶绿体psbA基因的克隆及结构分析

分别制备了遗传工程稻ＧＥＲ－１及其ＤＮＡ供体（慈利玉米）、ＤＮＡ受体（水稻湘早籼８号）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ），对三者之间的多种限制性内切酶酶切图谱比较表明，ＧＥＲ－１的ｃｐＤＮＡ基本与ＤＮＡ受体水稻一致．进一步克隆了ＣＥＲ－１的ｐｓｂＡ基因，并构建其酶切图谱、测定其３′非翻译区（３′ＵＴＲ）序列，初步认为该基因的序列结构与水稻相同，从而排除了ＧＥＲ－１的性状变异是由其ｐｓｂＡ基因发生变化所致的可能．此外，对叶绿体ＤＮＡ的制备及酶切消化作了较深入的探讨     

GnRH及其类似物在动物繁殖中的应用

主要阐述ＧｎＲＨ及其类似物对动物生殖具有促进排卵、提高胚胎质量、治疗生殖疾病等调控作用,但对性腺活动也有抑制作用。     

羊多胎性状候选基因的研究进展

从骨形态发生蛋白15(BMP15)基因、生长分化因子9(GDF9)基因、视黄醇结合蛋白4(RBP4)基因、视黄酸受体γ(RARG)基因、催乳素(PRL)基因、催乳素受体(PRLR)基因、褪黑激素受体基因、促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRHR)基因方面综述了羊多胎性状候选基因的研究进展.     

广西沼泽型水牛垂体中促性腺激素释放激素的免疫组化定位及其受体基因表达

[目的]探讨广西沼泽型水牛垂体中促性腺激素释放激素（GnRH）的细胞定位以及是否存在促性腺激素释放激素受体（GnRH—R）。为GnRH-R的克隆及其序列分析提供理论依据。[方法]采用免疫组织化学ABC法,确定促性腺激素释放激素在垂体中的定位,结合图像分析系统检测GnRH在垂体中的含量,并利用RT—PCR技术扩增其受体基因片段。[结果]腺垂体远侧部中呈现较强的阳性GnRH免疫反应,阳性物质主要分布在胞质,胞核呈阴性。神经垂体中无阳性信号。同时,在垂体中扩增出大小为1008bp的GnRH—R基因片段。[结论]腺垂体远侧部边缘区中有大量GnRH及其受体存在,证实垂体前叶是下丘脑-垂体-性腺轴以及多个内分泌轴相互作用的重要部位。     

半番鸭与番鸭精巢组织差异表达转录组测序分析

【目的】研究半番鸭与番鸭精巢组织转录组差异表达基因,为进一步阐明半番鸭不育的遗传机制奠定理论基础。【方法】利用转录组测序方法对半番鸭和番鸭的精巢组织进行研究,筛选其差异表达基因,并对其功能进行注释和荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,QRT-PCR)验证。【结果】测序共获得43.84Gb Clean Data,组装后共获得193 535条Unigene。DESeq分析发现3 597个基因在两个鸭品种间差异表达,其中上调基因1 194个和下调基因2 403个,包括与生殖功能相关的基因,如成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、丝裂原活化蛋白激酶7(mitogen-activated protein kinase 7-like,partial,BMK)、生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2,GRB2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和肿瘤坏死因子受体超家族成员6(tumor necrosis factor receptor superfamily member 6,FAS)等。GO(gene Ontology)分析发现382个差异基因获得功能注释,其中97个基因涉及发育繁殖生物学过程。KEGG(kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析表明差异表达基因共富集到50条信号通路中,其中17个通路显著富集,包括丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路(mitogen-activated protein kinase signaling pathway,MAPK)、甘油酯代谢(glycerolipid metabolism)以及钙信号途径(calcium signaling pathway)信号通路等,与生殖功能密切相关的有促性腺激素释放激素信号通路(gonadotropin releasing hormone(Gn RH)signaling pathway)和MAPK信号转导通路。经QRT-PCR验证,差异基因表达变化模式与转录组测序结果一致,测序结果可靠。【结论】在转录组水平上筛选出半番鸭和番鸭精巢组织差异表达基因,揭示了Gn RH和MAPK信号通路在鸭的生殖活动中发挥了重要作用,为进一步探索半番鸭生殖系统的分化机理提供可靠的参考依据。     

番鸭就巢性状相关基因表达的cDNA-AFLP分析

【目的】寻找与番鸭就巢性状相关的表达基因,了解其就巢调控的分子机理。【方法】采用cDNA-AFLP (cDNA-amplified fragment length polymorphism)技术分析遗传背景相近的RF系白羽番鸭就巢个体和非就巢个体脑垂体基因表达差异。【结果】筛选到与就巢行为相关差异表达片段82条,选取其中15条进行测序。将测序结果在GenBank数据库进行BLAST比较和分析,发现 8个片段(53.3%)与已知基因具有较高同源性,涉及与繁殖性能紧密相关的下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG)上的功能基因,如GnRH基因、FSH基因,同时也分离到位于GH／IGF轴上的功能基因,即GH基因;以及在功能上属于信号传导、转录调控、代谢的调节基因,如超氧化物歧化酶基因、角蛋白关联蛋白基因、硫氰酸酶释放硫基转移酶基因等。2个片段与未知功能的基因有同源性,5个与数据库中现有的基因没有明显的相似性。随机选择3个片段进行RT-PCR验证,检测片段的表达模式与cDNA-AFLP结果一致。【结论】揭示番鸭不同就巢性状基因表达调控模式,进一步阐明番鸭就巢的分子机理。     

正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库构建及EST初步分析

【目的】构建猪淋巴细胞基因文库,初步绘制正常猪外周血淋巴细胞的基因表达谱,为进一步筛选免疫相关基因提供平台。【方法】以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与质粒载体连接后转化大肠杆菌,进一步扩增后,获得猪外周血淋巴细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合,并进行序列分析和注释。【结果】构建了正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库,获得库容量为1．2×10^6PFU／mL、重组率为93．3％、85％插入片段处于750～2000bp的高质量文库;随机测定1100条ESTs,经拼接和聚类,获得152条高表达的基因重叠群（Contigs）和619条低表达基因——单拷贝的EST（Singletons）;经序列比对分析,发现23．3％ESTs为与任何物种都没有匹配的新基因,75．9％ESTs为与猪没有匹配的新基因。用GO数据库对获得的EST进行基因功能分类和KEGG路径图分析,发现丝裂原活化蛋白激酶途径（Mitogenn—activated protein kinase,MAPK）、钙信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Toll—like受体信号通路、B细胞受体信号通路和T细胞受体信号通路的基因均有较高表达。【结论】大部分的猪外周血淋巴细胞基因尚未被分离和鉴定出来,但这些基因mRNA转录和表达丰度均较高,且在猪外周血淋巴细胞中起着非常重要的作用。     

正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库构建及EST初步分析

【目的】构建猪淋巴细胞基因文库,初步绘制正常猪外周血淋巴细胞的基因表达谱,为进一步筛选免疫相关基因提供平台。【方法】以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与质粒载体连接后转化大肠杆菌,进一步扩增后,获得猪外周血淋巴细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合,并进行序列分析和注释。【结果】构建了正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库,获得库容量为1.2×106 PFU/mL、重组率为93.3%、85%插入片段处于750～2000 bp的高质量文库;随机测定1100条ESTs,经拼接和聚类,获得152条高表达的基因重叠群（Contigs）和619条低表达基因——单拷贝的EST（Singletons）;经序列比对分析,发现23.3% ESTs为与任何物种都没有匹配的新基因,75.9% ESTs为与猪没有匹配的新基因。用GO数据库对获得的EST进行基因功能分类和KEGG路径图分析,发现丝裂原活化蛋白激酶途径（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）、钙信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Toll-like受体信号通路、B细胞受体信号通路和T细胞受体信号通路的基因均有较高表达。【结论】大部分的猪外周血淋巴细胞基因尚未被分离和鉴定出来,但这些基因mRNA转录和表达丰度均较高,且在猪外周血淋巴细胞中起着非常重要的作用。     

植物生长素受体蛋白研究现状

目的对大白菜生长素受体BrTIR1/AFBs基因家族进行系统分析,为大白菜BrTIR1/AFBs基因家族的功能挖掘和性状遗传改良提供理论依据。方法利用生物信息学方法,分析大白菜生长素受体基因家族的进化关系、编码蛋白、保守结构域和顺式作用元件。基于NCBI转录组测序(RNA-sep)数据,分析BrTIR1/AFBs基因家族在大白菜不同组织中的表达模式以及在根肿病入侵条件下的表达情况。结果从大白菜基因组数据库中鉴定得到10个BrTIR1/AFBs基因。拟南芥、茎瘤芥和大豆生长素受体基因家族多序列比对以及系统进化树分析结果显示：BrTIR1/AFBs基因分为6个亚家族(TIR1、AFB1、AFB2、AFB3、AFB4和AFB5),处于同一亚族的基因具有相似的结构。染色体定位结果显示：BrTIR1/AFBs基因家族成员分布在除Chr5、Chr6和Chr10号染色体之外的7条染色体上,呈现出不均匀分布。顺式作用元件分析结果显示：所有的BrTIR1/AFBs基因家族成员都含有响应生长素、防御和逆境胁迫的作用元件,预示着这些基因可能参与相应的生物学过程。组织表达模式分析发现：10个BrTIR1/AFBs基因的转录本在6个组织中被检测到,且不同组织中的表达量存在明显差异。大白菜BrTIR1/AFBs基因家族成员在根肿病病原菌入侵时表达量发生显著变化。结论大白菜生长素受体BrTIR1/AFBs基因家族成员具有保守的基因结构和功能结构域,在大白菜不同组织中发挥着特异的功能,且在抵御病害和干旱等逆境中发挥重要作用。     

人促性腺激素释放激素及其转运肽基因的克隆、表达与纯化

研究根据GenBank中已发表的人GnRH2基因mRNA序列以及转运肽基因核苷酸序列,借助Oli-go4.1设计了一对寡核苷酸引物,以引物3'末端的短互补序列退火形成小段双链,从而互为模板和引物,通过引导合成长达90bp的目的序列GnRH/TRS。将其克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pYC1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC1,进一步的序列分析确认其中GnRH/TRS序列的正确性。pYC1经BamHI和EcoRI酶切得到GnRH/TRS片段,然后将此片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组质粒pYC2。经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC2,并转化到大肠杆菌BL21(ED3)plyS实现原核表达。IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的约28ku的融合蛋白,光密度扫描对表达产物进行初步定量,表达产物约占菌体总蛋白的33.3%,表达产物经GlutathioneSepharose4B层析纯化后,得到了纯度较高的GST-GnRH/TRS融合蛋白,为进一步科研和实际应用奠定基础。     

Cloning, sequencing, and expression of the gene coding for the human platelet alpha 2-adrenergic receptor

The gene for the human platelet alpha 2-adrenergic receptor has been cloned with oligonucleotides corresponding to the partial amino acid sequence of the purified receptor. The identity of this gene has been confirmed by the binding of alpha 2-adrenergic ligands to the cloned receptor expressed in Xenopus laevis oocytes. The deduced amino acid sequence is most similar to the recently cloned human beta 2- and beta 1-adrenergic receptors; however, similarities to the muscarinic cholinergic receptors are also evident. Two related genes have been identified by low stringency Southern blot analysis. These genes may represent additional alpha 2-adrenergic receptor subtypes.