MC4R基因表达及其与鸡屠宰性状的相关分析

根据鸡MC4R mRNA和看家基因β-actin mRNA序列,分别设计1对引物,以半定量RT-PCR法研究不同品种鸡肾上腺中MC4R基因mRNA表达水平,并分析了其与屠宰性状间的相关关系。结果表明,京海黄鸡公鸡MC4R基因在肾上腺中的表达水平显著高于尤溪麻鸡公鸡(P<0.05);京海黄鸡公鸡的胴体重、胸肌重、腿肌重与MC4R基因在肾上腺中表达水平存在极显著相关(P<0.01);尤溪麻鸡公鸡的胴体重与MC4R基因在肾上腺中表达水平存在极显著相关(P<0.01),胸肌重、腿肌重与MC4R基因在肾上腺中表达水平存在显著相关(P<0.05)。     

京海黄鸡MC4R基因多态性及其与部分屠体性状的关联分析

以140只京海黄鸡个体为研究对象,采用PCR-SSCP和克隆测序技术分析了鸡MC4R基因的多态性。结果表明:MC4R基因第662位发生G→C突变,第733~734位间插入1个C碱基;χ2检验结果表明,实验中发现的多态位点均处于Hardy-Weinberg不平衡状态;GLM分析结果显示,AB型个体腿肌重极显著高于BB型(P0.01),DD型个体胴体重和半净膛重显著高于CD型(P0.05),AA/DD组合型个体具有高于其他基因型的趋势。因此推测,MC4R基因可以作为影响和控制鸡屠体性状的候选基因。     

牛MC4R基因多态性与体尺性状的相关分析

以西门塔尔牛、日本和牛、皖东黄牛、皖南牛和广丰牛为试验对象,利用PCR-RLFP技术检测牛MC4R基因1069C〉G的遗传突变,并采用SPSS软件分析MC4R基因的遗传多态性与牛体尺性状的关系。结果表明,该位点所对应不同基因型的个体,其体斜长在西门塔尔牛群体中存在显著差异,体斜长和胸围在皖东黄牛群体中存在显著差异。因此可以把MC4R基因作为肉牛生长发育的辅助选择的分子标记。     

MC3R和MC4R基因多态性位点与犬体型性状的关系

为了探讨犬MC3R和MC4R基因多态性与体质量等体型性状的关系,本研究利用PCR-RFLP、AS-PCR方法对已培育的北方实验用犬MC3R基因A167T,MC4R基因T101N多态性位点与体质量、体长、身高、胸围等体型指标的关系进行分析.结果显示,这2个多态性位点的基因型与犬的体质量、胸围和体质量指数(BMI)等呈显著性相关.另外,方差分析显示MC3R和MC4R合并基因型对体质量、胸围和体质量指数影响显著,MC3R和MC4R基因对体型性状的影响有协同作用.结果表明,MC3R、MC4R基因可以作为犬体型性状的候选基因,可选不同MC3R和MC4R合并基因型的犬用于培育小型或大型实验用犬.     

鹅MC4R基因RFLP及其与胴体和羽绒性状的关联性

本研究利用皖西白鹅为父本与四川白鹅（母本）进行杂交,屠宰测定了123只杂种鹅的胴体性状、羽绒性状和肉质性状,运用因子分析从这些性状中提取了12个公共因子;采用4种内切酶Hinf I、Ear I、PstⅠ和PvuⅡ检测了鹅黑素皮质素受体-4（MC4R）基因编码区的RFLP,并分析了RFLP与鹅重要经济性状之间的关联性。结果显示,试验鹅群中仅Hinf I酶切MC4R基因编码区存在RFLP,酶切得到HH和Hh 2种基因型,其1对等位基因H和h的频率分别为0.890 2和0.109 8。分析不同基因型与鹅胴体和羽绒性状之关联性表明,HH型与鹅屠体重、半（全）净膛重、肝脏重、心脏重、肌胃率、腹脂率、胸肌失水率以及绒比重具有显著的相关性,基因型效应对群体均数的贡献率在&#177;5%之间;当MC4R基因突变后,Hh型的这种效应未能达到显著水平,但却与产脂力（3.314%）和脂肪酸品质（1.218%）（P〈0.05）2个公共因子存在显著的相关性。     

鸡MC3R基因多态性及其与屠体和肉质性状的相关性

以四川大恒家禽育种有限公司和四川省畜牧科学研究院培育的5个新品系纯系和3个杂交系鸡群为试验材料,对MC3R基因进行PCR扩增,采用PCR-SSCP技术结合测序分析了MC3R基因在上述鸡群中的多态性.结果表明8个鸡群中存在A 1 424 G的突变.经过基因型与屠体性状的关联分析得知各基因型除与半净膛率(SEP)和腿肌率(LMP)无显著影响(P＞0.05)外,对其它屠体性状则有显著(P＜0.05)和极显著影响(P＜0.01);与肉质性状相关分析结果显示,1 424位点仅对粗蛋白(CP)含量和肌内脂肪含量(IMF)影响显著(P＜0.05).     

黔北麻羊MC4R基因多态性及其与生长性状的关联分析

【目的】探究黔北麻羊黑素皮质素受体-4（melanocortin receptor-4,MC4R）基因多态性及其与生长性状的关联性,为黔北麻羊的选种选育提供理论依据。【方法】选取196只6月龄黔北麻羊,利用DNA混合池结合Sanger测序筛选MC4R基因单核苷酸多态性（SNP）位点,并采用SPSS 22.0软件中的一般线性模型（GLM）对MC4R基因SNP位点与黔北麻羊生长性状进行关联分析。【结果】在黔北麻羊MC4R基因中发现4个SNPs位点：g.59345469 C>A和g.59346773 T>C位点分别位于5'-和3'-端非编码区（UTR）;g.59345871 A>C位点突变导致第37位天冬氨酸（Asp）变为丙氨酸（Ala）,引起RNA二级结构及蛋白质二级结构、三级结构发生明显改变;g.59346263 A>G位点突变导致第168位异亮氨酸（Ile）变为缬氨酸（Val）,对RNA二级结构和蛋白质二级结构有明显影响。关联分析结果显示,g.59345469 C>A位点对黔北麻羊体重、胸围和管围均有显著影响（P<0.05）;g.59345871 A>C位点对黔北麻羊体重、体高、管围和胸围均有显著影响（P<0.05）;g.59346263 A>G位点对黔北麻羊体高、体重和胸围均有显著影响（P<0.05）;g.59346773 T>C位点对黔北麻羊体重和胸围均有显著影响（P<0.05）。4个SNPs位点联合共检测到9种单倍型和21种双倍型,其联合对黔北麻羊体重、体高、胸围和管围均产生显著遗传效应（P<0.05）,纯合双倍型H5H5（AAAAGGCC）个体的生长性状优于其他双倍型。【结论】黔北麻羊MC4R基因存在4个SNPs位点,与黔北麻羊体重和胸围均存在显著关联,可作为黔北麻羊体重和胸围的遗传标记用于分子育种。     

鸡IGF-Ⅰ基因单核苷酸多态性及其与屠体性状关系的研究

本研究采用PCR-RFLP技术,对438只黄羽矮小型肉鸡的胰岛素样生长因子-Ⅰ基因(IGF-Ⅰ)的5′端进行遗传多态性研究,发现该区域的PCR扩增产物经Hinf Ⅰ酶切后出现GG、GT和TT 3种基因型。经χ2检验,群体在该位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。方差分析结果显示,性别对9个性状(活体重、屠体重、皮脂厚、半净膛、全净膛、胸肌重、腿肌重、腹脂重、腹脂率)有极显著影响(P<0.01),对肌间脂肪含量有显著影响(P<0.05)。家系效应在8个性状上(活体重、屠体重、半净膛、全净膛、胸肌重、腿肌重、腹脂重、腹脂率)达到极显著水平(P<0.01);而基因型效应只在腹脂率上达到显著水平(P<0.05),腹脂重没有达到显著水平(P=0.0669)。不同基因型的最小二乘均值间多重比较结果发现,TT型的腹脂重和腹脂率均显著低于GT型(P<0.05),而GG型和GT、TT型的差异不显著(P>0.05)。     

比格犬MC3R和MC4R基因多态性与体重相关性的研究

犬体重是重要的经济性状,为探讨犬MC3R和MC4R基因多态性与犬体重性状的关系,本研究利用PCR-R FLP、AS-PCR方法对120只比格犬MC4R基因T101N位点,MC3R基因的A167T位点,G291A位点的不同基因型与体重的关系进行最小二乘分析、结果表明:对于MC4R基因NN基因型的比格犬体重显著高于其他2个基因型(P<0.05),而MC3R基因中TT和AA基因型的比格犬体重则显著高于其他2个基因型(P<0.05)。在MC4R基因型一致时,NNTT和NNAA基因型的犬体重显著高于其他合并基因型(P<0.01),NNTTAA合并基因型的犬体重最高,MMAAGG基因型犬体重最低。实验结果表明,MC3R和MC4R基因可以作为犬体型的候选基因,可筛选MC3R和MC4R合并基因型的犬用于培育不同体重的犬。     

MC4R基因研究进展

黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)是下丘脑腹内侧核分泌的一类肽类物质,为黑素皮质素受体家族5个亚型(MC1-5R)之一。在哺乳动物中,MC4R具有介导瘦蛋白(leptin)的功能,是一个调节能量平衡与能量动态平衡的重要信号分子,可与其内源性配体黑素皮质素激素(melanocortin,MC)或刺鼠色蛋白(agouti protein,agouti蛋白)和agouti相关蛋白(agouti related protein,AGRP)相结合,从而在控制食欲和体重稳态中起关键作用。因此,MC4R在人类肥胖研究中作为重要的调节因子倍受关注。最近有研究表明:MC4R的1232位点的G→A的突变与绵羊背膘厚度间存在关联,AG和AA型较GG型具有较高的背膘厚度。     

藏猪黑素皮质激素受体-4基因TaqI多态性分析

藏猪是我国青藏高原特有的小型原始地方猪种,文中采用PCR-RFLP技术分析了藏猪黑素皮质激素受体-4(MC4R)基因TaqI酶切位点多态性。结果表明:藏猪MC4R基因TaqI酶切位点优势基因型为11,基因型频率达93.56%,与国内梅山猪、二花脸猪、民猪和金华猪等较接近,与汉普夏、大白、杜洛克等外种猪差别较大。     

鸡黑素皮质素受体-4反向激动剂细胞筛选模型的建立

本试验旨在建立体外鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R)反向激动剂的细胞筛选模型,为从中草药中筛选出能与cMC4R作用且存在活性的中药成分提供一些基础性的研究。将成功构建的cMC4R真核表达质粒cMC4R-pcDNA3.1(+)-myc与报告基因质粒pGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]按1:5的比例共转染到CHO-K1细胞,两周后经有限稀释法获得单克隆;将获得的单克隆分别用CRE激活剂Forskolin和MC4R激动剂NDP-MSH作用6 h,挑选萤火虫荧光素酶的相对表达量最高的单克隆作为阳性细胞株;提取阳性细胞总RNA,RT-PCR检测阳性细胞内cMC4R基因、荧光素酶报告基因的转录水平;对MC4R激动剂NDP-MSH的终浓度、NDP-MSH孵育时间及溶剂DMSO的终浓度进行优化,应用Z'因子对筛选方法进行评估。结果显示,获得了5个单克隆(A2、F7、F8、F9、H10),其中单克隆A2的萤火虫荧光素酶的相对表达量最高,将其作为阳性细胞株;RT-PCR在预期位置扩增出大小分别为996和1 653 bp的两条目的条带;激动剂NDP-MSH终浓度为10^-9 mol/L、NDP-MSH孵育时间为8 h、溶剂DMSO终浓度小于2%时,筛选模型Z'因子为0.82。结果表明,本试验所建立的筛选方法可靠、稳定,细胞筛选模型可用于cMC4R反向激动剂的筛选,为进一步从中药中筛选出有效物质奠定了基础。     

鸡脂滴包被蛋白基因内含子6多态性与胴体及脂肪性状的相关性研究

试验采用PCR-RFLP方法检测脂滴包被蛋白(perilipin,PLIN)基因内含子6在济宁百日鸡、莱芜黑鸡等4个地方鸡种和1个培育品系中的遗传多态性,分析了多态位点不同基因型与鸡胴体及脂肪性状的相关性。结果发现,在5个供试群体中检测到1个多态位点,测序证实为新发现的鸡PLIN基因2 467 bp处G→A突变,该突变位点在供试群体中检测到3种基因型:A1A1、A1A2和A2A2,2个等位基因:A1和A2。等位基因A1在所有供试群体中均表现为优势等位基因。关联分析结果表明,PLIN基因2 467 bp位点对鸡部分胴体性状和脂肪性状影响显著(P<0.05)。多重比较结果表明,A1A1基因型个体活体重、屠体重、全净膛重、腹脂重和腹脂率均显著高于A2A2基因型个体(P<0.05)。A1A2基因型个体的胸肌肌内脂肪含量显著高于A1A1和A2A2基因型个体(P<0.05)。研究结果表明,PLIN基因对鸡胴体及脂肪性状有一定影响。     

Polymorphism in PLIN Gene Intron 6 and its Association with Carcass and Fatness Traits in Chicken

The genetic polymorphisms in PLIN gene were detected by PCR-RFLP method in four Chinese local chickens including Jining Bairi chicken,Laiwu Black chicken et al.,and one breeding strain.The correlations between the SNP and the carcass and fatness traits were analyzed.As a result,a novel G→A mutation at 2 467 bp in PLIN gene was identified in the five populations.Three genotypes (A1A1,A1A2 and A2A2) were detected,and allele A1 was predominant in all the five experimental populations.The statistical analysis showed that the 2 467 bp polymorphism locus was significant association with some carcass and fatness traits (P<0.05).The living body weight,carcass weight,eviscerated weight,abdominal fat weight and percentage of abdominal fat of A1A1 genotype was higher than A2A2 genotype in chickens (P<0.05).The breast intramuscular fat of A1A2 genotype was higher than that of A1A1 and A2A2 genotypes in chickens (P<0.05).The results showed that PLIN gene had effect on carcass and fatness traits in chickens.     

PRKAG3在猪组织器官中的表达差异及与胴体品质关系研究

PRKAG3是编码一磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)γ3亚基的基因,是近年来确定的一个影响猪肉pH值、肉色以及系水力的主效基因,其突变R200Q与过量肌糖原含量有关,被认为是汉普夏猪发生RN-突变的根本原因。本研究以-βactin作为内参,用半定量RT-PCR方法测定雅南猪和杜×长×大三元杂交猪(DLY猪)PRKAG3基因在心脏、肝脏、肾和骨骼肌中表达差异,并测定猪胴体品质。结果表明,PRKAG3主要在骨骼肌中表达,在心脏中有少量表达,而在肝脏和肾中未见表达,在不同品种的骨骼肌中,雅南猪PRKAG3基因的相对表达量高于DLY猪(P=0.078)。相关分析结果表明:骨骼肌中PRKAG3基因的表达量与屠宰率、眼肌面积和背膘厚关系不大,而与肌内脂肪含量成正相关(r=0.832)。     

鸡PRR5L基因5'UTR多态性及其与脂肪性状、屠体性状的关联分析

试验旨在研究类富脯氨酸5（proline rich 5 like,PRR5L）基因遗传变异对鸡脂肪性状及屠体性状的影响。以矮脚黄鸡为研究对象,根据GenBank公布的鸡PRR5L基因全序列（登录号：XM_015287209.1）设计扩增引物,利用PCR直接测序技术检测PRR5L基因的5'UTR区域单核苷酸多态性（SNPs）,并用统计学方法分析其与鸡脂肪性状及屠体性状的关联性。结果发现,PRR5L基因5'UTR区域存在C480G、G514A和A579G 3个多态位点,均表现出3种基因型。χ²适合性检验结果发现,群体在G514A位点处于Hardy-Weinberg非平衡状态（P < 0.05）;在C480G和A579G位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P > 0.05）。基因型与性状关联分析结果显示,在脂肪性状方面,PRR5L基因3个多态位点各基因型间腹脂重、腹脂率和肌内脂肪含量差异均不显著（P > 0.05）;在屠体性状方面,在G514A位点处AG与GG基因型的胸肌重差异显著（P < 0.05）,其余指标差异均不显著（P > 0.05）。因此,可推断PRR5L基因5'UTR的G514A位点可能是一个影响鸡胸肌生长发育的位点,但该位点能否作为标识鸡屠体性状的分子标记辅助选择还需要进一步探究。     

鸡脂滴包被蛋白基因内含子5多态性与胴体及脂肪性状的相关性分析

本试验采用PCR-RFLP方法检测脂滴包被蛋白基因(perilipin,PLIN)在济宁百日鸡、汶上芦花鸡等5个地方鸡种和1个培育品系中的遗传多态性,并分析了多态位点不同基因型与鸡胴体及脂肪性状的相关性。结果发现,在6个供试群体中检测到1个Pst Ⅰ酶切突变位点,测序证实为新发现的鸡PLIN基因2224 bp处G→T突变,该突变位点在供试群体中共检测到两种基因型(A1A1和A1A2),等位基因A1在所有供试群体中均表现为优势等位基因。关联分析结果表明,PLIN基因2224多态位点对鸡胴体性状和脂肪性状影响均不显著(P＞0.05)。多重比较结果表明,A1A1基因型个体在胴体和脂肪性状上总体优于A1A2基因型个体,但各性状均值在两种基因型个体间差异均不显著(P＞0.05)。本研究结果表明,该位点不能作为鸡胴体和脂肪性状的有效分子标记。     

安卡鸡TLR4基因外显子2多态性及其与经济性状的关联分析

研究采用PCR-SSCP对安卡鸡TLR4基因外显子2多态性进行检测,并分析其多态性对经济性状的影响。结果表明:安卡鸡TLR4基因存在AA、AB和BB 3种基因型,基因型频率分别为0.3143、0.4000和0.2857,等位基因A、B的频率分别为0.5143和0.4857。χ2适合性检验表明,安卡鸡TLR4基因外显子2等位基因的分布处于Hardy-Weinberg平衡状态。序列分析结果显示,TLR4基因外显子2的114 bp和142 bp处各有1个G/A突变,G114A为沉默突变,没有引起氨基酸改变,G142A为错义突变,氨基酸由谷氨酸转变为赖氨酸。分析这3种基因型与安卡鸡一些重要经济性状间的关联性,表明,3种基因型个体间的生长发育性状、屠宰性状以及常规肉质等重要经济指标差异不显著,安卡鸡TLR4基因外显子2对重要经济性状没有显著的影响。