猪圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在玻璃纤维膜上包被胶体金标记PCV-2抗原(cap蛋白),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原(cap蛋白)和PCV-2单抗,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸条。该试纸条与猪圆环2型抗体酶联免疫检测试剂盒对比,符合率为94.7%,整个实验过程只需15 min,与ELISA试剂盒比较,具有操作方便、快速、直观的优点。     

猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

为快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平,本研究以PCV2-YW株基因组为模板扩增PCV2-dCap基因,原核表达去除N端41个氨基酸的PCV2重组衣壳蛋白(dCap).将dCap标记胶体金颗粒制备金标垫,将重组Protein A和兔抗dCap多克隆抗体喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)作为检测线(T线)和...     

猪圆环病毒2型胶体金抗体检测方法的建立

为建立检测猪圆环病毒2型(PCV2)胶体金检测方法,本研究对SPA蛋白进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以重组PCV2 ORF2蛋白和猪IgG作为检测线和质控线,制作PCV2抗体检测胶体金免疫层析试纸条。检测结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10 min内可以判定结果,对PCV2免疫血清具有高度特异性,与猪其它病毒免疫血清无交叉反应,检测灵敏度与ELISA相近。试纸条在室温保存6个月,其特异性及灵敏度无明显变化。对临床采集的324份血清样品进行检测,结果与ELISA试剂盒总符合率为98.77%。表明本研究建立的PCV2抗体免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合于PCV2抗体的现场检测。     

猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立便捷、快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的免疫层析方法,本研究利用G蛋白标记胶体金制备金标垫,以PCV2病毒样颗粒(VLPs)和兔Ig G分别作为检测线与质控线组装胶体金试纸条。检测结果显示,该试纸条与A型塞内卡病毒(SVA)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)等猪其它病毒抗体阳性血清无交叉反应,仅对PCV2抗体阳性血清具有高度的特异性;对PCV 2阳性血清最低检测限为1∶6 400稀释度,敏感性较高;批内、批间变异系数CV均小于5%,重复性较好。试纸条在4℃保存6个月,其特异性和敏感性无明显变化。对采集的100份临床血清样品进行检测,该方法与标准ELISA的总符合率为98%。表明本研究建立的PCV2抗体的胶体金免疫层析检测方法具有敏感、特异、稳定等特点,可以做为评价PCV2疫苗免疫效果及其感染筛查的检测方法。     

检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将猪圆环病毒2型（PCV-2） Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测阳性样品时,在检测线和质控线处均出现红色条带;检测阴性样品时,仅在质控线处出现红色条带。该方法与ELISA相比,其灵敏度为89.19%,特异性为100%,并且与PCV-1、猪瘟病毒（HCV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）阳性血清无交叉反应。     

猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合，采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金快速检测试纸法”，用该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒，同时对16纷猪血液或血清进行抗体水平检测，符合率达100％。同时使用金标法对100份猪血液和对应血清进行检测，结果也相同。试验结果显示．金标法与ELISA一样，具有微量、特异、准确等优点，且操作简易，而金标法不需要任何仪器，检测时间短．结果直观，容易判定，适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查。     

猪圆环病毒2型抗体跟踪检测和灭活疫苗免疫效果观察

用Rnls-dCap猪圆环病毒2型抗体酶联免疫检测试剂盒检测杜大长商品仔猪血样143份,其中断奶仔猪血样阳性率58.33%（14/24）、保育仔猪为36.17%（17/47）、育成猪为70.83%（34/48）、育肥猪为91.67%（22/24）。其中10周龄时抗体阳性率最低为33.33%,至14周龄抗体阳性率已升到5...     

种快速检测猪兰耳病抗体的免疫金标试纸研制成功

猪兰耳病（PRRS）与其它繁殖性障碍和呼吸道病的临床症状非常类似，根据临床症状很难做出准确的鉴别诊断。采用疫苗接种是防制该病发生和流行的有效方法，而检测猪体抗体水平是检验免疫是否有效的最好方法。当前检测猪兰耳病抗体的方法有间接ELISA法和乳胶凝集法。两者都需要分离猪血清，还需要有酶标仪等仪器。为此，我们应用８０年代发展起来的免疫胶体金技术与快速斑点免疫技术、胶体金层析技术建立的快速检测猪血液中的猪兰耳病抗体的胶体金试纸检测法。该法具有微量、敏感、特异、快速、简便、结果容易判定、重复性好，检测一个样…     

猪圆环病毒2型综合免疫及母源抗体评估研究

猪圆环病毒2型(PCV-2)参与引起的疾病症候群较为复杂,疫苗免疫效果受多种因素的影响。目前,疫苗的实际免疫效果及其对其他疫苗免疫效果的影响尚不十分清楚。针对这一问题,根据PCV-2病原和WH疫苗株特点,项目组设计了1组母猪、4组仔猪的免疫试验,并持续监测了免疫抗体及仔猪母源抗体变化情况,同时评估PCV-2免疫对其他疫苗(猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪O型口蹄疫)免疫效果的影响。结果显示,仔猪一次性免疫,不能达到理想的免疫效果,间隔2周~3周加强免疫,效果较好,保护抗体可持续到105日龄以上。母猪配种前和产仔前两次免疫,至仔猪断奶后,母猪抗体较高,所产仔猪,28日龄母源抗体较高。PCV-2疫苗免疫不影响上述3种疫苗的免疫效果。     

猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验（Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）,用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%（52/56）,对照组猪血清抗体检测均为阴性（33/33）。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。     

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV-2)感染是一种新发现的猪传染病,以5周龄～12周龄仔猪高发病率、高死亡率及导致机体淋巴系统损伤与免疫缺陷为主要特征。PCV-2感染在世界各养猪国家广泛流行,给各国养猪业造成了巨大的经济损失。PCV-2疫苗研究已成为国内外学者的研究焦点。迄今为止,西欧与美国已有PCV-2疫苗注册上市,主要为灭活疫苗与亚单位疫苗。由于灭活疫苗与亚单位疫苗成本高,且注射次数多,容易造成机体应激,因此,弱毒疫苗、活载体疫苗及核酸疫苗等新型疫苗是目前研究的重点,并取得了长足的进展。论文主要概述了PCV-2疫苗研究的最新进展,以期为PCV-2疫苗研究提供一定的参考资料。     

猪圆环病毒2型不对称PCR检测方法的建立

为研究制备单链DNA的方法,根据GenBam已发表的PCV-2全基因组序列,设计合成2条特异性引物和1条通用引物,通过pGM-T-PCV-2重组质粒的构建、引物浓度优化、单链PCR产物的杂交测序鉴定,以及敏感性和特异性试验,对PCV-2不对称PCR方法进行了研究.结果显示,上、下游引物用量比为20:1～40:1时,可明...     

猪圆环病毒2型疫苗专利综述

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原,疫苗免疫是防控PCV2的重要手段之一。文章从专利角度对PCV2疫苗的研究现状进行了综述,对涉及PCV2疫苗的专利申请概况、专利分布、重要申请人以及重点专利进行了分析,旨在为PCV2疫苗的开发和专利申请提供参考。     

西昌市猪圆环病毒2型血清流行病学调查

为了掌握西昌市猪圆环病毒2型的感染情况,本试验从2008年到2012年5年问,随机采集未免疫过猪圆环病毒2型（PCV2）苗的血清样品共1078头份,用PCV2ELISA抗体检测试剂盒进行检测。结果表明：PCV2血清抗体阳性率每年分别为16．19％、53．98％、64．14％、76．78％、85．60％,总体呈逐年上升的趋势。该调查结果为制定西昌市猪群PCV2感染的防控措施奠定了基础。     

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)感染后会导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等"猪圆环病毒相关疾病"(PCVADs),给全球养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是防控该病的有效手段,近年来市场上推出了PCV2灭活疫苗、嵌合疫苗和亚单位疫苗。PCV2变异较快,主要临床流行毒株从PCV2b逐渐演变为PCV2d,现有商业化疫苗免疫效果需进一步研究证实。论文就近年来国内外PCV2传统疫苗、新型基因工程疫苗、PCV2疫苗与其他疫苗联合免疫的研究进展进行综述,旨在为猪圆环病毒相关疾病的防控及疫苗的开发与利用提供参考。     

猪圆环病毒2型湖南株的分离与序列分析

为了解湖南省猪群中猪猪圆环病毒2型(PCV-2)的流行变异情况,从2003年-2008年湖南省疑似PMWS病死猪组织中分离获得7株PCV-2流行毒株,分别命名为HuN-03、HuN-05、HuN-0601、HuN-0602、HuN-0701 HuN-0702、HuN-08。用PCR方法对这7株病毒进行全基因扩增及测序分析。结果显示,7株PCV-2分离株基因组全长均为1 767 bp,有典型的PCV-2基因组结构;病毒毒株间同源性在94.9%~99.3%之间,与GenBank中的13株PCV-2基因组同源性在93.6%~99.7%之间,与2株PCV-1亲缘关系较远,同源性只有75.7%~76.5%;在遗传演化关系上,7株分离株分属4个进化方向,HuN-0601可能是外来毒株,HuN-03在一个独立的进化方向内,可能是其他5株病毒的母源性毒株,其他5株病毒可能代表了两个遗传种群,一个是国际流行稳定毒株,一个是国内地域性流行毒株。     

猪圆环病毒3型研究概况

猪圆环病毒(PCV)是引起圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要致病病原。之前发现的猪圆环病毒只有2种血清型,分别为圆环病毒1型(PCV1)与圆环病毒2型(PCV2),其中起主要致病作用的是PCV2。2016年,美国学者Palinski等从具有皮炎肾病综合征(PDNS)症状和繁殖障碍的母猪中发现了一种新型圆环病毒,并命名为圆环病毒3型(PCV3)。随后波兰、韩国、中国、瑞典等国家也检测到了PCV3的存在。目前PCV3在世界范围内多个国家均有流行。鉴于PCV2对养猪业造成的重大危害,PCV3的发现应引起人们的重视。论文主要从生物学特性、流行病学和国内外流行情况,以及PCV3的最新研究进展进行了综述,以期对PCV3的后续研究有所帮助。     

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用PCV2 Cap蛋白单克隆抗体预包被酶标板,将杆状病毒表达系统表达的PCV2 Cap蛋白作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于猪圆环病毒2型抗体的检测.通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于圆环病毒2型疫苗的免疫效果检验.利用研制的试剂盒与IFA、商品化进口和国产同类试剂盒对178份猪血清进行平行检测,总符合率分别为96.63％、97.75％和84.27％,与其他几种常见猪病毒抗体阳性血清无交叉反应.试剂盒批内、批间变异系数分别为2.35％ ～4.06％和4.87％ ～ 6.54％,2～8℃保存15个月稳定,适合于对不同来源猪圆环病毒2型疫苗人工免疫猪血清抗体进行检测.     

青海省部分地区猪圆环病毒2型感染的血清学调查

应用猪圆环病毒2型抗体酶联免疫检测试剂盒,测定了青海省省内8个猪场的1 000个血清样本,对不同地区、不同年龄猪的进行了血清学调查.结果显示,青海省8个猪场均有猪圆环病毒2型( PCV-2)感染,全省猪的PCV-2感染的平均血清阳性率为25.9％,其中母猪、种公猪、生长育肥猪、保育猪及哺乳仔猪抗体阳性率分别35.3％、...