伪狂犬病基因缺失疫苗研究进展

 伪狂犬病是由疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科猪疱疹病毒I型的伪狂犬病毒引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。猪是本病病毒的天然宿主和贮存者,本病可引起猪严重的繁殖障碍,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大经济损失。采取安全有效的疫苗进行免疫预防,是控制该病的主要手段。     

伪狂犬病基因缺失疫苗的研究进展

在国内,四川农业大学率先系统地开展了伪狂犬病病毒(PRV)分子生物学研究,在构建基因文库、绘制物理图谱的基础上,建立了放射性和非放射性分子杂交检测PRV技术;首次构建了PRV Fa株TK基因缺失株,PRV Fa gI     

PCV2和猪伪狂犬病弱毒疫苗体外共接种对猪PBMC中IL-2及IL-6 mRNA表达的影响

将猪圆环病毒2型（PCV2）与猪伪狂犬病弱毒疫苗（PRV）体外单接种和共接种仔猪外周血单个核细胞（PB-MC）,采用real-time PCR技术定量检测接种后不同时间PBMC细胞因子IL-2和IL-6的mRNA表达水平,以分析PCV2对PRV免疫反应的影响。结果显示,PRV接种组PBMC中IL-2与IL-6的mRNA表达均出现显著上调（P〈0.05）,PCV2接种组IL-2与IL-6的mRNA表达在接种后的部分时间也出现显著上调,但PCV2与PRV共接种组的IL-2与IL-6的mRNA表达较PRV组均出现显著下调,表明PCV2能够抑制PRV促进猪PBMC中IL-2与IL-6的mRNA表达上调作用,提示PCV2可能会对PRV的免疫反应产生不利影响。     

猪伪狂犬病疫苗的研究进展

猪伪狂犬病是一种高死亡率的急性传染病,给畜牧业发展带来了很大的损失。综述了各种伪狂犬疫苗的类型、特点、发展动态以及应用前景。     

猪伪狂犬病进口与国产gE基因缺失活疫苗免疫效果的比较

[目的]了解猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗的免疫效果,同时制定合理的免疫程序。[方法]选用国产和进口2种猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗,采用2种不同的免疫程序进行了免疫对比试验。[结果]无论是用国产的还是进口的猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗免疫,试验猪10、20、30、40、50、60、70日龄猪伪狂犬病病毒gB抗体S/N平均值各组间差异均不显著(P>0.05);80日龄,实行3次免疫的试验猪伪狂犬病病毒gB抗体S/N平均值显著高于2次免疫的试验猪(P<0.05);90、100、115日龄,实行3次免疫的试验猪伪狂犬病病毒gB抗体S/N平均值极显著高于2次免疫的试验猪(P<0.01)。整个试验期,通过对国产和进口猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗免疫效果的对比,发现试验猪伪狂犬病病毒gB抗体S/N平均值各组间差异均不显著(P>0.05)。[结论]该免疫试验结果可为猪伪狂犬病免疫防控程序的应用提供依据。     

猪伪狂犬病疫苗研究及应用现状

猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的猪的一种急性传染病,对世界养猪业危害严重。疫苗免疫是预防和控制猪伪狂犬病的主要措施之一。目前,国内外临床应用的猪伪狂犬病疫苗包括灭活疫苗、弱毒疫苗和基因缺失疫苗。近年来,随着我国伪狂犬病的反弹和流行,伪狂犬病防控和疫苗研究再次成为研究热点。本文对猪伪狂犬病疫苗的研究及使用现状进行了较为详细的综述。     

伪狂犬病病毒鄂A株gC基因的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达

 以伪狂犬病病毒国内地方分离株 (鄂A株 )为材料 ,采用核酸杂交、DNA重组技术直接从基因组DNA中克隆了最主要的保护性抗原基因gC ,测定了全序列并对其原核表达产物作为血清学诊断抗原进行了初步探讨。结果表明 :所克隆的 gC基因全长 175 5bp(含启动子序列和 poly(A)信号序列 ) ,具有典型I型膜蛋白结构特征。同具有代表性的国外标准株NIA 3株、IndianaS株相比 ,多个酶切点不同 ,尤其是具有分型意义的BamHI位点消失 ;氨基酸水平上也存在一定程度的差异 ,鄂A株 gC可编码 4 87个氨基酸残基 ,而以往所报道的gC均只编码 4 78或 4 79个氨基酸 ,有意义的是功能区突变较多 ,并存在连续 7个氨基酸残基的插入。同 pET 2 8a的 6xHis Tag融合的gC基因完整编码区在大肠杆菌中获得高效表达 ,融合蛋白分子量为 6 2ku ,能同伪狂犬病病毒高免血清发生特异性反应。纯化的表达产物作为ELISA和乳胶凝集诊断抗原 ,具有很高的敏感性和特异性     

猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗免疫效果试验探究

为评估猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗C株（以下简称伪狂犬疫苗）对猪场伪狂犬病的防控效果,对天津市某猪场引进的约2000头后备母猪分阶段注射伪狂犬疫苗,引进前第4周和第10周各注射1头份,引进后15d注射1头份,并对抗体水平和野毒感染情况进行评估。结果表明,伪狂犬疫苗能使猪群产生较好的免疫应答,免疫后ELISA检测的猪伪狂犬病病毒gB抗体极显著提高（P<0.01）。经过免疫的后备母猪针对伪狂犬经典毒株和变异毒株的中和抗体水平均上升,且免疫前后针对伪狂犬变异毒株的中和抗体效价差异极显著（P<0.01）。可见,该研究所用伪狂犬疫苗无论是针对经典毒株还是变异毒株均能为猪群提供更好的保护力,且对变异毒株产生的中和抗体效价更高,保护力更强,适用于我国猪伪狂犬病的防治。     

猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因原核表达质粒的构建

为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRV GZ-Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经鉴定后测序。结果表明:目的片段为PRV gE基因完整开放阅读框,大小1 734bp,编码577个氨基酸,在pET32a(+)载体中位置正确,表明,pET32a-gE原核表达质粒构建成功。该基因与国内外其他18株PRV的gE基因推导氨基酸序列同源性为94.8%～98.6%;与国外分离株属同一个进化分支,遗传关系相对较近;而与国内Fa、Min、GDSH等毒株亲缘关系较远。     

Expression of Porcine Interleukin-2 and Porcine Interleukin-6 and Their Adjuvant Effects on Gene Deleted Vaccine of Pseudorabies Virus (TK-/gG-/LacZ+)

Porcine interleukin-2 and porcine interleukin-6 cDNA sequences were cloned into the expressing vectors pET-28a and pGEX-KG respectively. They were expressed in E.coli BL21 (DE3) with high-level production. The gene deleted vaccine of pseudorabies virus Ea strain (TK-/gG-/LacZ+) was mixed with the two different purified recombinant proteins each, or both, with the doses of 2, 5 or 10 μg ml-1. Ten groups of pseudorabies negative antibody swines were immuned twice with tested vaccines with different doses, or control vaccine, respectively. The antibody titers of the test groups were detected by neutralization test, and the daily weight gains of swines were calculated and analyzed statistically. In the study, all the neutralizing antibody titers in test groups were higher than the control group, and the recombinant proteins appeared a dose dependent adjuvant effect. The tested vaccines with 2 μg ml-1 pIL-2 and with 10 μg ml-1 pIL-2/pIL-6 got significant and extremely significant differences, compared with the vaccines without pILs. The difference of the daily weight gain indicated the potential positive influence of pIL-2 and pIL-6 on immune protection.     

猪伪狂犬病毒病与圆环病毒病2型混合感染的诊断

为诊断贵州省都匀市贵定县某猪场送检病料的感染类型,调查了其流行病学、临床症状和病理剖检特征,并采用复合PCR检测技术对其进行检测。结果表明,该猪场存在猪伪狂犬病毒病与猪圆环病毒病的混合感染。     

Porcine Interleukin-2 Expression in Insect Cells and Its Enhancement of Pig Immunity to Swine Influenza Virus Inactivated Vaccine

Mature porcine interleukin-2 （pIL-2） gene was amplified by PCR from the plasmid pGEM-T-pIL2 and cloned into the baculovirus pFastBacTM Dual vector of the Bac-to-Bac baculovirus expression system under the control of the PH promoter. Recombinant plL-2 （rpIL-2） expressed in Sf9 insect cells was detected by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and immunofluorescence assay. Western blot analysis confirmed that the rpIL-2 protein had a molecular mass of 20 kDa, which was larger than the molecular mass of the mature protein predicted based on its peptide sequence. The rpIL-2 protein induced in vitro proliferation of ConA-stimulated porcine splenocytes and enhanced in vivo protective immune responses induced by vaccinating the pigs with inactivated oil emulsion vaccine against swine influenza virus. The results showed that the rpIL-2 expressed in Sf9 insect cells has immunoenhancement effects; the finding lays the foundation for the preparation of a specific recombinant IL-2 protein and the development of a novel immune adjuvant of vaccines against various infectious porcine pathogens to increase the immunoprotective efficacy of vaccines.     

猪圆环病毒2型感染对高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫应答的影响

采用阻断ELISA法对单独接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征组(hpPRRS,B组)及PCV2人工感染21 d后接种hpPRRS疫苗组(PB组)不同时期血清中的PRRSV抗体进行检测,同时对不同时期前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析.结果表明,在接种后32 d B组白细胞含量极显著高于PB组(P＜0.01),接种后62 d B组淋巴细胞含量极显著高于PB组(P＜0.01),接种后75 d PB组幼稚型Th细胞含量显著高于B组(P＜0.05),接种后32、62及75 d B组Tc细胞含量为PB组的2.40、1.98和1.86倍,接种后32、48及62 d B组记忆/激活Th细胞含量分别为PB组的1.54、1.46及1.32倍.