山东省苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性测定

2007年8～10月从山东主要苹果产区轮纹病果上分离获得54个苹果轮纹病菌菌株,采用菌丝生长速率法分别测定了各菌株对代森锰锌的敏感性。结果表明:代森锰锌对54个菌株的EC50值呈单峰频次分布,分布在1.9287～20.8004μg/mL之间,均值为(9.4383±0.5561)μg/mL;在54个菌株中选择对代森锰锌最敏感的泰山海棠菌系进行重复测定,将其EC50平均值3.0963μg/mL确定为苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感基线;Duncan新复极差法和系统聚类的分析结果表明,不同地理来源的苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性都处在较高水平,总体上不存在明显差异,没有出现敏感性下降的抗药性亚群体。     

不同地区苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)菌株对杀菌剂敏感性的研究

从不同地区采集的苹果轮纹病病果以及大樱桃流胶病枝条木质部中分离纯化得到7株苹果轮纹病菌,用菌丝生长速率法测定了6个不同结构类型的杀菌剂对7株轮纹病菌的毒力.结果显示,所试杀菌剂对7个菌株的毒力由大到小依次是咯菌腈、戊唑醇、甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、嘧霉胺和嘧菌酯.菌株不同,对杀菌剂的敏感性不同.所有菌株对咯菌腈、戊唑醇、甲基硫菌灵相对都比较敏感,EC50值均小于1μg/mL,最敏感菌株与耐药性最强的菌株间EG0值分别相差7.5倍、13.67倍、9.14倍.所试菌株对苯醚甲环唑的敏感性稍差,EC50值介于0.51～2.27 μg/mL.嘧霉胺和嘧菌酯对所试的7个菌株均表现较低的毒力,不能作为轮纹病菌的防治药剂.仅菌株1010对嘧霉胺的EC50值=0.02 μg/mL＜1 μg/mL,但其回归方程的b值很小,EC95值达到2.95×104 μg/mL,也失去实际应用价值.     

苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵的敏感性基线

采用菌丝生长速率法测定了苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)对甲基硫菌灵的敏感性。结果显示,EC50处于0.206 7~9.066 5 mg/L之间,平均为3.883 6±2.097 9 mg/L,与甲基硫菌灵对5个野生海棠菌株的EC50平均值3.041 3±0.296 5 mg/L无明显差异。正态检验表明,76个苹果轮纹病菌菌株对甲基硫菌灵的敏感性符合近似正态分布,山东省未出现产生抗药性的苹果轮纹病菌菌株,EC50平均值3.883 6±2.097 9 mg/L可作为苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵的敏感性基线。     

苹果轮纹病菌孢子田间释放规律

2008～2009年采用雨水收集法监测了苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)孢子田间释放动态,结果表明从5月中旬至9月均能成功收集到苹果轮纹病菌孢子.5月中下旬出现孢子释放小高峰,6月下旬至8月中下旬为孢子释放高峰期.摸清苹果轮纹病菌孢子释放动态可为深入开展针对性防治轮纹病、抗病育苗等方面的工...     

苹果轮纹病菌检测方法及鉴定

选取苹果轮纹病具有代表性的B.dothidea,成功地设计并且合成了B.dothidea实时荧光PCR引物和探针,建立了B.dothidea的实时荧光PCR检测体系。结果表明,利用16S r DNA序列设计的特异性探针能够快速检测、鉴定植物病原B.dothidea,具有灵敏度高、不易污染和漏检的优点。     

苹果轮纹病菌DNA提取方法研究

由贝氏葡萄座腔菌梨专化型引起的苹果枝干轮纹病是苹果生产上发生最严重的病害之一,致病菌基因组DNA提取是其分子生物学研究的基础。针对其菌丝富含多糖、纤维素及其他次生代谢物质而且菌丝培养缓慢的特点,用采自辽宁兴城的6个苹果轮纹病菌菌株为试材,进行菌丝的液体和PDA平板培养,然后采用改良的CTAB法从菌丝中提取DNA。通过752型紫外光栅分光光度计检测,所提取的DNA的0D260nm／OD280nm比值介于1．80—2．07之间,最后将所提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳得到了较清晰的图谱。证明这两种菌丝培养方法都可用于苹果轮纹病菌DNA提取,但是PDA平板培养是一种更快捷地获得病原菌菌丝的方法;本试验采用的改良CTAB法是提取苹果轮纹病菌DNA的一种有效方法。     

苹果轮纹病菌分生孢子器产生条件研究

研究了培养基、温度、pH值和光照对苹果轮纹病菌分生孢子器产生的影响。结果表明,苹果轮纹病菌分生孢子器的产生最适宜的培养基是燕麦粉琼脂培养基,PDA和PSA培养基产生分生孢子器的数量较少;最适温度为25℃,最适pH为7。紫外灯与日光灯交替照射有利于分生孢子器的形成,黑暗条件下不能形成成熟的分生孢子器。     

苹果轮纹病菌DNA提取方法的比较

采用尿素提取法、氯化苄提取法以及SDS-CTAB提取法对苹果轮纹病菌的基因组DNA进行了提取和比较.结果表明,3种方法均能提取到苹果轮纹病菌的基因组DNA.其中,SDS-CTAB法效率最高,提取的DNA质量最好,但是耗时较长;尿素提取法操作简单快速,但是提取的DNA质量较低;氯化苄提取法提取的DNA纯度最低,蛋白质污染严重.将所提取的DNA经ITS试验检测与电泳检测,证明3种方法提取的DNA扩增效果良好,均可满足该真菌rDNAITS分析的要求.     

不同诱导因子对苹果轮纹病菌抗药性的影响

为了明确苹果轮纹病菌的生长规律和抗药性。从有代表性的苹果种植区采集并分离了26个苹果轮纹病菌菌株,利用不同因子进行诱导处理,然后采用菌丝生长速率法测定其对戊唑醇的抗药性。结果表明:ZZ42、YT1、XX3、HX11、YC6和SS2菌株在戊唑醇的长期处理下EC50值有明显变化;在紫外线照射下,SS1、ZZ2、RS2、YC5和RS1菌株的EC50值被改变;在电磁波处理下,SS2、LY10、LY20、YC5和PY19菌株的EC50值有变化;在水杨酸处理下,RS1、LY20、YC5、LY2、XX3和SS1菌株的EC50值被改变。不同因子对同一菌株的影响不同,同一因子的不同浓度或强度对同一菌株的影响也不一样,但有些因子在一定浓度或强度下,对病菌抗性有明显的影响。     

苹果轮纹病菌产生细胞壁降解酶种类及其活性分析

为明确苹果轮纹病菌产生细胞壁降解酶种类及其活性,利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定了不同培养基上的9种细胞壁降解酶活性及轮纹病菌侵染果实过程中各酶活性变化规律.结果表明,轮纹病菌可产生木聚糖酶、多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)等7种细胞壁降解酶;不同碳源培养条件下,该病菌产生细胞壁降解酶种...     

8-羟基喹啉酮对扁桃流胶病病菌的室内毒力测定

采用菌丝生长速率法,测定了5种杀菌剂对从感染流胶病病菌的扁桃植株上分离的葡萄座腔菌Botryo-sphaeria dothidea菌丝生长的毒力。结果表明：8-羟基喹啉酮对扁桃流胶病病菌有显著的抑制作用,EC50值为1.272μg/mL,抑菌效果明显优于甲基托布津、多菌灵、百菌清和代森锰锌。     

杨树与溃疡病菌互作中过氧化物酶的细胞化学定位

为了从细胞水平上研究过氧化物酶在杨树与溃疡病菌互作过程中的作用、过氧化物酶在细胞器中的定位与活性变化,以及过氧化物酶在杨树与溃疡病菌互作中的机制,该文以抗性不同的毛白杨(高抗种)和北京杨(高感种)为研究材料接种溃疡病菌葡萄座腔菌,利用DAB细胞化学染色技术研究过氧化物酶在细胞中的分布及活性。通过分析酶活性区域的电子密度发现:无论抗病种还是感病种,接种后均发现细胞中有过氧化物酶活性反应;抗病种过氧化物酶活性不仅明显高于该种未接种的对照,也明显高于接种处理后的感病种,并且定位更广泛,在细胞壁、细胞间隙、叶绿体膜、线粒体膜及质膜上均有大量定位;感病种酶反应产物主要分布于细胞壁上,在质膜、局部核膜上有少量定位,且定位范围及强度均小于抗病种。      

First Report of Botryosphaeria dothidea Causing Sweet Osmanthus Leaf Dieback in China

Sweet osmanthus is one of the ten traditional famous flowers in China.The occurrence of the diseases caused by fungi other than Botryosphaeria spp.has been reported mainly from China on sweet osmanthus.A leaf dieback of sweet osmanthus caused by Botryosphaeria sp.was found for the first time in 2007 in Nanning City,Guangxi,China.The objectives of the present study were to isolate and characterize the causal organism of sweet osmanthus leaf dieback.The fungus was isolated from the lesions of affected sweet osmanthus leaves and its pathogenicity to sweet osmanthus was confirmed using a detached-leaf-inoculation method.The identification of the pathogen was carried out mainly based on the morphological characters and molecular analysis of internal transcribed spacer （ITS） sequences.The morphological characters of the pathogenic isolate GHX6 were agreed with that of Botryosphaeria dothidea.The ITS sequence of the isolate was amplified with primers ITS1 and ITS4,and submitted to GenBank （accession no.GQ368251）.Molecular analysis based on ITS sequence comparison between the isolate GHX6 and the other related fungi derived from GenBank supported that the causal agent of the sweet osmanthus leaf dieback belonged to Botryosphaeria dothidea.This is the first report of Botryosphaeria dothidea causing leaf dieback on sweet osmanthus in China.     

豚草粗提物对杨树水泡型溃疡病的抑菌作用研究

为解决豚草提取物在林业病虫害防治中的推广与应用问题,以豚草叶片为试验材料,采用温浸-超声波联合提取法提取抑菌活性物质,并开展其对杨树水泡型溃疡病病原菌的室内外抑菌试验。室内抑菌试验表明,粗提物浓度为16 mg/mL时,抑菌率达到73.62%;林间防治试验表明,最小抑菌浓度为 40 mg/mL,抑菌率达到95.14%。通过以上抑菌试验确定豚草粗提物对杨树水泡型溃疡病有较好的抑制效果。     

猕猴桃褐腐病生防菌株GMH31发酵条件的优化

利用从药用植物牡蒿(Artemisia japonica)中分离筛选出的1株猕猴桃褐腐病生防菌株GMH31,采用含毒介质平板法进行抑菌试验,通过单因子试验和正交试验,对该菌株的最适发酵培养基成分(包括碳源、氮源、无机盐离子、微量元素)及发酵条件(包括发酵时间、温度、pH、转数、装液量、接种量)进行了优化。结果显示:尤韦可拟盘多毛孢菌株GMH31培养基组分最佳配比为麦芽糖35 g/L、氯化铵12 g/L、K_2HPO_40.1 g/L、甘氨酸0.015 g/L,最佳发酵条件为培养时间14 d、培养温度26℃、初始pH 6.0、摇床转速120 r/min、250 m L装液量100 m L、接菌量为装液量的6%。在最佳发酵培养基和培养条件下,GMH31菌株发酵滤液对猕猴桃褐腐病菌的抑制率提高了16.45%。