喀西茄内参基因实时荧光定量PCR表达稳定性评价

为了筛选在喀西茄（Solanum aculeatissimum）中表达稳定的内参基因,选取7个常用内参基因GAPDH、ACTIN、18sRNA、UBQ、TUA、EF1和CYP,利用实时荧光定量PCR技术,结合GeNorm、NormFinder和RefFinder软件对其在喀西茄不同组织、不同植物生长调节剂处理、非生物和生物胁迫下的表达稳定性进行评价。结果表明,TUA和18sRNA在喀西茄不同组织中的表达稳定性最好,18sRNA和ACTIN在不同植物生长调节剂处理条件下表达水平最稳定,EF1和GAPDH在干旱和盐条件下表达稳定性最好,TUA和EF1在所有喀西茄测试样品组中（包括不同组织、不同植物生长调节剂处理、非生物及生物胁迫）的表达稳定性最高,而CYP和ACTIN在喀西茄不同试验条件下的表达稳定性较差。     

栽培茄（Solanum melongena L.）与喀西茄（Solanum khasianum C.B.Clarke）F1杂交种的获得与鉴定

喀西茄（Solanum khasianum C. B. Clarke）是茄子近缘野生种，具有珍贵的抵抗生物胁迫及非生物胁迫的基因。以 10 份栽培茄材料作母本与喀西茄进行杂交，并采用一次授粉、重复授粉、花柱短截、混合授粉及嫁接后授粉等授粉方式， 研究获得栽培茄与喀西茄种间杂交种的最佳方法。结果表明：采用嫁接后授粉可以提高杂交结果率，并且得到了L81 与喀西 茄的F₁；对F₁ 苗期植株进行SSR 分子鉴定，证实了F₁ 种子为栽培茄与喀西茄种间杂交种。     

番茄木虱取食对含Mi-1.2番茄抗氧化酶活性及防御反应相关基因表达的影响

Mi-1.2基因编码CC-NBS-LRR家族抗病蛋白,对线虫及刺吸式昆虫具有广谱抗性。以番茄木虱和携带Mi-1.2基因的番茄品系‘Motelle’作为研究体系,研究番茄木虱取食对番茄叶片抗氧化酶活性及防御反应相关基因表达的影响。结果表明：番茄木虱的取食显著提高了番茄叶片抗氧化酶POD、CAT、APX等的活性,同时诱导Mi-1.2基因表达;番茄木虱的取食上调SA合成有关基因PAL、SA信号途径标志基因PR-1（P4）及与Mi-1.2功能相关基因WRKY70、WRKY72a、WRKY72b的表达。JA/systemin信号途径和伤害有关的PinII、TPI-1、PR-6、PR-7、PR-5等及Prosystemin编码基因Psy的表达未发生变化;JA合成途径相关酶编码基因AOS2、LoxD下调表达,AOC的表达没有变化。SA信号途径可能参与Mi-1.2介导的番茄对于刺吸式昆虫番茄木虱的防御反应。另外,Mi-1.2的RNAi沉默不会改变上述基因的mRNA水平,说明Mi-1.2基因产物对这些基因的表达无调控作用。     

菜薹叶片衰老相关转录因子BrWRKY75的特性分析

以菜薹[Brassica rapa L. ssp. chinensis（L.）Mokino var. utilis Tsen et Lee]为材料,克隆得到1个WRKY转录因子,命名为BrWRKY75。氨基酸序列比对及进化树分析发现BrWRKY75与拟南芥的WRKY75同源性较高,且同属于第Ⅱ类c亚族。实时荧光定量PCR表明BrWRKY75在菜薹叶片衰老过程中表达明显增强。亚细胞定位和转录活性分析显示BrWRKY75定位于细胞核,是一种核蛋白,并且具有转录抑制活性。体外凝胶阻滞试验（EMSA）证实BrWRKY75能与W-box（TTGAC）元件特异结合。上述结果为进一步研究菜薹叶片衰老的转录调控机制奠定了基础。     

青枯雷尔氏菌胁迫对烟草植株抗氧化酶系活性的影响

以青枯雷尔氏菌RS-1403作为外源微生物,研究不同浓度青枯雷尔氏菌胁迫对烟草植株叶片PPO、POD、SOD酶活性的影响。结果表明:PPO和POD酶活性总和显著高于对照,而SOD酶活性总和除了处理2(接种浓度为2.35×10~4CFU/mL)外,其余的各个处理的均低于对照。烟草植株的根部、茎部和叶片的POD、PPO和SOD酶活性总和明显高于对照处理,并且其酶活性达到高峰的时间有所不同。胁迫接种5 d后,烟草植株叶片和茎部的POD酶活性和对照处理的比值最大,胁迫接种10 d后,烟草植株根部POD酶活性比值最大。烟草植株叶片和根部在接种15 d后,PPO酶活性和对照处理的比值达到最大,茎部PPO酶活性在接种5 d后比值最大。接种20 d后,处理烟草植株叶片和茎部的SOD酶活性和对照处理的比值达到最大,接种后25 d,根部SOD酶活性比值最大。     

苹果赤霉素氧化酶基因GA2ox、GA3ox和GA20ox家族全基因组鉴定及表达分析

通过生物信息学方法对苹果赤霉素氧化酶基因GA2ox、GA3ox和GA20ox的结构、化学性质、染色体分布、进化关系、启动子顺式作用元件和组织特异性表达进行分析,并通过实时荧光定量PCR对苹果花芽诱导过程中的表达水平进行测定。从苹果基因组里鉴定出41个赤霉素氧化酶基因,其中GA2ox类20个,GA3ox类14个,GA20ox类7个,除4号染色体外,其他染色体均有分布;其蛋白质分子量在13.15 ~ 60.17 kD之间,等电点预测值在5.50 ~ 9.81之间;通过聚类分析将这41个赤霉素氧化酶基因分为5个亚家族;基因结构和保守结构域分析发现这41个赤霉素氧化酶基因的外显子数1 ~ 5不等,且保守基序Motif 1、5、6、7、10为大部分基因所共有;根据苹果表达量数据库组织特异性分析发现这3类基因在不同品种、不同组织部位的表达量不同,其中在花和果实中表达量相对较高。通过‘长富2号’花芽诱导过程的转录组数据,挑选出8个基因（MdGA2ox4、MdGA2ox6、MdGA2ox9、MdGA2ox12、MdGA3ox5、MdGA3ox12、MdGA20ox1和MdGA20ox5）进行实时荧光定量PCR分析,结果发现,GA₃处理后,花后不同时期GA20ox类氧化酶基因表达量均下调,GA2ox类氧化酶基因表达量均上调,GA3ox类氧化酶基因表达量则出现相对波动的现象。     

调控黄瓜苦味基因Bi的AP2/ERF家族转录因子

从华北型黄瓜‘9930’中克隆了黄瓜苦味形成的关键基因Bi的启动子序列,通过酵母单杂交技术对黄瓜叶片cDNA文库进行筛选,寻找可以调控Bi表达的转录因子。通过对筛选结果的测序及比对,发现有7种转录因子重复出现,包括2个AP2/ERF家族、3个bZIP家族、1个WRKY家族转录因子和1个E3泛素类COP1蛋白。其中AP2/ERF家族转录因子CsERF（登录号：Csa7M448110）重复出现6次,出现概率高于其他转录因子。利用烟草瞬时表达系统,CsERF对Bi启动子的结合及激活作用得到了进一步验证。初步证明CsERF可以结合到Bi的启动子并激活其转录,推测其很可能就是黄瓜叶片中调控苦味形成的关键转录因子。     

野生毛葡萄水通道蛋白基因VhPIPs的克隆与组织特异性表达研究

从野生毛葡萄组织中克隆了9个质膜水通道蛋白基因（VhPIP）的cDNA全长序列,并研究了其生物信息学特征及组织特异性表达。氨基酸序列分析表明,9个VhPIP分为PIP1和PIP2两类;均含有MIP蛋白家族保守的信号序列SGGHINPAVT和两个NPA（Asn-Pro-Ala）单元,均为稳定性蛋白、疏水性蛋白,且每个VhPIP均含有6个跨膜区。实时荧光定量RT-PCR分析表明,这9个VhPIP在抗旱的毛葡萄‘花溪–9’根、茎、叶中均有表达,其中VhPIP1;1、VhPIP1;2、VhPIP1;4、VhPIP2;1、VhPIP2;2和VhPIP2;4在其根中的表达量最多,可能与根部水分运输的调节密切相关;VhPIP1;5和VhPIP2;3在其叶中的表达量最多,可能主要参与叶片的水分运输,与叶片的蒸腾作用密切相关;VhPIP1;3在根、茎和叶中的表达量无显著性差异;相对于其他基因的表达,VhPIP1;1和VhPIP2;4在根中表达量最高,这两个基因可能在水分运输过程中起较大作用。     

低夜温下番茄ABA缺失突变体和野生型叶片中miRNA差异表达分析

为揭示番茄叶片中miRNA对非生物胁迫的响应机制,以番茄ABA缺失突变体sit和野生型番茄RR为试验材料。采用实时荧光定量（qRT-PCR）技术检测叶片中6个miRNA（miR160、miR162、miR166、miR1919、miR397和miR6026）及其预测的靶基因在夜间低温和喷施外源ABA逆境胁迫下的表达情况。结果表明,在15 ℃夜温（对照）下,sit的ABA含量是60 ng · g^-1,RR是120 ng · g^-1,sit叶片的保卫细胞和气孔的开度都明显大于野生型RR,ABA缺失突变体sit中miRNA的表达量与野生型RR相比都显著下调,其靶基因除miR1919外,表达量都上调;夜间低温（6 ℃）处理12 h后,所有miRNA在sit中比RR中的表达量都显著增加;喷施80 mg · L^-1的ABA后,sit中miR162、miR166、miR1919及miR397比0 mg · L^-1 ABA处理的表达量显著上调。推测miR160、miR162和miR6026通过依赖ABA信号途径参与夜间低温胁迫。     

梨Ty1-copia类反转录转座子GAG开放阅读框预测和光响应下的表达分析

基于生物信息学方法,对‘砀山酥梨’基因组中Ty1-copia类型的GAG开放阅读框进行预测,共获得315条GAG序列。通过系统聚类,梨基因组中GAG序列可分为7个支系,第一和第三支系成员较多且保守性高。序列比对结果显示,不同支系GAG序列具有较高的异质性。在‘美人酥’梨的套袋和摘袋后的果皮中发现了34个gag成员,其中有6个（Ppgag16、Ppgag19、Ppgag23、Ppgag27、Ppgag29和Ppgag30）为高丰度表达成员。遮光条件下,‘美人酥’果皮中有部分gag成员发生表达,说明copia类反转座子不仅仅受光照影响发生表达。在摘袋后,‘美人酥’果皮中有2个成员（Ppgag5和Ppgag23）发生明显上调表达,说明梨中部分反转录转座子的转录受到光照的调控。     

细辛提取物对茄子黄萎病及茄子生长与抗性生理指标的影响

以茄子黄萎病为研究对象,采用不同浓度的细辛（Herba asari）提取物灌根处理茄子幼苗,研究其对茄子黄萎病的抗性、植株生长状况及保护酶活性的影响。结果表明：与清水对照相比,施用不同浓度的细辛提取物均降低了茄子黄萎病的发病率及病情指数,作用强度随着细辛提取物浓度的增加先增强后略有下降,预防处理明显比治疗处理效果好,4 g•L^-1细辛提取物预防处理的防治效果可达86.26%;不同浓度的细辛提取物对茄子幼苗的株高、茎粗、鲜质量、相对电导率、叶绿素含量、根系活力、苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性、过氧化物酶（POD）活性和超氧化物歧化酶（SOD）活性均表现为促进作用,最佳处理浓度为4 g•L^-1。     

嫁接对茄子黄萎病的抗性及某些生物学性状的影响

以 5种茄科野生种为砧木 ,栽培品种七叶茄为接穗 ,研究了嫁接对茄子生物学性状及黄萎病抗性的影响。结果表明 ,5种砧木与接穗间都有很强的亲和性 ,嫁接苗成活率均在 95%以上。茄子嫁接后 ,不仅植株生长势强 ,根系、叶片、茎粗、株高和单果质量都明显优于自根苗 ;而且对黄萎病的抗性提高 ,其中以托鲁巴姆和粘毛茄为砧木的嫁接植株对黄萎病的抗性最强。根据砧木自身的生物学性状和对黄萎病的抗性程度 ,确定托鲁巴姆是嫁接茄子防治黄萎病的最佳砧木。此外 ,嫁接植株的果实在干物质、总糖、粗纤维和微量元素铁等的含量上无明显差异     

钾、钙、硼、硅对茄子抗黄萎病效果的影响

以茄子黄萎病为研究对象,采用田间施用钾（K）、钙（Ca）、硼（B）、硅（Si）的方法,探讨4种元素对接种黄萎病菌后茄子幼苗的发病率、植株生长状况及防御酶活性的影响。结果表明,与对照相比,施用4种元素的各处理均降低了茄子黄萎病的发病率和病情指数,低浓度的K、Ca、B、Si促进了茄子幼苗株高、茎粗、根长、全株鲜质量、根系活力及POD、PPO、PAL活性,而后随着浓度增大,促进作用减弱。其中以B 50 mg·L^-1处理抗病性最好,其发病率比对照低46.66个百分点,各生长指标显著高于对照,根系活力比对照提高286 %;POD、PPO、PAL活性分别比对照提高20 %、78 %、87 %。说明B对诱导茄子黄萎病抗性有显著效果,可应用到生产。     

杜梨根茎叶特异表达基因的RNA-Seq分析

利用RNA-Seq技术,对杜梨根、茎、叶中特异表达的基因进行了筛选和分析,为探讨梨属植物生长发育及组织间功能差异的分子机制提供理论依据。研究结果表明,杜梨根、茎、叶中分别获得了19 443、19 567、17 876个表达基因,分别注释得到110、110、110个GO功能分类和56、55、65条KEGG代谢途径,主要涉及能量代谢、物质代谢和运输、激素调控、信号转导等多种生物学功能;其中在根、茎、叶中特异表达的基因分别有1 245、971、846个,涉及8、8、11条显著富集的代谢通路,主要集中在亚麻酸、脂肪酸类、糖类等生物大分子物质和各种次生物质的代谢过程以及其他氧化还原、激素信号转导等途径;根、茎、叶中分别有10、6、20个特异表达基因参与调控激素信号转导途径,叶片中特异表达的15个编码合成SAUR蛋白基因,大部分在幼叶中表达较高,并伴随叶片衰老表达量下调;同时,在根、茎、叶中分别得到1 353、1 150、1 232个转录因子,较多WRKY、MYB、AP2-EREBP等家族的转录因子在根中特异表达。选出8个特异表达基因进行qRT-PCR验证,结果与RNA-Seq数据基本一致,表明了RNA-Seq分析是可靠的;综合上述结果,认为特异表达基因可能对维持组织器官的特定功能起重要作用。     

茄子黄萎病研究进展

茄子(Solanum melongena L.)是茄属的第三大栽培作物,在我国各地广泛种植。茄子黄萎病又称凋萎病,俗称“半边疯”,是威胁茄子生产最严重的病害之一,由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)引起的一种世界性土传维管束病害,发生普遍,危害严重,可大幅度降低茄子的产量和品质。因此,了解和掌握茄子黄萎病发病症状及其规律,及早预防,以减少它的危害十分必要。笔者围绕近年来在茄子黄萎病发病症状、致病机制、抗黄萎病机制和综合防控等方面的研究成果,论述了茄子黄萎病研究进展,旨在为茄子抗黄萎病分子育种提供借鉴和参考,进而促进我国茄子产业的可持续发展。     

四川主要辣椒栽培品种对疫病的抗性鉴定及评价

为了全面、准确地评价四川省主栽辣椒品种对疫病的抗性水平，采用室内苗期接种（6～8 片真叶期）、移栽大田后接种（分枝期）和病圃试验（结果期）3 种方法对四川省主栽的56 个辣椒品种进行疫病抗性鉴定。结果表明，5 个辣椒品种采用3 种鉴定方法均对疫病具有抗性，18 个品种均表现为感病，其余品种由于接种时期和栽培环境不同抗性类型发生变化；相关性分析结果表明，室内苗期人工接种能更准确地反映辣椒在田间的真实抗性水平。     

温室黄瓜钾素含量临界值的模拟

依据温室黄瓜钾素吸收、分配与温度和辐射的关系,建立了基于辐热积的温室黄瓜钾素吸收与分配模型,并利用与之相独立的试验资料进行了检验。结果表明：模型对温室黄瓜钾素总吸收量、根、茎、叶、果实钾素含量的预测结果与1∶1直线之间的R2分别为0.96、0.71、0.78,0.85、0.87。均方根差（RMSE）分别为0.25 g·株-1、0.12%、0.09%、0.04%、0.05%。模型对不同季节温室黄瓜钾素的吸收量和各器官钾素含量的预测值与实测值符合度较高。     

镉对不同类型甜瓜生长的影响及其器官镉含量的差异

为了挖掘抗、耐镉甜瓜种质资源,以野生甜瓜、薄皮甜瓜及厚皮甜瓜为试材,采用盆栽方式研究添加0、50、100 mg · kg~(-1)镉溶液后甜瓜植株生长及器官镉含量差异。结果显示,随着镉浓度加大,植株长势减弱,植株地上部鲜质量及根系鲜质量明显下降。镉在甜瓜器官中的含量依次为根茎叶果实。随着镉处理浓度的增加,镉在甜瓜根、茎、叶、果实中的含量也相应增加。100 mg · kg~(-1)镉浓度下,野生甜瓜根、茎、叶中的镉含量相比薄皮甜瓜和厚皮甜瓜少,但在果实中镉含量却最大;3种类型甜瓜土壤中镉残留量为35.000～80.000 mg · kg~(-1),均远超国家土壤镉含量限量三级土壤标准。野生甜瓜和厚皮甜瓜镉抗性较好;野生甜瓜具有很强的土壤镉移除能力;参试的薄皮甜瓜对镉较敏感。     

砧木和接穗苗龄对顶插接法西瓜嫁接苗生长发育的影响

采用二因素完全随机设计,研究不同砧木和接穗苗龄对顶插接法西瓜嫁接苗成活率、嫁接苗形态指标、叶绿素含量及根系活力的影响。结果发现,随着砧木苗龄的增大,嫁接苗的根系活力均呈先增加后降低的趋势,叶片数、接穗干质量、嫁接成活率、茎粗、叶片叶绿素含量的变化各异;随着接穗苗龄的增大,嫁接苗的嫁接成活率、叶片数、茎粗、接穗干质量、叶片叶绿素含量、根系活力均表现为先增高后降低的趋势。采用隶属函数法综合评价西瓜嫁接苗的质量,发现接穗苗龄9~13d、砧木苗龄11~15 d的西瓜嫁接苗隶属函数值较大,是适合西瓜顶插接法的接穗和砧木最佳苗龄时期。     

叶片切除对番茄扦插苗茎基部糖含量及不定根发生的影响

以番茄品种中杂302 为材料，采用幼苗叶片切除和茎基部水扦插的方法，研究叶片切除对番茄扦插苗茎基部糖含量和不定根发生的影响。结果表明：切除幼苗叶片处理，改变了番茄扦插苗茎基部糖代谢相关酶SUS、CWIN 的活性和相对表达量，显著降低了茎基部葡萄糖、果糖、蔗糖和可溶性总糖的积累水平（P ＜ 0.05），抑制了不定根发生。表明保留适当的叶片数对番茄扦插苗不定根发生有非常重要的促进作用。