pFF对猪卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

探讨了两种不同成分成熟液配方(I:含PMSG、hCG、pFF与II:含FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活发育能力的影响。结果表明:当卵母细胞分别在I和II液中成熟培养42 h后,卵母细胞存活率差异不显著(82.66%∶83.5%)(P>0.05)。对成熟卵母细胞孤雌激活后体外培养结果表明:I成熟培养组的卵母细胞卵裂率低于II成熟培养组(69.44%∶78.38%)(P<0.05)。但两组卵母细胞经144 h培养后囊胚发育率差异不显著(35.0%∶32.04%,P>0.05)。由此可知:采用不含pFF、化学成分已知的成熟液可以满足猪卵母细胞体外成熟和卵母细胞孤雌激活后的正常发育。     

羔羊不同超排方法的筛选及其对卵母细胞体外成熟的影响

旨在比较不同超排方案对羔羊超数效果及其对卵母细胞体外成熟的效果，筛选最佳幼畜超排方案。试验以1～2月龄绵羔羊为研究对象，分为3组，其中2组(方案I和方案II注射激素)为试验超排组，1组为对照组(未注射激素),探究不同超排方法对绵羔羊卵巢的反应性、卵巢的大小及卵母细胞体外成熟的影响。结果表明，6次×12 h间隔、注射总剂量180 U促卵泡素(FSH)的超排方案Ⅱ效果优于4次×12 h间隔、注射总剂量200 U FSH的超排方案Ⅰ,超排方案Ⅱ获得发育卵泡数(348.00±8.25)枚/只优于超排方案Ⅰ发育卵泡数(265.00±6.32)枚/只；体外培养卵母细胞24 h后，超排方案Ⅱ卵母细胞成熟率45.4%优于超排方案Ⅰ卵母细胞成熟率32.2%。研究筛选出6次×12 h间隔、注射总剂量180 U FSH,第1次注射FSH时同时肌内注射330 U PMSG的超排方案为最佳幼畜超排方案。本试验结果为绵羔羊扩展体外受精所需卵子的来源，缩短世代间隔，产生大量优秀后代，加速育种进程等方向的研究奠定一定的理论基础。     

半胱胺对羔羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

实验旨在研究半胱胺对4～8周龄哈萨克羔羊卵母细胞体外成熟和发育能力的影响。在体外成熟培养基中添加不同浓度的半胱胺(0、50、100、200μmol/L),统计卵母细胞卵裂率、囊胚率、成熟率、正常受精率及卵裂和胚泡率,并用SPSS 17.0进行方差分析。结果表明：与空白组相比,添加100μmol/L半胱胺可提高羔羊卵母细胞卵裂率、囊胚率、成熟率、正常受精率、卵裂率及胚泡率(P<0.05),添加100μmol/L半胱胺可提高卵母细胞的正常受精率和滋养层细胞数(P<0.05)。可见,100μmol/L半胱胺可显著改善羔羊卵母细胞的体外成熟、受精和发育能力。     

不同添加成分对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟是胚胎工程中的一项基础性研究。试验比较了不同添加成分对绵羊卵母细胞的体外成熟及其后续发育的影响。分析了EGF不同添加量、FSH∶LH的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明,①添加30ng/mLEGF的成熟率显著高于其他试验组（85.0%VS60.0%,71.7%,72.7%,P〈0.05）,并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;②成熟液中添加FSH1μg/mL,LH5.0IU/mL成熟率最高;③在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显著高于20%小卵泡液的添加组（78.6%VS36.5%,P〈0.01）,显著高于3%小卵泡液的添加组和未添加组（78.6%VS60.0%,67.5%,P〈0.05）。     

不同成熟时间的猪卵母细胞对体外受精的影响及孤雌发育

采用NCSU-37为体外成熟、受精、培养体系,比较不同成熟时间46h、58h和70h的猪卵母细胞对体外受精的影响和孤雌发育。结果显示,猪卵母细胞在体外成熟培养46h、58h和70h后,46h培养组的卵母细胞体外受精后的卵裂率明显低于58h和70h培养组(P<0.05),但囊胚发育率明显高于其他两组(P<0.05)。46h组的孤雌发育率明显高于其他两组(P<0.05),囊胚发育率三组之间无显著差异。表明猪卵母细胞体外成熟培养时间延长,体外受精后的囊胚发育率降低,孤雌发育率相应增加。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外成熟及体外受精卵卵裂率的影响

试验研究了在绵羊体外成熟和体外受精培养系统中分别添加5ng/mL血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精卵的早期发育的影响。结果表明:①与对照组相比,添加5ng/mLVEGF能够显著(P<0.01)提高绵羊卵母细胞的体外成熟率。②在体外受精液中添加5ng/mLVEGF能够显著(P<0.05)提高成熟卵母细胞的卵裂率。研究表明,VEGF对绵羊卵母细胞的体外成熟和受精具有调节作用。     

绵羊体外受精技术条件优化的研究

探讨了卵泡液、受精时间和季节对绵羊卵母细胞体外培养效果的影响。从屠宰场采集羊卵巢,抽取卵巢表面2mm-6mm的卵泡卵母细胞,进行体外成熟培养;卵母细胞成熟后,与处理后的精子共同培养进行受精。结果表明,在卵母细胞成熟培养液中添加绵羊卵泡液（SFF）组的卵裂率和囊胚发育率均优于添加同等浓度的牛卵泡液（BFF）组;受精22、18、12h组的卵裂率分别为64.85%、54.39%、48.72%,受精22h和18h组间差异显著（P〈0.05）,受精22h组和12h组间差异极显著（P〈0.01）。秋季绵羊体外受精的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差异显著（P〈0.05）,但秋季与春季相比差异不显著（P〉0.05）。因此,进行绵羊卵母细胞体外成熟培养时,培养液中添加SFF;受精时,精卵共培养时间为22h的效果较好。在绵羊的繁殖季节秋季进行体外受精较春季和夏季的结果好。     

牦牛卵母细胞的体外成熟、种间受精与胚胎培养

探讨了卵母细胞体外成熟时间、卵母细胞质量、精子准备和受精卵培养体系对牦牛卵母细胞种间体外受精效果的影响。结果表明:牦牛卵母细胞随体外成熟培养时间延长,第一极体排出率增加,囊胚发育率以成熟培养24 h最高;A级卵母细胞种间受精后囊胚的发育率(48.77±3.76)%显著高于B级(32.05±5.24)%和C级(7.54±7.18)%(P<0.05);BO液洗涤离心处理的精子受精后卵裂率(82.53±6.54)%显著高于Percoll液分离精子受精后的卵裂率(67.39±4.50)%(P<0.05),而两者囊胚率差异不显著((42.32±4.13)%vs(35.59±5.62)%,P>0.05);荷斯坦奶牛精子浓度在1×106～5×106/mL范围与牦牛卵母细胞受精效果差异不显著。卵丘细胞、输卵管上皮细胞共培养和SOF液培养种间受精卵,其卵裂率差异不显著,但共培养组的桑葚胚、囊胚和孵化胚发育率均显著高于SOF液培养组。     

淫羊藿苷对小鼠卵泡卵母细胞体外发育与成熟的影响

用在体和离体试验研究淫羊藿苷对小鼠卵母细胞体外发育与成熟的影响。健康雌性小鼠分组灌服0.1、0.3、0.5和0.7 mg/d淫羊藿苷或2、6、10及14 mg/d淫羊藿水提液,并设生理盐水灌服对照组,取连续灌服7d和14d小鼠卵巢卵泡卵母细胞作体外成熟培养与体外受精,统计第一极体(pb I)排出率和受精率。在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中按高(5μg/m L)、中(0.5μg/m L)、低(0.05μg/m L)剂量添加淫羊藿苷,经24 h成熟培养后进行体外受精,观察并记录卵母细胞pb I排出、受精和卵裂情况。结果表明,分别连续灌服淫羊藿苷和淫羊藿水提液后,各组小鼠卵母细胞细胞体外成熟率均有所提高,连续灌服7 d后,淫羊藿苷0.3、0.5和0.7 mg/d组小鼠卵母细胞受精率较对照组显著提高(P0.01);连续灌服14 d淫羊藿水提液6 mg/d组卵母细胞pb I排出率和受精率均显著高于对照组(P0.05)。添加淫羊藿苷低剂量组小鼠卵母细胞体外受精率和卵裂率显著高于对照组(P0.05);pb I排出率虽高于对照组,但无显著差异。本试验表明,连续灌服淫羊藿苷7 d对小鼠卵母细胞体外发育与成熟具有明显的促进作用;体外培养液中添加低剂量淫羊藿苷对小鼠卵母细胞体外成熟和受精具有促进作用,但高剂量反而有抑制作用。     

绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟及孤雌发育影响的研究

本研究探讨绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟和后期发育的影响。实验分为4组,对照组为卵丘-卵母细胞复合体(COCs);裸卵(DO)组;COCs与DO共培养组(CODO);卵丘细胞(CC)与DO共培养组(CCDO)。体外成熟培养18 h后,检测各组卵子成熟质量并进行孤雌发育研究。结果表明:CODO和CCDO组中裸卵活率显著高于DO组(P<0.05),但显著低于COCs组(P<0.05),且COCs组中卵子活率极显著高于DO组(P<0.01);在极体排出率方面,CODO、CCDO和DO3组差异不显著(P>0.05),但是它们都显著低于COCs组(P<0.05)。COCs、CODO、CCDO和DO 4组卵裂率差异均不显著(P>0.05)。然而,DO组的囊胚率显著低于CODO和CCDO组(P<0.05),极显著低于COCs组(P<0.01),但CODO和CCDO 2组中裸卵的囊胚率差异不显著(P>0.05)。总之,无论散在的卵丘细胞还是COCs均能提高裸卵体外成熟及后期发育潜力。     

绵羊不同直径卵泡卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的比较

比较绵羊不同直径卵泡卵子成熟和孤雌胚胎发育的差异性,并对卵母细胞的采集方法进行了改进以获得较小直径卵泡卵子作研究。结果显示:改进的切剖法获得的平均卵母细胞数极显著高于切剖法(7.72 vs 4.93,P<0.01);分组的卵母细胞成熟率(84.93%,67.64%vs38.37%)差异极显著(P<0.01);卵母细胞被孤雌激活后,中等直径组与较大直径组卵裂率(84.92%vs 72.70%)差异显著(P<0.05),桑葚胚率(41.44%vs 35.09%)、囊胚率(21.28%vs 16.68%)差异不显著(P>0.05),较小直径组卵裂率(54.41%)、桑葚胚率(20.11%)、囊胚率(3.7%)差异极显著(P<0.01)。     

卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响

本实验旨在研究有无卵丘细胞对卵母细胞成熟及其胚胎发育能力的影响。实验分别设裸卵组、卵丘细胞与卵母细胞共培养组、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)组(对照组),检测猪成熟卵母细胞的存活率、极体率、孤雌激活后的卵裂率、囊胚率及各组卵母细胞的谷胱甘肽合成相关基因的表达。结果表明:COCs组卵母细胞经体外培养42 h后其存活率最高(95.76%),高于裸卵组(P<0.05)和共培养组(P>0.05);COCs组第一极体排出率为71.77%,高于共培养组和裸卵组(P<0.05);COCs组在后期发育中卵裂率与囊胚率高于共培养组和裸卵组(P<0.05),而共培养组的卵裂率及囊胚率高于裸卵组(P<0.05);与COCs组相比,裸卵组显著下调了GCLM、GCLC的表达(P<0.05),共培养组中GCLM的表达与COCs组无显著差异。研究结果显示,卵丘细胞对卵母细胞的成熟及发育均有显著影响,在卵母细胞成熟过程中,卵母细胞与卵丘细胞的缝隙连接受损会对卵母细胞的成熟效率产生影响,并且在卵母细胞后期发育中,缝隙连接的完整性与否会影响后期发育能力,并可推论出随着卵丘细胞的减少和缝隙连接的破坏,会造成谷胱甘肽合成基因表达降低,从而影响卵母细胞内的谷胱甘肽合成。     

糖对牦牛卵母细胞体外成熟及其发育能力的影响

试验旨在研究不同种类、不同浓度的糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响,进一步探索和优化牦牛卵母细胞培养体系,提高卵母细胞体外成熟和胚胎生产效率。在牦牛卵母细胞成熟液中添加不同浓度（0、5和10 mmol/L）的葡萄糖或蔗糖,培养24 h或预培养2 h后移入无糖培养基中继续培养22 h,统计卵母细胞体外成熟率及体外受精（IVF）后的胚胎卵裂率和囊胚率。结果显示,与对照组（0 mmol/L）相比,5和10 mmol/L葡萄糖组牦牛卵母细胞核成熟率和体外受精胚胎卵裂率均显著提高（P<0.05）,10 mmol/L葡萄糖组的囊胚率最高,且与对照组相比差异显著（P<0.05）。添加10 mmol/L蔗糖可以显著提高牦牛卵母细胞核成熟率（P<0.05）,但胚胎囊胚率与对照组相比差异不显著（P>0.05）。此外,用10 mmol/L葡萄糖预处理牦牛卵母细胞后其核成熟率、胚胎卵裂率和囊胚率最高,且均显著高于对照组（P<0.05）。由此可见,糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育有一定的影响,在成熟过程中添加适当浓度的糖能提高卵母细胞成熟率及体外受精胚胎发育能力。     

FSH对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响

为了探讨绵羊卵母细胞体外成熟过程中促卵泡素(FSH)的适宜添加量,试验将FSH分为0.01,0.02,0.03 IU/mL 3个浓度梯度,用于绵羊卵母细胞的体外成熟与体外受精,统计第一极体排出率、卵裂率和囊胚率。结果表明:不同浓度FSH对第一极体排出率影响差异不显著(P>0.05),体外受精后以0.02 IU/mL组效果最好,卵裂率显著高于0.03 IU/mL组(P<0.05),但与0.01 IU/mL组相比差异不显著(P>0.05);0.02 IU/mL组囊胚率与其他2组相比显著升高(P<0.05)。     

影响绵羊体外受精技术因素的研究

作者对影响卵母细胞体外成熟和体外受精的因素进行研究。结果表明,激素FSH和LH明显促进卵母细胞的体外成熟,且10、20和40μg/m l组成熟率高于5μg/m l组,差异显著;运输温度在28~32℃的成熟率高于22~24℃和35~37℃,差异显著;用BO受精体系卵子卵裂率高于TALP受精体系,差异显著;用绵羊冻精进行体外受精,受精前除去大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞卵裂率高于保留大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞。     

发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响

在动物卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养体系中添加一定浓度的发情牛血清可能提高卵母细胞的成熟率及胚胎的发育率。本研究以屠宰场卵巢来源的绵羊卵母细胞为试验材料,探讨了发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,成熟液中添加10%第1天的发情牛血清能显著提高绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚卵裂率(P＜0.05);孤雌胚体外培养72 h后,向培养液中添加10% 第7天的发情牛血清能显著提高绵羊孤雌胚的桑囊胚率(P＜0.05)。结果表明,发情牛血清能够促进绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚发育率。     

L-肉碱对水牛卵母细胞体外成熟的影响

以水牛为模型,通过探讨L-肉碱(L-carnitine)对水牛卵母细胞体外成熟的影响,同时深入研究添加L-肉碱后卵母细胞抗氧化能力的变化情况,以进一步阐明L-肉碱影响卵母细胞成熟的作用机制。水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在添加有不同质量浓度的L-肉碱(0,1,10,100 mg/L即对照组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组)的成熟液中体外成熟培养24h后,统计卵母细胞第一极体排出率。结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组卵母细胞第一极体排出率分别为(64.44±1.93)%、(66.17±2.76)%和(63.27±1.19)%,与对照组(56.60±1.56)%相比差异显著(P<0.05)。免疫荧光染色观察显示:添加L-肉碱的各处理组的卵母细胞中活性氧的含量显著低于对照组(P<0.05)。同时,利用酶联免疫法测定卵母细胞中脂质过氧化物丙二醛的含量,结果显示Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的卵母细胞中脂质过氧化物丙二醛的含量分别为0.125 797,0.125 217,0.124 155μmol/L,极显著低于对照组(0.142 609μmol/L)(P<0.01)。此外,采用实时荧光定量PCR方法检测卵母细胞周围的卵丘细胞中卵丘扩展相关基因ptx3、has2以及卵母细胞抗氧化相关基因gpx4的表达情况,分析结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组卵丘细胞中has2的表达量均显著高于对照组的表达量(P<0.05),其中以Ⅱ组的最高;而Ⅱ组和Ⅲ组的卵丘细胞中ptx3基因和卵母细胞中gpx4基因的表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上可知,水牛卵母细胞体外成熟液中添加适合质量浓度的L-肉碱能显著提高卵母细胞体外成熟率,推测L-肉碱可以通过提高卵母细胞抗氧化能力来促进卵母细胞的体外成熟。     

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响

为探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)的添加浓度及脱卵丘细胞时间对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响.试验通过在体外成熟液中添加不同浓度(0、10、15、20、30、40 ng/mL)的EGF来研究其对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响;在培养开始后的不同时间(18、24、38、44 h)进行脱卵丘细胞处理来研究不同时间脱卵丘处理对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响.结果表明,成熟培养基中添加10 ng/mL EGF能显著提高卵母细胞的卵裂率和囊胚率(P <0.05).共培组和独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞成熟率均低于44 h,但差异不显著(P >0.05);共培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率和囊胚率显著高于培养44 h(P <0.05);独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率与44 h无显著差异(P >0.05),但囊胚率显著高于培养44 h后脱卵丘细胞(P <0.05).添加10 ng/mL EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育较好;卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞可提高孤雌胚胎早期发育能力.     

西洛酰胺对绵羊卵母细胞核成熟及后期胚胎发育的影响

本实验研究不同浓度西洛酰胺(Cilostamide)对绵羊卵母细胞核成熟的抑制效果,并探讨FSH对Cilostamide抑制效果的影响,以及延迟卵母细胞核成熟对随后胚胎发育能力的影响,旨在探索提高绵羊体外胚胎发育能力的新方法。结果表明:5μmol/L的Cilostamide为较合适的添加浓度,使卵母细胞核成熟延迟约4 h;FSH与Cilostamide对抑制核成熟起到协同作用;5μmol/L Cilostamide处理可使绵羊卵母细胞孤雌激活后囊胚率达到40.4%,显著高于对照组29.0%的囊胚率(P<0.05)。     

褪黑素对猪卵母细胞体外成熟和孤雌胚发育影响的研究

本研究旨在探讨成熟液中不同浓度褪黑素对猪卵母细胞体外成熟质量及其后期发育潜力的影响。试验中,0 mol/L为对照组,猪卵母细胞在不同MT浓度(0、10~(-6)、10~(-9)、10~(-12)mol/L)的成熟液中培养42 h后,通过猪卵母细胞存活率、极体率、卵子内谷胱甘肽(GSH)含量以及胞质内线粒体和脂肪颗粒成熟分布状态等质量指标的评价,探讨成熟液中褪黑素(MT)最佳添加量,再通过孤雌胚体外发育潜力研究,进一步验证该成熟培养体系。结果表明:4组卵子存活率和极体率之间差异均不显著(P0.05);试验组单个卵子中GSH含量均显著高于对照组(P0.05);而且,试验组卵子内脂肪颗粒和线粒体成熟分布等质量指标也显著优于对照组(P0.05);此外,孤雌激活后10~(-6)mol/L和10~(-9) mol/L组卵裂率和囊胚率均显著高于对照组(P0.05)。试验结果证明,在猪卵母细胞体外成熟液中添加10~(-9)mol/L~10~(-6)mol/L的MT,可显著提高卵子成熟质量及后期发育潜力。