伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜Acyrthosiphon pisum Harris生物活性的研究

蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白水解酶活性的小分子蛋白质,在昆虫肠道内通过抑制蛋白酶的活性,可以干扰昆虫的正常生长和发育。本文利用体外重组表达的蛋白酶抑制剂Xbpi-1,研究了Xbpi-1对豌豆蚜Acyrthosiphon pisum Harris的杀虫活性及其生化机制。结果表明,取食含蛋白酶抑制剂Xbpi-1浓度为50、200、400、800μg·mL^-1人工饲料的豌豆蚜,96h后的校正死亡率分别为2．1％、9-4％、19．7％和50．9％,虫重分别减少12_3％、20．3％、25．7％和33．7％。生化测定结果表明,4种浓度处理的豌豆蚜体内总蛋白酶、氨肽酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的活性均有显著降低,浓度为800μ·mL^-1时,其酶活性分别降低了29．6％、26．1％、23．5％和23．8％。本研究结果说明,蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜具有较好的生物活性,为进一步开发应用于豌豆蚜等刺吸式害虫的防治提供了理论依据。     

额河银鲫食性的初步研究

对额河银鲫的食性和年龄与生长关系进行了调查研究。结果表明：额河银鲫是一种杂食性鱼,它的主要食物组成是藻类、水生植物、原生动物、水生混虫、轮虫以及小鱼等。在食物成分上有性变化。在春季和夏季主要摄性食物而秋季主要摄食动物性食物。     

甲氰菊酯对斑马鱼的毒性效应

选用模式生物斑马鱼(Brachydanio rerio)作为毒性实验动物,探索甲氰菊酯(fenpropathrin)对鱼类的毒性效应,为农业生产和环境保护提供参考数据。结果显示甲氰菊酯对斑马鱼成鱼96h LC50为3.38×10-3mg/kg,属于剧毒级,安全浓度为0.34×10-3mg/kg;较低浓度下甲氰菊酯对斑马鱼早期发育影响不显著,在较高浓度1、10mg/kg下,斑马鱼96h畸形率分别达到84%和90%,心包囊肿率分别为25%和88%,而致死效应不明显。亚致死剂量下甲氰菊酯对斑马鱼肝胰脏GPT、GOT、SOD活性有明显诱导效应,在高浓度和长时间暴露下诱导效应降低;肝胰脏中AChE活性显著地受到甲氰菊酯的抑制,抑制效应对毒物的浓度和染毒时间有良好的依赖性,是一种良好的环境污染检测生物学指标。     

产抗菌蛋白芽孢杆菌的筛选及抗菌蛋白性质

对小麦赤霉病菌（ＪＦ－１２）有拮抗作用的７６个芽孢杆菌菌株中有３０个能产生抗菌物质。根据无细胞培养滤液对氯仿和热处理的稳定性将３０个菌株分成三类。属于类型Ｉ的１４个菌株中，Ｂ３、Ａｎｔ－２７和Ａｎｔ－６４的抗菌物质可以被８０％饱和度硫酸铵沉淀，不能通过透析膜。Ｂ３的粗提抗菌蛋白对胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和ＲＮＡ酶均不敏感；在ｐＨ５．０￣１０．０范围内，抑菌活性与对照无显著差别；热处理（６０℃／３０ｍｉｎ     

江苏沿海对虾死亡的病原学研究

本课题对1993、1994年我国养殖对虾暴发性死亡进行了病原学研究。从发病对虾体内分离到3种弧菌;病理切片发现肝胰脏细胞浆中有椭圆形包涵体;超薄切片显示发病对虾肝胰脏中有大量长300nm左右,宽60nm左右的杆状病毒,包涵体中有许多完整的杆状病毒及无核酸的杆状空壳;差速离心样品沉淀中有杆状病毒;NP—40处理后蔗糖垫离心,负染后可见脱去套膜的杆状核衣壳;肝胰脏样品离心取上清,分子筛分离,电镜下见到纯化的杆状病毒。回归试验证明,3种弧菌对对虾均不致病,纯化病毒及除菌样品和未处理样品均引起对虾死亡。试验中还发现,攻毒过程中通气对发病过程有显著的延缓作用。     

pH值和贮藏温度对球形芽孢杆菌杀蚊活性和芽孢活性的影响

在球形芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）悬乳剂的生产和应用中，由于制剂的ｐＨ不合适，会导致制剂发生二次发酵，产生异味和杀蚊活性下降。本文考查了不同ｐＨ值和贮藏温度（室温和４℃）对球形芽孢杆菌杀蚊活性和芽孢活性的影响，确定了制剂的最佳贮藏条...     

重寄生真菌盾壳霉胞外蛋白酶产生条件及酶活影响因子

重寄生真菌盾壳霉Coniothyrium minitans是核盘菌Sclerotinia sclerotiorum的重要生防菌。为了探讨盾壳霉胞外蛋白酶在寄生核盘菌过程中的作用,采用明胶平板法对盾壳霉寄生核盘菌菌核产生的蛋白酶活性进行了检测,并进一步采用福林酚法定量测定蛋白酶活性,研究盾壳霉产生胞外蛋白酶的培养条件及影响蛋白酶活性的因子。试验结果表明,在被盾壳霉寄生的核盘菌菌核中检测到蛋白酶活性,表明蛋白酶可能参与盾壳霉重寄生作用。发现核盘菌菌核浸出液培养基适合盾壳霉产生胞外蛋白酶,摇培(20℃、200r/min)5d时蛋白酶活性最高,达到0.22U/mL。盾壳霉胞外蛋白酶酶促反应的最适温度为60℃,最适pH7.0。当温度不高于40℃时,蛋白酶酶活较稳定。5mmol/L的金属离子Mg²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺、Cu²⁺、Mn²⁺、Li⁺和K⁺等对蛋白酶酶活没有显著影响(P>0.05),而Fe²⁺(5mmol/L)显著(P<0.05)提高了蛋白酶活性。盾壳霉蛋白酶对苯甲基磺酰氟(PMSF)敏感,说明盾壳霉产生的胞外蛋白酶可能主要是丝氨酸蛋白酶。这些结果为盾壳霉胞外蛋白酶的分离纯化和功能研究奠定了基础。     

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素１前言目前已研究出测定苏云金杆菌（Ｂ，ｔ．）δ－内毒素晶体蛋白含量的可靠方法。此方法首先用高ｐＨ溶液处理样品以抑制Ｂ．ｔ蛋白酶，再用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法，从生长基质蛋白...     

三种幼虫外寄生蜂蛋白酶含量与离体培养饲料的关系

在离体培养幼虫外寄生蜂过程中，发现不同的蜂对饲料中的蛋白质及游离氨基酸的含量有不同的要求，本文对麦蛾茧蜂（Ｂ．ｈｅｂｅｔｏｒ），矛茧蜂（Ｏ．Ｐｌａｌｉａｔｕｓ），管氏肿腿蜂（Ｓ．ｇｕａｎｉ）的蛋白酶活性，饲料中蛋白质及游离氨基酸含量进行了测定．实验表明：蛋白酶含量低的蜂，饲料中含高游离氨基酸及低蛋白；蛋白酶含量高的蜂，饲料中含低游离氨基酸及高蛋白。     

红蓼拒食活性组分的分离及其对小菜蛾幼虫消化酶活性的影响

为了进一步评价红蓼（Polygonum orientale L．）的抗虫性,采用液一液分配萃取和硅胶柱层析的方法,从红蓼甲醇提取物中分离获得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水的萃取物,测定了其对小菜蛾（Plutella xylostella）3龄幼虫拒食活性。结果显示,乙酸乙酯萃取物比其他4种萃取物具有更高的拒食活性,在5．0mg／mL下,24h和48h的拒食率分别为68．42％和62．55％。乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析后,得到13个组分,比较13个组分的拒食活性发现,组分8的活性较高,在浓度为2．5mg／mL时,24h和48h的拒食率分别为77．13％和68．53％。组分8对小菜蛾幼虫体内的蛋白酶、脂肪酶和α-淀粉酶的活性具有一定的抑制作用。     

Roles of flavoproteins in degradation of mexacarbate in rats

The nature of a reductive system which actively degrades mexacarbate in the rat intestine and liver was investigated. The system is characterized by its stability against heat and protease treatments and its requirements for a flavin cofactor and an acidic pH for a maximum activity. As a result of purification and spectroscopic identification attempts the system responsible for the above reductive activity was identified to be flavoprotein. Under anerobic conditions such flavoproteinflavin cofactor systems degrade mexacarbate first to 4-N-desmethylmexacarbate and then to polar water-soluble metabolites.     

Changes induced by phorate in the carbohydrate metabolism of the snail Lymnaea acuminata

Carbohydrate metabolism was studied in the hepatopancreas, mantle, intestine and foot of the snail Lymnaea acuminata, exposed to 40% and 80% of the LC₅₀ dose of phorate (12 and 24 mg litre^?1, respectively) for 24 and 48 h. Following treatment with the pesticide, the rate of oxygen consumption and the glycogen contents were reduced, while the levels of lactic acid and reducing sugars were enhanced. Withdrawal of the pesticide for 7 days after exposure of the snails to 12 mg of phorate litre^?1 for 48 h did not reverse these changes.     

纤细齿梗孢丝氨酸蛋白酶cDNA克隆及其序列分析和表达

纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum是一种寄生在轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides上的活体营养菌寄生真菌。丝氨酸蛋白酶在菌寄生过程可能起到重要作用。根据丝状真菌丝氨酸蛋白酶的同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及RACE的方法,克隆得到1845bp的全长cDNA片段。其可读框为1554bp（GenBank登录号为EU368754）,编码517个氨基酸的蛋白质。比对分析发现该蛋白是一种分泌型的丝氨酸蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶S8家族的枯草杆菌蛋白酶subtilisin,具有典型的信号肽-前肽-成熟肽的结构。将该基因可读框除去信号肽插入酵母表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母Pichia pastoris GS115,在甲醇诱导下成功分泌出具有生物活性的重组蛋白酶,诱导120h后酶活性可达153U/ml。重组蛋白酶经DEAE-Sepharose层析进行纯化,SDS-PAGE分析其分子量为39kD。其反应的最适温度为60℃,最适pH为8。     

鸦胆子提取物对菜青虫幼虫蛋白酶活性和蛋白质含量的影响

鸦胆子氯仿和乙酸乙酯提取物对菜青虫幼虫蛋白酶的活性和蛋白质含量均有明显影响。测定结果表明,在10 mg/mL浓度处理下,氯仿和乙酸乙酯提取物处理8～20 h蛋白酶比活力均明显低于对照组。24 h时氯仿提取物的蛋白酶比活力(0.306 92μg/mg.min)为对照组(0.187 75μg/mg.min)的1.634 3倍;乙酸乙酯提取物的蛋白酶比活力(0.100 06μg/mg.min)为对照组(0.390 12μg/mg.min)的0.256 5倍。24 h时氯仿提取物的蛋白质含量(44.403 mg/mL)为对照组(81.457 mg/mL)的0.5 451倍;乙酸乙酯提取物的蛋白质含量(64.500 mg/mL)为对照组(205.495 mg/mL)的0.3 139倍。     

Glucose metabolism in hepatopancreas and gill of Lamellidens marginallis during methyl parathion toxicity

Changes in glucose metabolism were studied in hepatopancreas and gill of freshwater mussel, Lamellidens marginalis, exposed to a sublethal concentration (8 ppm) of methyl parathion. A slight decrease in glycogen and pyruvate and an increase in lactate levels were observed. An increase in phosphorylase and aldolase suggested increased formation of trioses during methyl parathion toxicity. The decrease in lactate dehydrogenase activity and increase in lactate content indicated reduced mobilization of pyruvate into the citric acid cycle. Glucose-6-phosphate dehydrogenase activity was increased, suggesting enhanced oxidation of glucose by the HMP shunt pathway. Citric acid cycle enzymes such as isocitrate, succinate, and malate dehydrogenases were found to be decreased, suggesting abnormality in mitochondrial oxidative metabolism as a consequence of methyl parathion toxicity. The decreased cytochrome c oxidase and Mg²⁺-ATPase, apart from citric acid cycle enzymes, indicated impaired energy synthesis as a result of reduced aerobic oxidation of glycose. The increase in acid and alkaline phosphatase activities suggested enhanced breakdown of phosphate to release energy in view of inhibition of the ATPase system during methyl parathion stress. The changes were more pronounced in hepatopancreas as compared to gill of mussel exposed to methyl parathion.     

软腐欧氏杆菌的蛋白酶与致病作用的关系

 胡罗卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora var.carotovora Dyc)在合成培养基MS中产生两种蛋白酶,但在无细胞滤液中测不到果胶裂解酶和果胶水解酶的活性。用等电聚焦电泳测得这两种蛋白酶都是碱性蛋白酶,等电点分别为8.3和8.9。变性温度为49-50℃,对酸或碱具有较高的稳定性。纯化的蛋白酶单独作用马铃薯块、能使其变软,切片观察表明细胞壁被明显降解。通过滤膜结合法,将供体菌1830/pJB4J1::Tn5的转座子转入到野生型StEcc-12中,从2000个接合子中获得了11个缺少产蛋白酶能力的突变体。这些突变体的分泌性蛋白质等电聚焦图谱与野生型菌株明显不同,其中一个变突体蛋白酶带完全缺失,另外一个则出现8条新的蛋白带,其他5个属部分缺失。这些突变体对马铃薯块组织离析、腐烂的能力都有不同程度的减弱。研究结果认为在由胡罗卜软腐欧氏杆菌引起的软腐病程中蛋白酶和果胶酶是协同作用的,果胶酶降解植物细胞间和胞壁中的果胶质,而蛋白酶则降解植物细胞壁和膜中的蛋白质。     

生防芽孢杆菌T2胞外蛋白酶的纯化及其抗真菌作用

 从小麦根际土壤中分离到一株高产蛋白酶并对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f sp.vasinfectum)具有拮抗作用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T2。采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow、SP Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析,从T2发酵液中分离纯化出一种分子量约为29.0kD的蛋白酶。该酶作用的最适温度为65℃,最适pH为8.0,在低于50℃、pH5.0-7.5范围内较稳定。Na⁺、K⁺Pb²⁺、EDTA对酶有激活作用,Ca²⁺、Ba²⁺、Al³⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、Hg²⁺、SDS对酶有部分抑制作用,而PMSF可完全抑制酶活,推测该酶是一种丝氨酸蛋白酶。抗菌活性显示,该酶对棉花枯萎病菌的孢子萌发、菌丝生长有明显抑制作用。     

大豆斑疹病菌羧基蛋白酶前体基因的功能分析

 大豆斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv. glycines,Xag)具有强烈的胞外蛋白酶活性,然而编码其羧基蛋白酶前体(xanthomonappepsin precursor,Xpp)的xpp基因是否参与Xag的蛋白酶活性与致病性,并不清楚。为了阐明Xpp的作用,通过同源重组技术获得了Xag的xpp基因缺失突变体(NΔxpp),并对其功能进行研究。研究表明:该突变体在寄主大豆上的生长能力和致病力相对于野生型均显著降低;功能互补恢复NΔxpp的植物表型至野生型水平。蛋白酶实验表明,NΔxpp胞外蛋白酶活性相对于野生型并无变化;而且xpp基因异源表达也不具有蛋白酶活性。qRT-PCR结果显示,DSF(diffusible signal factor)信号通路及Clp(Crp-like protein)显著负调控xpp基因的转录表达;与大豆汁液互作时xpp基因受诱导表达,并受HrpX和HrpG正调控。这些结果说明:xpp基因不参与Xag的蛋白酶活性,但其是病原菌在寄主大豆上具有致病力所需的。     

小麦纹枯病菌胞外蛋白酶致病机理的研究

 将小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis Vander Hoeven)产生的一种类胰蛋白酶作用于小麦细胞壁,经测定酶作用后底物中的蛋白含量及产物中羟脯氨酸含量的变化,证明了该酶能够降解寄主细胞壁结构蛋白。电镜观察该酶对活体小麦组织超微结构影响的结果显示,该酶能够降解细胞中的膜蛋白。活体内蛋白酶活性检测结果表明,小麦纹枯病菌在小麦组织内还能产生类胰蛋白酶之外的其它蛋白酶。     

银鲫消化道的组织形态学和组织化学

本文对银鲫消化道结构进行了组织学和组织化学的观察。研究结果表明，该杂食性硬骨鱼的咽后消化道是由食道，小肠前部，小肠后部组成。消化道组织分层为粘膜层，粘膜下层，肌层及外膜。食道前侧区粘膜上皮主要由鳞状上皮细胞组成，上皮表层分布有微嵴和味蕾。食道后侧区粘膜上皮由柱状细胞和粘液细胞组成。