醋酸铅对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡基因p53、Bax、Bc1-2表达的影响

将40只未成年雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只.处理组小鼠分别连续2 d腹腔注射铅10、20、40 mg/kg(按体质量给药),对照组小鼠注射等体积的生理盐水.于注射后24、72 h分离卵巢,用原位末端标记法(TUNEL)测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,同时用半定量RT-PCR方法检测凋亡基因p53、Bax、Bc1-2mRNA表达.结果表明,铅可促进颗粒细胞凋亡,且随剂量的增加和作用时间的延长,颗粒细胞中p53、Bax基因表达量逐渐增加,与对照组相比差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);而Bc1-2基因表达量则逐渐减少(P<0.05或P<0.01);表明铅可通过上调促细胞凋亡基因p53、Bax基因表达量,下调Bc1-2基因表达量,诱导卵巢颗粒细胞的凋亡.     

氯丙嗪对大鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

本试验旨在通过氯丙嗪对颗粒细胞凋亡影响的研究,探讨氯丙嗪对雌性大鼠性腺毒性的作用机制。对未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的氯丙嗪(0、0.1、1、10 μmol/L)染毒细胞,细胞培养24 h。染毒结束后采用MTT法检测细胞相对活力,荧光染料Hoechest 33258检测颗粒细胞的凋亡变化,RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2和P53 mRNA的表达。在本试验所设置的剂量范围内,与对照组比较,氯丙嗪能极显著促进颗粒细胞凋亡(P＜0.01),呈浓度依赖关系;RT-PCR检测则显示氯丙嗪能引起Bcl-2、Bax、P53 mRNA表达水平和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA值升高,除低剂量组的Bax mRNA表达水平和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA值无明显改变外,其余各组与对照组相比均差异极显著(P＜0.01)。氯丙嗪可显著抑制大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导颗粒细胞凋亡。     

玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢组织Bax和Bcl-2的表达

10周龄SD大鼠单剂量腹腔注射5mg／kg玉米赤霉烯酮玉米油溶液，分别于3、6、12、24、48h时剖杀取卵巢组织，检测不同时间卵巢组织Bax和Bcl-2的表达。结果显示，病理组织学观察发现卵巢组织出现不同程度损伤，卵泡颗粒细胞发生凋亡。免疫组化SP法试验组与对照组卵巢组织中均有Bax和Bcl-2的表达，并且随着时间的推进呈现动态变化。Bax在3、6、12h时表达量上调，表达量与对照组比较差异显著（P〈0．05），24、48h时表达量下降，与对照组比较差异不显著（P〉O．05）。3～48h卵巢组织中Bcl-2表达量与对照组比较差异不显著（P〉0．05）。结果表明，大鼠玉米赤霉烯酮中毒可引起卵巢组织的病变及颗粒细胞凋亡，且Bax在玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢颗粒细胞凋亡中起着重要作用，Bcl-2的作用不明显。     

T-2毒素对大鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

将未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的T-2毒素染毒细胞24 h.染毒结束后,采用MTT法检测细胞相对活力,荧光染料Hoechst 33258检测卵巢颗粒细胞的凋亡变化,RT-PCR检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax和P53 mRNA的表达.结果显示,随着T-2毒素染毒剂量的增加,颗粒细胞的细胞活力逐渐下降;而细胞凋亡率、Bcb2、Bax、P53 mRNA表达水平、Bax mRNA/Bcl-2 mRNA比值则逐渐上升;除1 nmol/L剂量组外,其余各剂量组与对照组比较差异显著(P＜0.05).结果表明,T-2毒素可显著抑制大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导颗粒细胞凋亡,并呈浓度依赖关系.     

Bcl-2基因RNA干扰对体外培养的鹅卵泡颗粒细胞凋亡、增殖和孕激素分泌的影响

根据已发表的Bcl-2基因序列设计3对siRNA（Small interference RNA）序列，构建干扰表达载体，转染体外培养的鹅卵泡颗粒细胞，48h后利用流式细胞术（Flow cytometry，FCM）检测颗粒细胞Bcl-2蛋白表达量、凋亡和增殖情况，收集细胞培养液用放射免疫分析法检测孕激素（P）的分泌水平；此外，还检测了F1～F4卵泡、最小的排卵前卵泡（The smallest preovulatory follicle，SPF）、小黄卵泡（Small yellow follicle，SYF）和闭锁卵泡（Atresic follicle）颗粒细胞Bcl-2蛋白表达和凋亡情况。结果表明：（1）各级卵泡颗粒细胞Bcl-2蛋白的表达存在着差异，正常卵泡颗粒细胞Bcl-2蛋白表达量显著高于闭锁卵泡（P〈0．05），SPF颗粒细胞Bcl-2蛋白表达水平显著高于SYF（P〈0．05）；（2）干扰组Bcl-2蛋白表达水平显著低于所有对照组（P〈0．05），而细胞凋亡指数（Apoptosis index，AI）、增殖指数（Proliferation index，PI）和P分泌水平均高于对照组。     

醋酸铅对小鼠卵巢组织结构和卵巢颗粒细胞凋亡的影响

将40只20日龄雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只。给3个处理组小鼠分别连续2d腹腔按体质量注射醋酸铅10,20,40mg/kg,对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后24,72h分离卵巢,用原位末端标记法(TUNEL)测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,研究卵巢组织结构及卵巢颗粒细胞凋亡的变化。结果显示,醋酸铅可使小鼠卵巢组织结构发生病变,加速卵巢颗粒细胞的凋亡,且凋亡率随着攻毒剂量的增加和时间的延长而升高,与对照组相比,差异极显著(P0.01);表明醋酸铅对小鼠卵巢具有毒性作用,可诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡,并呈现一定的剂量-时间依赖关系。     

黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡相关基因表达的影响

为探讨黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,本试验通过向大鼠睾丸间质细胞的体外培养体系中添加终浓度为20μg/m L的黄芪提取液,利用荧光定量PCR技术研究黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达量的影响。结果:添加终浓度为20μg/m L黄芪提取液的实验组与不添加黄芪提取液的对照组相比,间质细胞内Bax基因表达量显著降低(P0.01),Bcl-2基因表达量无显著差异,Bax/Bcl-2比值显著下降(P0.05)。结论:黄芪在一定程度上能够通过抑制凋亡基因Bax的转录,抑制大鼠睾丸间质细胞凋亡。     

2种锌源对体外培养胸腺细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的影响

采用地噻咪松作为诱导剂,建立小鼠胸腺细胞体外培养的凋亡模型,培养基中分别补加1 000μmol/L的硫酸锌或蛋氨酸锌,培养16 h.测定细胞的凋亡率、DNA片段化以及Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达量.结果表明,地噻咪松显著提高体外培养腺细胞凋亡(P＜0.01),并上调Bcl-2、Bax、Caspase-3 3种基因的mRNA表达(P＜0.01).硫酸锌和蛋氨酸锌对地噻咪松诱导的凋亡均有显著的抑制作用(P＜0.01),并对上述3种基因表达的上调有抑制作用(P＜0.01).蛋氨酸锌处理的细胞凋亡率及Caspase-3 mRNA表达均高于硫酸锌处理,Caspase-3mRNA表达量差异达到了显著水平(P＜0.05).这表明,锌调控糖皮质激素诱导的细胞凋亡涉及到对基因转录水平的调节,2种锌源在一定程度上存在着差异.     

银杏叶提取物对大鼠大脑皮质中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达量的影响

为探讨银杏叶提取物（EGb）对去卵巢大鼠神经细胞的保护作用及其机制，采用免疫组织化学SP法检测了假手术大鼠、去卵巢大鼠和去卵巢后用EGb治疗大鼠的大脑皮质中凋亡相关蛋白Bcl～2和Bax的表达量。结果，与假手术大鼠相比，摘除双侧卵巢的大鼠大脑皮质中Bcl-2阳性细胞的数目和表达强度极显著下降（P〈0．01），Bax阳性细胞的数目和表达强度极显著增加（P〈0．01）；用EGb对摘除双侧卵巢的大鼠治疗后，其Bcl-2阳性细胞的表达强度极显著增加（P〈0．01），而Bax阳性细胞的数目极显著下降（P〈0．01），Bax阳性细胞的表达强度也显著下降（P〈0．05）。结果表明，摘除双侧卵巢后大鼠因缺乏内源性雌激素而导致大脑皮质中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达量发生了改变，而EGb能通过上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达对神经细胞起保护作用。     

过表达和干扰GDF9基因对番鸭颗粒细胞凋亡和周期的影响

实验旨在探究生长分化因子9(Growth Differentiation Factor,GDF9)基因对番鸭颗粒细胞的影响，本研究构建了GDF9过表达载体（pEX-2-GDF9）以及干扰GDF9小RNA (siRNA-GDF9-530、siRNAGDF9-978、siRNA-GDF9-1320)，分别转染至原代番鸭颗粒细胞内，通过流式细胞术检测GDF9基因对细胞周期和凋亡的影响；荧光定量PCR技术检测转染后颗粒细胞周期和凋亡相关基因的表达量。结果显示，过表达GDF9基因将番鸭颗粒细胞阻滞在G0/G1期，S期细胞极显著减少，且Bax基因和Caspase-3基因表达量极显著（或显著）上调，说明过表达GDF9促进了颗粒细胞凋亡；干扰GDF9基因表达后，G0/G1期细胞极显著减少，S期细胞极显著增加，且CDK-2、Bcl-2、CCND1 mRNA极显著上调，CCNE1 mRNA显著上调。综上可知，GDF9基因表达促进颗粒细胞凋亡、抑制细胞周期进程。该结果可为番鸭的卵泡发育机制研究提供理论基础。     

Dynamics of apoptosis-related gene expression during follicular development in yak

The potential reproduction power of domestic animals is limited by a complicated follicular atresia process. P53, caspase-9 (Casp9), Bax, Bcl-2 and Fas play a crucial role in the ovarian mitochondrion-dependent apoptosis and death receptor pathway. In accordance with this study, the expression levels of Casp9, Bax, Bcl-2 and Fas were analysed in ovaries and oviducts of yak by immunohistochemistry (IHC). P53 and the above in ovarian granulosa cells (GCs) from atretic (3–6 mm) to healthy follicles (6–8 mm) and in oviducts were examined from the luteal phase to the follicular phase during the oestrous circle by Western blot (WB) and real-time PCR (RT-PCR). Results demonstrated that typical classic apoptotic factors Casp9, Bax, Bcl-2 and Fas were expressed in the cytoplasm and zonal pellucida of oocytes, primordial follicles, primary follicles, ovarian surface epithelium, ovarian GCs, granular lutein cells, surface epithelia in oviduct uterotubal junction and oviduct ampulla during the luteal phase. RT-PCR and WB revealed that P53 and Fas significantly increased in GCs of atretic follicles. P53 and Casp9 increased in oviduct epithelium during the luteal phase, but Fas was unchanged. A contrary tendency was noted in Bcl-2 and Bax expression. Overall, P53 and Fas play an essential role in inducing GC apoptosis, and Bax, Bcl-2, Casp9 and P53 are involved in oviduct epithelial regeneration in yak.     

玉米赤霉烯酮对Leydig细胞凋亡及caspase-9、caspase-3蛋白表达的影响

以不同浓度的玉米赤霉烯酮（Zearalenone,zEA）对大鼠睾丸间质细胞（Leydig）细胞进行染毒,采用噻唑蓝比色法观察了ZEA对Leydig细胞活力的影响;流式细胞术分析检测了ZEA对细胞的凋亡率、线粒体膜电位变化的影响;Westernblotting等技术检测了Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP蛋白的表达情况。结果显示,ZEA可明显抑制睾丸Leydig细胞的活力（染毒各组与对照组比较P〈0．05）,40mg／L染毒组相对活力为40．67％;与对照组比较,5、10、20mg／LZEA染毒组睾丸Leydig细胞凋亡率均极显著升高（P〈0．05）,呈明显剂量关系;线粒体膜电位变化测定显示,各染毒组与对照组比,线粒体膜电位均下降（P〈0．05）,且有明显的剂量关系;Westernblotting分析显示,与对照组比较,5、10、20mg／LZEA染毒组Bax、caspase-9、caspase-3、PARP蛋白表达均上调,bel-2蛋白表达均下调。结果表明,ZEA能诱导大鼠睾丸间质细胞发生凋亡,Bax、Bcl-2、caspase-9、caspase-3等基因参与ZEA诱导Leydig细胞凋亡的调控。     

N-乙酰L-半胱氨酸预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护机制

制备大鼠局灶性脑缺血再灌注实验模型,通过N-乙酰L-半胱氨酸（NAC）预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用,探索脑梗死病理过程及药物治疗途径。NAC预处理21d,利用栓线法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,造模后24h进行神经症状评分,TTC染色,检测血浆MDA、GSH含量,观察大脑皮质细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果显示,通过神经症状评分和TTC染色判定大鼠局灶性脑缺血实验模型建立成功。与对照组相比,NAC预处理组（100mg·kg^-1）大鼠血浆中MDA含量显著降低（P〈0.05）,GSH含量显著升高（P〈0.05）;NAC模型组细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值明显低于对照组。结果表明,NAC通过改善氧化应激状态,调控凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达,从而对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。     

Comparison of effects of leptin and ghrelin on porcine ovarian granulosa cells

The aim of our studies was to compare the roles of leptin and ghrelin in the direct control of proliferation, apoptosis, and secretory activity by porcine ovarian cells. In our in vitro experiments, we analyzed the effects of leptin and ghrelin treatments (at 0, 1, 10, or 100 ng/mL medium) on the accumulation of proliferation-related peptides (PCNA, cyclin B1, MAP kinase [MAPK]) and apoptosis-associated peptides (Bax, caspase 3, p53), and on progesterone secretion by cultured porcine granulosa cells, using immunocytochemistry, SDS PAGE-Western immunoblotting, and radioimmunoassay (RIA). Leptin stimulated proliferation (PCNA, cyclin B1, MAPK), apoptosis (Bax, p53), and progesterone secretion. Ghrelin promoted proliferation (PCNA, cyclin B1, MAPK) and progesterone secretion but suppressed apoptosis (Bax, caspase 3, p53). These observations suggest that both leptin and ghrelin directly control proliferation, apoptosis, and secretory activity by porcine ovarian cells. At the level of the ovary, in contrast to the hypothalamo-hypophysial system, leptin and ghrelin may have similar action in promoting granulosa cell proliferation and progesterone secretion, but they may be antagonistic to one another (leptin, stimulator; ghrelin, inhibitor) in controlling apoptosis.     

双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响

观察双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响,为临床预防和治疗糖尿病及其并发症提供理论参考。通过链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）结合高糖高脂饮食诱导构建2型糖尿病（type 2diabetes mellitus,T2DM）大鼠模型,糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组（diabetes model control,DMC）、低剂量骆驼奶组（2ml/d）（low camel milk,LCM）、高剂量骆驼奶组（5ml/d）（high camel milk,HCM）和盐酸二甲双胍组（200mg/kg）（metformin hydrochloride,MTH）,每组12只,另设正常对照组（control group,C）。建模成功后,试验组处理4周后检测大鼠空腹血糖（FPG）浓度变化;采用苏木精-伊红（HE）染色方法检查肾脏组织的病理变化;采用荧光定量Real time-PCR法检测Bax（Bcl2-associated X protein,Bax）、Bcl-2（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）、细胞凋亡蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3）和核转录因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）mRNA的表达丰度;采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法观察肾脏组织凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果显示,与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠FPG浓度均显著下降（P〈0.01）,LCM组大鼠胰岛素敏感性指数（ISI）显著升高（P〈0.01）;HE染色显示DMC组肾小球体积增大,囊腔变小,肾小球内出血严重,而LCM、HCM、MTH组肾小球体积、囊腔间隙较正常,肾小球出血明显减少;Bax mRNA和NF-κB mRNA在DMC组中表达量最高,Bcl-2mRNA和Caspase 3mRNA分别在LCM组和HCM组有较高的表达量;与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠肾脏细胞Bax蛋白表达减低,Bcl-2蛋白表达升高。结果表明,双峰驼奶能显著降低糖尿病大鼠肾脏损伤,抑制其细胞凋亡,对糖尿病及其并发症的治疗发挥有效作用。     

干扰和过表达BAMBI基因对猪卵泡颗粒细胞表型和功能的影响

为研究转化生长因子-β（TGF-β）信号通路中的骨形态发生蛋白和激活素膜结合抑制剂（bone morphogenetic protein and activin membrane-bound inhibitor,BAMBI）基因对猪卵泡颗粒细胞的调控作用,本研究设计构建BAMBI干扰和过表达载体,并将构建好的干扰（pSIREN-BAMBI-sh1、pSIREN-BAMBI-sh2、pSIREN-BAMBI-sh3）和过表达（pcDNA3.1-BAMBI）重组质粒转染猪卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR技术进行有效片段的筛选,并对TGF-β信号通路下游基因（TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、SMAD1、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD5）和细胞凋亡基因（Bax、Bcl-2）mRNA的表达水平进行检测。最后,用MTT法和流式细胞术检测BAMBI干扰和过表达对卵泡颗粒细胞增殖及凋亡的影响。结果表明,BAMBI干扰和过表达载体成功构建,pSIREN-BAMBI-sh2抑制BAMBI表达的效果最好,干扰效率最高。干扰BAMBI时,TGF-βRⅡ表达量显著上升（P<0.05）,使得SMAD2、SMAD3的表达量显著上升（P<0.05）;过表达BAMBI时,TGF-βRⅡ表达显著下降（P<0.05）,使得SMAD2、SMAD3的表达量显著下降（P<0.05）;上调BAMBI可显著抑制猪卵泡颗粒细胞增殖,极显著促进猪卵泡颗粒细胞凋亡（P<0.01）。研究结果表明,BAMBI基因显著影响猪卵泡颗粒细胞的生长发育,可能通过调节TGF-β信号通路间接影响猪的繁殖性能。     

谷氨酰胺及其二肽对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

本试验通过建立过氧化氢(H2O2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究谷氨酰胺(Gln)、甘氨酰谷氨酰胺(Gly-Gln)和丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)对凋亡细胞的凋亡率及Bcl-2、Bax基因表达量的影响。选用60日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,采用不同浓度[0(对照组)、100、400、800μmol/L]的H2O2培养细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。传代瘤胃上皮细胞分为5组,对照组和1组分别添加0、800μmol/L H2O2,2组、3组、4组均添加800μmol/L H2O2,同时分别添加17.28 mmol/L Gly-Gln(2组)、16.0 mmol/L Gln(3组)、16.0 mmol/L AlaGln(4组),应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-2、Bax基因表达量。结果显示:1)与对照组相比,当H2O2浓度增加到800μmol/L时,早期凋亡的凋亡率显著增加(P0.05),而晚期凋亡的凋亡率随着H2O2浓度的增加呈现增加后减少的趋势,但相对于对照组,都呈显著增加(P0.05)。2)与对照组相比,4组晚期凋亡的凋亡率显著增加(P0.05),试验组早期凋亡的凋亡率均显著增加(P0.05)。3)与对照组相比,试验组Bcl-2/Bax均显著增加(P0.05);与1组相比,2组、3组和4组Bcl-2/Bax均显著增加(P0.05),且2组显著高于3组、4组(P0.05)。综合得出,Gly-Gln对H2O2引起山羊瘤胃上皮细胞早期凋亡具有一定的保护作用。