重庆番茄根结线虫病的病原种类鉴定

为了明确危害重庆市番茄的根结线虫种类，于2020年，在重庆市潼南区、璧山区、九龙坡区、巴南区、合川区、江津区等主要蔬菜基地利用5点取样法采集番茄根结线虫病根样品，分离根结线虫，利用形态学和分子生物学鉴定方法对其进行种类鉴定。结果表明，根结线虫雌成虫为白色柠檬形，雌虫会阴花纹接近圆形，线纹呈波浪形，没有明显的侧线，背弓高，呈梯形，顶部平滑，这些特征与报道的南方根结线虫形态特征相似；研究发现，根结线虫DNA只有用南方根结线虫特异性引物能扩增出目的片段，对该扩增出的目的片段的测序结果进行blastn比对，发现该片段与南方根结线虫的一段cDNA序列(Sequence ID:JK286281.1)一致性为93.75%。结合形态学和分子生物学鉴定结果，本研究中危害重庆番茄的根结线虫种类为南方根结线虫。该研究结果对重庆番茄根结线虫病害防治以及抗根结线虫病育种具有重要意义。     

兵团第十四师四十七团设施蔬菜根结线虫种类鉴定

根据植物寄生线虫形态学特征,采用根结线虫特异性引物PCR扩增检测方法,鉴定第十四师四十七团设施蔬菜根结线虫种类。结果表明,15个供试根结线虫群体雌虫会阴花纹的形态特征与南方根结线虫的形态一致;特异性引物扩增检测结果显示仅有南方根结线虫的特异性引物扩增出了特异性条带。据此判断四十七团设施蔬菜根结线虫群体均为南方根结线虫（Meloidogyne incognita）,未发现与其它根结线虫复合侵染的现象。     

南方、爪哇和花生根结线虫的快速灵敏的PCR鉴定方法

为了研制南方、爪哇和花生根结线虫快速灵敏的检测和鉴定方法，分别分离了4个南方根结线虫和3个爪哇根结线虫特异性的随机扩增多态性DNA(RAPD)片段。在这些RAPD标记DNA序列的基础上，设计了多对SCARPCR引物，并用源于国内外的南方、爪哇、花生、北方和象耳豆根结线虫群体验证其扩增特异性和灵敏度。最终确定了3对高效扩增的SCAR引物，     

江苏省熏衣草根结线虫种类鉴定

根结线虫在中国广泛分布,能够寄生数千种作物,然而薰衣草上根结线虫的病害的发生及系统鉴定目前鲜有报道。本研究对薰衣草根结线虫病的症状进行观察,并进行了病原线虫的分离和形态学及分子鉴定。结果表明该病害由南方根结线虫侵染引起,侵染严重时根组织发黑溃烂,地上茎部呈黄褐色,叶片萎蔫发黄。利用分离的根结线虫卵块接种生长6周的健康薰衣草植株,接种10周后植株根组织出现严重根结症状,与自然发病相似。从根结中再次分离得到根结线虫经鉴定为南方根结线虫。本研究首次表明薰衣草根结线虫病害由南方根结线虫引起。     

MiAsg分子克隆及与南方根结线虫病害的关系

根结线虫(Meloidogyne spp.)是一种世界性的植物病害。在前期研究中,通过利用生物信息学方法在线虫全基因组中预测了一些功能基因。本研究以预测到的线粒体ATP合成酶g亚基基因(Asg)序列设计特异引物克隆了南方根结线虫(M. incognita)的Asg基因(MiAsg),对其序列进行了特征分析后,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,将其导入番茄植株,然后接种M. incognita,研究MiAsg基因与根结线虫病害的关系。结果表明,克隆到的MiAsg基因与预测到的MiAsg基因相似性高达100%。接种M. incognita 60 d后,MiAsg基因沉默的番茄植株根结数分别比空载体对照减少了59.6%,比清水对照降低了59.5%。结果表明,MiAsg基因沉默对根结线虫病害具有很好的防控效果,也说明MiAsg基因可能参与线虫的致病性。     

生防菌K-8对南方根结线虫的防治及其鉴定

为了明确生防菌株K-8对南方根结线虫的防效及其分类地位,采用亚甲基蓝染色法测定了生防菌株K-8的发酵液对南方根结线虫二龄幼虫存活的影响,考察了其对南方根结线虫的防效,对其鉴定采用生理生化法、表型培养观察法、脂肪酸分析并结合16S rDNA序列分析法。结果表明,击倒试验发现,生防菌株K-8发酵液对南方根结线虫二龄幼虫有一定的杀伤作用,其矫正死亡率为70.8%,与化学药剂200 g/L克线丹的69.4%将近。菌株K-8对南方根结线虫温室盆栽防治效果为47.8%,明显高于对照200 g/L克线丹的防效41.3%。菌株K-8的形态与生理生化特性与巨大芽孢杆菌很接近,根据SI值和差值,脂肪分析把其鉴定为Bacillus megaterium,由16S rDNA序列分析的系统发育树发现,菌株K-8的序列与Bacillus megaterium 构成一个分支,进化上的距离最近,由此可将其鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium。综合三种鉴定方法,最后把菌株鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium。     

番茄育种种质对南方根结线虫抗性评价及Mi-1基因检测

本研究以自育的26份番茄育种种质和抗南方根结线虫番茄品种‘仙客1号’及感南方根结线虫品种‘阿乃兹’为试验材料,采用病土盘栽自然发病鉴定、苗期二龄幼虫人工接种鉴定和PCR扩增及CAPS检测相结合的方法,研究供试材料对南方根结线虫的抗性水平及基因型。鉴定结果表明,供试的28份番茄材料中,高抗17份、抗病6份(包括抗病对照‘仙客1号’)、感病2份、高感3份(包括感病对照‘阿乃兹’),无免疫材料,且病土盘栽鉴定与苗期接种鉴定的结果一致。PCR扩增结果表明,27份番茄材料均能检测到一条750 bp的特异条带;TaqⅠ酶切结果显示,具有酶切位点的22份试材中有15份含纯合显性Mi-1/Mi-1基因、5份含杂合显性Mi-1/mi-1基因、2份含180 bp+250 bp+300 bp三条特异性片段,并且这22份试材对南方根结线虫表现高抗或抗,而其余5份不含显性Mi-1基因的试材则表现高感或感,证明Mi-1是具有抗南方根结线虫能力的基因,分子检测结果与病土盘栽鉴定和苗期接种鉴定的结果吻合率达92.6%;含有180 bp+250 bp+300 bp三条特异性片段的高抗材料可能含有其它抗根结线虫基因。分子检测与抗性鉴定相结合,能为创制抗南方根结线虫新种质提供一种更加省时、省力且经济有效的科学育种方法,可为番茄抗南方根结线虫育种提供理论依据和实践经验。     

安徽省4种寄主南方根结线虫鉴定

为了鉴定安徽省栝楼(Trichosanthes kirilowii)、桔梗(Platycodon grandiflorum)、木耳菜(Basella rubra)和小叶黄杨(Buxus sinica)上的根结线虫(Meloidogyne spp.)种类,并比较不同RKN种群间形态差异,运用形态学和酯酶同工酶凝胶电泳特征条带分析方法对安徽省4种寄主南方根结线虫进行种类鉴定。形态学观察和酯酶同工酶凝胶电泳特征条带分析结果均表明：栝楼、桔梗和木耳菜上的RKN均为南方根结线虫(Meloidogyne incognita);形态学观察结果表明：小叶黄杨上的根结线虫肥西种群为南方根结线虫(M. incognita)疑似种,酯酶同工酶凝胶电泳特征条带分析结果将其确定为南方根结线虫(M. incognita),木耳菜和小叶黄杨上发生的南方根结线虫为安徽省新种。该研究结果为本地根结线虫防治、南方根结线虫生理分化研究、种群和寄主间关系研究提供依据。     

陕西设施蔬菜根结线虫特异性分子检测

为明确陕西设施蔬菜根结线虫的主要种类,利用已报道的花生根结线虫[Meloidogyne arenaria (Neal.) Chitwood]、南方根结线虫[Meloidogyne incognita (Kofold & White) Chitwood]、北方根结线虫(Meloidogyne hapla Chitwood)和爪哇根结线虫[Meloidogyne javanica (Treub)]的特异性引物,对陕西省20个县市区的24个样区的根结线虫进行PCR检测。样品中检测到了南方根结线虫、北方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫,其中南方根结线虫为优势种群,大部分样区为单一种群为害,但个别样区存在2种种群。     

山东保护地蔬菜根结线虫种类鉴定

近年来在北方由于蔬菜大棚的大力发展,为根结线虫的越冬提供了良好的生活环境,保护地蔬菜根结线虫的发生日趋严重,为了鉴定危害山东省保护地蔬菜根结线虫的种类,从山东蔬菜主产区7个地市的蔬菜生产大棚中采集了14种蔬菜根结线虫寄主样本,采用ITS-PCR分子生物学鉴定方法对其进行了鉴定,表明山东蔬菜主产区的蔬菜根结线虫均为南方根结线虫(Meloidogyine incogaka).     

植物根结线虫分子鉴定研究进展

从RFLP、RAPD和SCAR、rDNA-ITS-PCR、AFLP等几方面概述了分子技术在植物根结线虫鉴定中的应用现状。分子技术用于检测植物根结线虫种间和种内群体间在DNA水平上的根本差异,为根结线虫的鉴定提供快速、准确的方法。     

河北省又取得一批农药植保类科研成果

<正>(接上期)8、设施蔬菜栽培根结线虫病防治关键技术研究单位名称:唐山市农业科学研究院评价单位名称:唐山市科技局评价日期:2010.12.29鉴定出危害唐山地区设施蔬菜根结线虫为南方根结线虫和花生根结线虫,以南方根结线虫为主。通过田间取样,分     

一种绞股蓝根结线虫的研究初报

调查陕西安康地区绞股蓝根结线虫的发生情况及危害种类,揭示绞股蓝连作与根结线虫的关系,旨在为绞股蓝根结线虫防治提供理论依据。对安康主产区6个调查点的绞股蓝根结线虫病进行取样调查,并采用形态学观察及rDNA-ITS序列分析方法进行分离鉴定。结果表明,在安康市绞股蓝主产区均发现了不同程度的根结线虫危害,严重的地块发病率高达75.4%,且发病情况随种植年限的延长和海拔的降低而逐渐加重。通过分离鉴定,确定了发生在安康地区绞股蓝上的根结线虫为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)。目前未见绞股蓝上发现根结线虫危害的报道,这是首次报道陕西省安康地区绞股蓝上发生根结线虫,为进一步分析绞股蓝根结线虫种群及该病的防治研究奠定了基础。     

安徽省明确4种寄主南方根结线虫种类

<正>为了鉴定安徽省栝楼、桔梗、木耳菜和小叶黄杨上的根结线虫种类,并比较不同RKN种群间形态差异,安徽农业大学植物保护学院科研人员运用形态学和酯酶同工酶凝胶电泳特征条带分析方法,对4种寄主南方根结线虫进行了种类鉴定。形态学观察和酯酶同工酶凝胶电泳特征条带分析结果均表明:栝楼、桔梗和木耳菜上的RKN均为南方根结线     

广东省甘薯根结线虫的鉴定

为了掌握广东省甘薯根结线虫病害发生情况,用常规分离法进行解剖分离,并对分离线虫进行形态鉴定和分子鉴定。从广东省粤东的陆丰、海丰和粤西的遂溪、吴川、廉江、雷州等地甘薯薯块带有明显根结的薯块进行分离,观察所分离根结线虫的2龄幼虫、雌成虫、会阴花纹特征,并通过根结线虫鉴定引物扩增条带约750 bp,结果表明引起广东省甘薯薯块危害的是象耳豆根结线虫。该病害逐年扩大危害对甘薯产业构成潜在威胁。     

野生茄托鲁巴姆抗根结线虫相关基因的克隆与表达分析

克隆茄子抗根结线虫相关基因并利用荧光定量PCR技术分析其表达特性。根据在NCBI上找到的抗性基因NBS-LRR保守结构域,设计简并引物,以野生茄托鲁巴姆(Solanum torvum Swartz)的c DNA为模板采用c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆抗根结线虫基因,利用荧光定量PCR技术分析其表达特性。获得15条抗性基因片段,且E1、E3、E6、E7、E12、E13、E15为茄子抗根结线虫基因片段。通过聚类分析和氨基酸比对确定E7为Mi基因的一部分。利用RACE技术获得到了野生茄托鲁巴姆抗根结线虫Mi同源基因序列。本研究在野生茄托鲁巴姆中获得了抗病基因同源序列(resistance gene analogs,RGAs)基因,为茄子抗根结线虫分子育种奠定基础。     

“一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记”发明专利获公开

<正>国家知识产权局近日公开一件由云南省烟草农业科学研究院申请的发明专利:一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记。该发明属于分子生物学领域,是一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记。该发明涉及扩增该分子标记的引物、该分子标记和引物在烟草抗病资源筛选和抗病育种辅助选择中的用途。该发明的分子标记将基因组DNA序列与烟草PVY抗性基因联系起来,有利于烟草分子标记育种辅助选择体系的建     

哈茨木霉菌株TRI2的鉴定及其对黄瓜根结线虫的防治作用

为在生产上更好的防治根结线虫病害,同时为新型、高效的生物杀线剂的研制和开发提供一定的理论基础。采用形态学观察及ITS、tef1序列分析方法鉴定木霉菌株TRI2为哈茨木霉,测定了其发酵液对南方根结线虫2龄幼虫的作用,并进行了盆栽试验及田间试验。结果表明,木霉菌TRI2发酵液在48 h时可以100%杀死根结线虫,在盆栽试验中使黄瓜根结减退率达到63.5%,在田间对黄瓜根结线虫的防治效果达到72.2%,且在田间与阿维菌素具有相似的防治效果。菌株TRI2的鉴定及防治效果的确定为研究其生防机制及开发应用提供了依据。     

不同辣椒种质对象耳豆根结线虫的抗性评价

近年来象耳豆根结线虫的危害日益严重.为筛选抗象耳豆根结线虫的辣椒种质,本试验利用种属特异性引物对根结线虫病原物开展分子鉴定,确定为象耳豆根结线虫.接着采用室内人工接种法,对10份一年生辣椒种质和10份中国辣椒种质进行象耳豆根结线虫抗性鉴定,计算根结指数和卵粒指数,并通过比较隶属函数,发现其中3份辣椒种质对象耳豆根结线虫表现为高抗,抗病性最强的是L518M和L525-1M,L42M次之;10份表现为中抗;7份表现为感病,抗病能力最弱的是L69-1M;未发现免疫品种.本研究发现中国辣椒种质的抗病性整体高于一年生辣椒,是重要的抗病种质来源,可用于象耳豆根结线虫抗病育种和后续抗病机理的研究.     

角瓜与南方根结线虫非亲和互作相关MicroRNAs的鉴定

为鉴定角瓜与南方根结线虫非亲和互作中的植物源MicroRNAs(miRNAs),预测miRNAs的靶基因,解析miRNAs的表达模式.构建角瓜与南方根结线虫亲和、非亲和互作的小RNA(sRNA)文库,通过Solexa测序和生物信息学分析筛选鉴定角瓜与南方根结线虫非亲和互作相关的miRNAs,利用PsRNATarget软件预测miRNAs的靶基因,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对测序获得的miRNAs进行表达验证.结果表明,18份样品测序获得的Unique reads数量在808262～3926308条,长度24 nt的sRNA丰度最高,miRNAs占sRNA的0.3％～0.5％,包含565个已知miRNAs,归属75个miRNAs家族,其中miR156包含的家族成员数目最多.26条差异表达的miRNAs响应南方根结线虫胁迫的表达模式分为4种类型,其中10条显著差异表达的角瓜miRNAs与南方根结线虫非亲和互作密切相关.miRNAs靶基因预测显示,一个miRNA可调控多个靶基因,同一miRNA的靶基因同源性较高,miRNAs靶基因功能主要涉及转录激活,参与植物生长发育和调控,以及编码信号传导和细胞代谢相关蛋白等.这些研究结果为探明角瓜与根结线虫非亲和互作的miRNAs调控机理奠定了基础.