“用于检测烟草对TMV抗性的N基因特异性引物对、检测方法及试剂盒”发明专利获公开

<正>近日,国家知识产权局公开一件由中国农业科学院烟草研究所申请的发明专利:用于检测烟草对TMV抗性的N基因特异性引物对、检测方法及试剂盒。该发明提供一种用于检测烟草对TMV抗性的N基因特异性引物对、检测方法及试剂盒,特异性引物对包括上游引物和下游引物。检测方法为:在烟草N基因序列特异区域设计一对特异性引物;以待测烟草品种的DNA为模板,使用N基因特异性引物对进行PCR扩增;采用电泳检测PCR扩增     

烟草抗TMV育种研究进展

增强TMV抗性是烟草抗病育种的重要目标。简要介绍了烟草TMV的发病症状及防治方法,综述了烟草抗TMV的主要抗源、烟草抗TMV育种进展及生物技术在抗TMV育种中的应用,并就今后如何有效开展烟草抗TMV育种提出了建议。     

郑州烟草研究院发明专利《一步法复合检测烟草普通花叶病毒与马铃薯Y病毒的方法及其引物》获得授权

<正>郑州烟草研究院发明的《一步法复合检测烟草普通花叶病毒与马铃薯Y病毒的方法及其引物》于2012年12月05日获得发明专利,国家专利局颁发的专利授权号为ZL201110067006.7。该方法包括:甄别比对病毒基因组中保守区域,人工筛选合成适用于两种病毒病复合RT-PCR特异性引物;分析获得TMV、PVY复合侵染烟叶样本,整合反转录和PCR反应所需酶和缓冲液,通过反应条件优化,建立基于一步法RT-PCR复合检测烟叶感染TMV、PVY的方法。     

烟杈上TMV发病情况与抗病性鉴定结果比较分析

119份烟草种质资源后期的烟杈TMV发病情况调查结果与TMV抗性鉴定结果比较看出,烟杈TMV发病情况与抗病性鉴定结果有一定的规律性。从某种意义上来说,烟杈TMV的病株率和病指可作为某种质对TMV抗性水平的参考值,在没有条件开展TMV人工接种鉴定的情况下,烟杈TMV发病情况基本能正确反映种质对TMV的抗性水平。该法可用于抗TMV烟草种质资源的初步筛选。     

中国农科院在烟草花叶病毒自然种群的遗传分化方面取得新进展

<正>近日,中国农业科学院烟草研究所烟草病虫害防控创新团队在烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)自然种群的遗传分化方面取得了新进展,揭示了我国烟草上TMV的时空扩散特征,相关研究论文在线发表于《病毒学(Virology)》。TMV侵染烟草引起的烟草病毒病是我国烟草上发生最普遍、危害最严重     

植物提取物对烟草普通花叶病毒的抑制作用

为明确美洲商陆和绞股蓝提取物对烟草普通花叶病毒(TMV)的抑制效果,探索防治烟草病毒病防治的新思路,以期为开发植物源提取物防治烟草普通花叶病毒病提供理论依据,采用半枯叶法和大田直接喷施的方法,测定美洲商陆和绞股蓝的提取物对TMV的抑制作用和对大田TMV植株发病情况的影响,分析以上2种植物提取物对TMV的防治效果。半枯叶法的结果表明:化学防病毒药剂在25~200μg/m L浓度时均表现较好的抑制效果,其抑制率均在80%以上,与TMV不同混合时间后接种其抑制率在90%以上;美洲商陆和绞股蓝不同粗提物对TMV抑制率效果表现为甲醇提取物苯提取物石油醚提取物,美洲商陆对TMV抑制率显著高于绞股蓝,用200μg/m L浓度与TMV混合后,混合时间越长其对TMV抑制率越高;对大田烟草TMV防治效果表现为:复配制剂美洲商陆绞股蓝,且高浓度效果优于低浓度,同时,缓解了感病植株烟草农艺性状各项指标。结果表明这2种植物源提取物对TMV抑制作用显著,是防治烟草普通花叶病毒病较为理想的植物源药剂。     

一种TMV抗性离体快速鉴定方法及其在烟草育种上的应用

烟草普通花叶病,由烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)引起,是烟草生产中的常见病害之一,培育和种植抗病品种是解决该病害的主要途径,育种材料的抗性鉴定是抗病育种的关键环节。为提高TMV抗性鉴定效率,本研究根据TMV与N基因作用的原理设计了一种烟草苗期离体接种快速鉴定TMV抗性的方法。该方法为研磨病害严重程度为5级的新鲜病叶(10 g)并过滤,往过滤液中加纯净水(100 m L)稀释为病毒液;摘取6～7叶期烟苗的叶片(从上往下数第3叶)进行离体摩擦接种;3 d后观察坏死斑发生情况。应用此鉴定方法对20份烟草材料的TMV抗性进行鉴定,结果表明13份材料出现免疫斑;同时,对20份烟草材料的N基因进行了检测,结果表明13份材料含有N基因。出现免疫斑的材料与含N基因的材料相一致,证明了苗期离体接种方法鉴定TMV抗性的可行性。将此方法应用于21 524份育种中间材料(7 047株BC₁F₃、10 013株BC₁F₄、4 464株BC₁F₅)的...     

远缘杂交转育抗烟草花叶病N基因同源基因片段的初步研究

烟草普通花叶病(TMV)是烟区的主要病害之一,生产上所用抗源都来自烟属的心叶烟(Nicotiana glutinosa),其携带N基因对TMV免疫,但因连锁累赘导致烟叶品质差,难以在生产上大面积使用。因此,从烟属植物中挖掘新的TMV抗源尤为必要。本研究以烤烟品种红花大金元与野生种圆锥烟草(N.paniculata,PI 555550)为亲本,开展远缘杂交,获得了种间杂种。杂交种SSR、GISH及抗病性鉴定结果表明,杂交种含双亲特征条带,接种TMV后,叶片有枯斑反应。N基因特异引物在圆锥烟草及杂交种中未能扩增,而根据N基因同源基因Np片段设计的特异引物扩增到500 bp的片段,携带N基因的RBST及心叶烟草(N.glutinosa PI 555507)中未扩增到此特异片段,在杂交种扩增到此特异片段。该研究为获得新的TMV抗源奠定了材料基础。     

“一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记”发明专利获公开

<正>国家知识产权局近日公开一件由云南省烟草农业科学研究院申请的发明专利:一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记。该发明属于分子生物学领域,是一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记。该发明涉及扩增该分子标记的引物、该分子标记和引物在烟草抗病资源筛选和抗病育种辅助选择中的用途。该发明的分子标记将基因组DNA序列与烟草PVY抗性基因联系起来,有利于烟草分子标记育种辅助选择体系的建     

烟草N基因及其在烤烟遗传育种中的应用

N基因起源于烟草野生种粘毛烟草(Nicotiana glutinosa),属于TIR-NBS-LRR类抗病基因,介导烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)的抗性,通过转座子标签法得到克隆,目前,N-TMV互作是研究最早且最多的植物-病原菌互作模型之一。文章从转录产物、表达特征、温度敏感性、对应无毒基因等研究内容回顾了N基因在结构、表达、作用机理等方面的研究进展及现状,归纳了以N基因为TMV抗源在烤烟遗传育种中的应用及取得的成果,并从抗TMV机制研究、抗TMV种质鉴定、种质资源利用等方面对N基因在烤烟抗TMV育种中的高效利用提出了展望。     

裂褶菌蛋白粗提液抗植物病毒活性初探

摘要：以裂褶菌蛋为研究对象,用硫酸铵沉淀其蛋白,制成蛋白粗提液,研究其诱导烟草对烟草花叶病毒（TMV）的抗性,和体外钝化烟草花叶病毒（TMV）的防治效果;结果表明：当蛋白浓度达到100μg/mL时,诱导烟草抗TMV的效果较好,侵染枯斑抑制率可达74.11%±3.7%,对TMV的体外钝化作用的枯斑抑制率为70.05%±1.25%,表明裂褶菌蛋白粗提液通过诱导抗病性和对TMV的体外钝化作用达到了控制TMV的作用;裂褶菌蛋白粗提液对辣椒病病毒（CMV）具有很好控制作用,用100μg/mL的裂褶菌蛋白粗提液处理辣椒植株后,其对CMV的平均防效为66.46%。     

烟草引种资源黑胫病、TMV及PVY抗性分子标记辅助筛选

本研究对54份国外引进烟草种质资源进行了黑胫病、烟草普通花叶病(TMV)及马铃薯Y病毒病(PVY)等主要病害抗性的分子标记辅助筛选,并对上述资源同步开展了TMV及黑胫病人工接种抗病分析。研究结果表明:共筛选到2份资源抗黑胫病、TMV及PVY,5份资源双抗黑胫病及PVY和1份资源双抗TMV及PVY。黑胫病与TMV抗性分子标记鉴定的结果为人工接种抗性鉴定结果证实,即筛选到11份资源含抗TMV的N基因和14份资源含抗黑胫病的Ph基因。本研究结果有助于大批量的开展种质资源的抗性筛选,加快抗病烟草品种选育进程。     

新引美国、巴西烤烟品种简介

烟草是云南省的主要经济支柱产业,卷烟的发展靠的是优质的原料,优质原料又来自于农田,烟草农业发展直接影响着云南经济的发展.要做到烟草农业的飞速发展,优良品种是关键,但是多年来烟草品种一直比较单一,目前我省种植面积大的品种是K326、云烟85和云烟87,其次是红大、K346、NC82、V2品种等,这些品种都容易感烟草普通花叶病(TMV),有些烟区由于TMV的大发生而造成减产和烟叶质量下降.     

高抗烟草花叶病毒的烟草种质资源筛选

为了解我国烟草种质资源对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抗性状况,为烟草抗病育种的亲本选择提供信息,本试验通过苗期TMV汁液摩擦接种,对1 191份烟草种质资源进行了TMV抗性鉴定.筛选出的对TMV表现为枯斑反应的高抗资源有:白肋烟40份、国内烤烟20份、国外烤烟28份、晒烟1份,合计89份.接种后21 d表现为花叶的资源有:白肋烟29份、国内烤烟430份、国外烤烟270份、国内晒烟352份、国外晒烟(雪茄烟)21份,合计1 102份.枯斑资源的比例白肋烟＞烤烟＞晒烟.云南省烟草农业科学研究院2006年保存白肋烟、烤烟和晒烟资源合计1 652份,本试验较系统的鉴定了72％种质资源的TMV抗性状况,可为种质资源的育种利用提供参考.     

烟草抗花叶病新品系“转基因NC89”的田间选育和应用

1986年美国人比奇等首次将烟草花叶病毒外壳蛋白基因转移到烟草中,干扰了病毒基因组的复制,为培育抗花叶病烟草开拓了新途径。我们利用花椰菜病毒的35s启动子和rbcs的转录终止信号构建了能同时表达TMV和CMV外壳蛋白基因的中间载体质粒,通过农杆菌转入我国烟草主栽品种NC89中,在温室中获得了多株抗TMV和CMV的     

荧光假单胞菌CZ可以研发成防治病毒病害的生物制剂

正荧光假单胞菌能分泌包括碱性磷酸酶在内的抗病毒蛋白抑制烟草花叶病毒(TMV)侵染。近日,中国农科院烟草所等单位研究人员利用抗生素利福平逐级诱导获得抗药性标记菌株CZrif,生测结果显示,野生型和抗药型菌株的发酵上清和粗蛋白液对TMV的体外钝化效果均大于90%,无显著差异。     

TMV侵染烟草基因差异表达的cDNA-AFLP分析

以烤烟品种龙江925 [高抗烟草普通花叶病(TMV)]接种TMV的叶片为材料,选用240对引物组合的扩增, 获得约 9 500个转录基因片段, 经过克隆测序最终获得了12个诱导表达片段, 它们与核酸代谢、蛋白质合成与修饰、能量代谢、胁迫响应、细胞内运输、糖代谢等相关, 并利用荧光定量PCR分析一个诱导表达片段TIF2在0~72 h之间5个时间点(0、12、24、48和72 h)的基因差异表达, 证实了所获得的基因序列为真实诱导的表达序列。对此序列进行RACE, 最终获得全长cDNA序列, 全序列857 bp, 预测的编码区在101~613 bp之间, 共编码170个氨基酸。经Blastn、Blastp比对分析, 在烟草中没有获得其同源序列, 确定该基因是在烟草中发现的与抗TMV相关的新基因。     

抗病毒剂VA诱导烟草产生PR蛋白及对TMV侵染的抗性

本试验用天然抗病毒剂VA作诱导因子,抗病品种枯斑三生烟(Nicotiana tabacum L.SamSun NN)和感病品种三生烟(Nicotiana tabacum L.SamSun)经VA诱导处理后(清水作对照)接种TMV.结果表明,VA可局部和系统地诱导烟草叶片对TMV产生抗性,其枯斑抑制率可达40%～60%,枯斑直径比对照减少30%～50%,且在抗病品种SamSun NN中,VA+TMV处理明显增加了PR蛋白的含量,在不接种情况下VA诱导的烟草叶片中PR蛋白表现很弱.在感病品种SamSun烟中,VA不能诱导PR蛋白产生.说明VA诱导PR蛋白含量的增加与VA抑制TMV在烟草体内的扩展有关.     

“益都红”干制椒品种的抗病性资源评价

对古老的地方品种“益都红”干制椒，苗期人工接种烟草花叶病毒（TMV）和病原菌辣椒疫霉菌，结果表明：“益都红”干制椒抽样群体抗TMV的能力呈水抗水平；而抗病的能力呈低耐水平，该品种达到耐疫病和高抗TMV的双抗抗源占5．9％，抗病性鉴定评价为该品种中药藏着多抗性的遗传资源，并有丰富的,抗TMV抗,源，但是抗疫病的抗源相对较少，品种退化水平已达到被淘汰的临界边缘，建议采用加大表型选择强度与苗期人工接种交互轮回选择法，迅速提高“益都红”干制椒种性。     

甜(辣)椒品种(系)对黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒的苗期抗性鉴定

1981—1987年,对432份甜(辣)椒材料进行了苗期抗黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草花叶病毒(TMV)的鉴定与筛选,均未发现免疫性抗源。有84份材料耐CMV,23份抗TMV,74份耐TMV。目前生产上栽培的大果型甜椒品种基本上感CMV,耐TMV。近年育成的中椒2号和双丰甜椒对CMV和TMV都有良好的耐病性,可推广应用。