丰香草莓叶片离体再生不定芽的研究

本试验以丰香草莓组培苗叶片为试材,研究了离体再生过程中激素配比、叶龄、放置方式、暗培养等对不定芽再生效率的影响。     

抗生素对梨离体叶片不定芽再生的影响

以沙梨‘金花’和西洋梨‘丰产’两个品种的无菌苗幼叶为试材，研究了卡那霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对梨离体叶片不定芽再生的影响。用新梢顶端1～3节新展开的叫‘片制备外植体，分别接种在NN69 BA5mg／L NAA0．3mg／L CH300mg／L的培养墓上，附加不同浓度的抗生素，黑暗处理20d，结果表明：500mg／L的浓度下，头孢霉素完全抑制供试品种叶片的再生；400mg／L的浓度下，羧苄青霉素完全抑制供试品种叶片的再生。丰产和金花对卡那霉素均敏感，5mg／L就极显著的抑制不定芽再生；10mg／L时不定芽不能正常生长，白化死亡，同浓度下供试品种不能分化不定根。     

皇家夏天葡萄离体叶片再生体系的建立

叶片再生效率的高低直接影响目的基因转化的成功率,为建立稳定、高效的葡萄离体叶片不定芽再生体系,以优良无核葡萄品种皇家夏天为试材,取试管苗顶端1￣3叶位幼嫩叶片,研究了基本培养基成分、生长调节物质的种类和浓度、碳源等因素对叶片不定芽再生的影响。结果表明:供试WPM、1/2MS、B5和NN694种基本培养基,均可诱导其叶片再生不定芽,差异不显著;碳源以添加10￣20g/L的葡萄糖或食用白砂糖较好;培养基中附加3.0mg/L的6-BA与0.05mg/L的IAA配比利于出芽和成苗,应用TDZ虽出芽较多,但芽丛多畸形、出苗困难,不宜使用。     

甜樱桃离体叶片再生的研究

利用甜樱桃的无菌苗叶片做外植体,进行离体叶片再生不定芽研究。结果表明:培养基中添加的激素浓度、种类和配比均影响不定芽再生,6-BA和NAA组合诱导甜樱桃离体叶片再生的活性较强;在MS 6-BA3mg/L NAA0.2mg/L GA30.5mg/L AgNO35.0-10.0mg/L培养基上,通过3次继代培养的不定梢的叶片,再生不定芽的频率达6.4%,确定良好的生根培养基为1/2MS IBA 0.7mg/L NAA0.2mg/L 蔗糖20g/L 琼脂7g/L,生根率可达75.1%。     

不同处理对丰水梨离体叶片不定芽再生的影响

采用多因素组合试验设计,研究了噻重氮苯基腺(TDZ)和吲哚丁酸(IBA)浓度组合、外植体类型、叶片放置方式、暗培养时间以及乙烯抑制剂AgNO3处理等因素对丰水梨离体叶片再生体系建立的影响.结果表明,NN69+TDZ 2.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1处理的叶片再生频率和再生芽数分别达到86.7%和2.92,为丰水梨最佳培养基与植物生长物质组合.同一叶片的基部和中部比顶端更容易产生愈伤并再生形成不定芽.叶片远轴面向下接触培养基比近轴面向下利于叶片不定芽再生.AgNO3质量浓度在0.1～1.5 mg·L-1范围内对离体叶片再生有显著促进作用, NN69+TDZ 2.0 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+AgNO3 1.0 mg·L-1以及NN69+TDZ 1.5 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1+AgNO3 0.1 mg·L-1使丰水梨叶片再生频率均达到100%.     

不同处理对丰水梨离体叶片不定芽再生的影响

采用多因素组合试验设计,研究了噻重氮苯基腺(TDZ)和吲哚丁酸(IBA)浓度组合、外植体类型、叶片放置方式、暗培养时间以及乙烯抑制剂AgNO3处理等因素对丰水梨离体叶片再生体系建立的影响.结果表明,NN69 TDZ 2.0 mg·L-1 IBA 0.1 mg·L-1处理的叶片再生频率和再生芽数分别达到86.7%和2.92,为丰水梨最佳培养基与植物生长物质组合.同一叶片的基部和中部比顶端更容易产生愈伤并再生形成不定芽.叶片远轴面向下接触培养基比近轴面向下利于叶片不定芽再生.AgNO3质量浓度在0.1～1.5 mg·L-1范围内对离体叶片再生有显著促进作用, NN69 TDZ 2.0 mg·L-1 IBA 0.2 mg·L-1 AgNO3 1.0 mg·L-1以及NN69 TDZ 1.5 mg·L-1 IBA 0.3 mg·L-1 AgNO3 0.1 mg·L-1使丰水梨叶片再生频率均达到100%.     

草莓叶片离体再生技术的研究

以红颊、章姬、丰香叶片为试材,对影响草莓叶片不定芽再生的主要因素进行了试验研究,建立了草莓离体叶片的再生体系。试验结果表明,基因型、不同激素种类和配比、叶龄直接影响了草莓叶片再生芽的发生。基因型是影响草莓叶片再生能力的决定因素,叶片四周刻伤处理能有效地提高不定芽的诱导率,适度的暗培养有利于不定芽的发生。叶片愈伤组织的诱导培养基以MS＋TDZ2～3mg/L较理想,芽伸长的理想培养基为MS＋6-BA0.3～0.5mg/L,生根培养基以1/2MS＋I-BA0.3mg/L较适宜,移栽成活率可达90%以上。     

美女樱叶片离体培养研究

以美女樱品种"Quartz"离体叶片为外植体,探讨了不同细胞分裂素、暗培养、硝酸银质量浓度以及不同植物生长调节剂组合对不定芽再生的影响。结果表明:6-BA的诱导效果好于TDZ。在培养基MS+6-BA4.0mg/L+IBA0.15mg/L+蔗糖30g/L上可以使美女樱叶片不定芽的再生率达26.8%。2mg/LAgNO3可以将美女樱叶片的不定芽再生率提高到31.3%,并缩短不定芽发生时间。暗培养5d可以促进美女樱叶片不定芽的再生,活性炭对美女樱叶片离体再生有一定抑制作用。     

辣椒叶片离体培养与植株再生

以辣椒无菌苗叶片为外植体，就激素对其不定芽分化及植株再生的影响进行了研究。结果表明，ＢＡ对叶片不定芽的诱导效果最好，ＺＴ次之，ＫＴ不能有效地诱导叶片形成不定芽；ＩＡＡ与ＢＡ相配合使叶片不定芽分化频率明显提高；ＩＢＡ或ＮＡＡ与ＢＡ的激素组合使叶片不定芽分化频率有所下降；２，４－Ｄ对叶片不定芽分化有明显的抑制作用。在分化培养基中添加１．０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３有利于不定芽的伸长。不定芽伸长后在不含激素的ＭＳ     

红掌叶片离体培养与植株再生研究

通过对红掌叶片离体培养与植株再生过程的系统研究结果表明：最佳的外植体为1cm^2左右的带主脉幼嫩叶切片；最佳的诱导培养基为1/2MX 2，4-D1mg/L BA4mg/L，大量元素和BA对愈伤组织诱导的影响不大，2，4-D是愈伤组织诱导的主要因子；最佳的分化培养基为MS BA8mg/L，中间繁殖体增殖和成苗培养基分别为MS BA3mg/L和1/2MS NAA0.2mg/L BA2mg/L，不必另行壮苗生根便能形成根叶俱全的小苗，移栽成活率达96％以上。     

陆地棉子叶离体培养诱导不定芽植株再生

以陆地棉种子无菌苗的子叶为外植体材料,研究不同苗龄的子叶、激素组合、硝酸银等对子叶诱导不定芽的影响.试验结果:15 h苗龄的子叶,在附加BAP 3.0 mg/L、IAA 1.0 mg/L、2ip 1.0 mg/L和AgNO3 5.0 mg/L的不定芽诱导培养基上,珂字棉312和泗棉3号的不定芽诱导频率分别为70%和60%左右.     

草莓离体再生体系的研究

目前植物转基因技术已成为植物定向遗传改良的主要手段,而建立稳定高频离体再生体系是实现遗传转化的基础和前提。笔者以3个主栽草莓品种丰香、弗吉尼亚、全明星为试材,综合研究影响草莓不定芽再生的各种因素,建立离体叶片高效再生系统。试验结果表明,对某一特定的品种来说,外植体基因型和外源激素种类及其合适浓度是决定再生的主要因子。建立草莓高频再生体系,TDZ是首选激素;某种激素随其组合激素不同而发挥功效不同;自然光照条件下培养不易发生玻璃化苗,而且苗分化好;AgNO3对弗吉尼亚叶片再生起抑制作用,但用含7 5mg/LAgNO3的继代培养基扩繁组培苗,却产生了大量的匍匐茎。     

沼泽小叶桦的组织培养

为了对沼泽小叶桦的快速繁殖提供理论依据和实践基础,以沼泽小叶桦顶芽和腋芽为外植体,MS、WPM为基本培养基,6-BA、NAA、IBA为激素,进行不同培养基类型和不同激素配比沼泽小叶桦不定芽的诱导和生根试验。结果表明:MS为最适合沼泽小叶桦快速繁殖的基本培养基,最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0mg/L,诱导率达100%,最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.2mg/L,无菌苗移栽成活率达99%以上。     

人参植株再生体系的建立和优化

以人参种子、芽胞、茎、叶为外植体,通过器官发生途径建立人参高效再生体系.筛选出不定芽诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L BA+0.2 mg/L IBA,继代培养基为MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L IBA和MS+2.5 mg/L BA+0.2 mg/L IBA,生根培养基为1/2 MA+1.0 mg/L NAA;16 h光照/8 h黑暗培养.移栽获得再生植株.     

夏蜡梅腋芽微繁殖及叶片不定芽再生

夏蜡梅(Sinocalycanthus chinensis)是中国特有的一种落叶观赏花木,为国家二级保护珍稀濒危植物.以夏蜡梅当年生枝条的茎段为供试材料,进行腋芽微繁殖和叶片不定芽再生的研究.结果表明:茎段在附加2.00mg/L ZT和0.05 ms/L IBA的WPM培养基上快繁,萌发迅速、芽体粗壮、叶色淡绿,月繁殖系数超过10.0,可以连续继代10次以上;以无菌苗的叶片为外植体在附加2.0 me/L TDZ、0.1 me/L IBA和1.0 me/L KT的WPM培养基上,不定芽再生频率达40%.在3/5MS大量元素+WPM微量元素+WPM有机成分+0.20 mg/L IBA+0.05%活性炭的生根培养基上,试管苗的根系和地上部发育良好,盆钵移栽成活率达100%.该体系的建立为夏蜡梅工厂化育苗以及运用生物技术手段对夏蜡梅进行改良奠定了基础. ms/L IBA的WPM培养基上快繁,萌发迅速、芽体粗壮、叶色淡绿,月繁殖系数超过10.0,可以连续继代10次以上;以无菌苗的叶片为外植体在附加2.0 me/L TDZ、0.1 me/L IBA和1.0 me/L KT的WPM培养基上,不定芽再生频率达40%.在3/ MS大量元素+WPM微量元素+WPM有机成分+0.20 mg/L IBA+0.05%活性炭的生根培养基上,试管苗的根系和地上部发育良好,盆钵移栽成活率达100%.该体系的建立为     

LED光源对结球甘蓝(Brassica oleracea var.Capitatal)不定芽再生的影响

为探索不同光源对结球甘蓝(Brassica oleracea var.Capitatal)不定芽再生的影响,采用LED红光、LED黄光、LED蓝光及对照荧光灯光源,选用12-1、12-2、12-3三个结球甘蓝材料进行了研究。结果表明:在LED红、黄、蓝色光源下,外植体愈伤组织的诱导率达100%;在不定芽的诱导中,LED红光的诱导率显著大于LED黄光,与荧光灯没有显著差异,平均诱导率高低依次为:红光>荧光>蓝光>黄光;在继代过程中,从再生系数看,LED红光与LED黄光存在显著差异,与荧光灯存在较明显差异,再生系数高低依次为:红光>蓝光>荧光灯>黄光;在根的诱导中,平均诱导率高低依次为:荧光>红光>蓝光>黄光,培养期间观测发现,LED光源下诱导的根粗壮,须根多,LED红光最明显;但在LED光源培养下有明显的褪绿和瓶壁凝露现象,LED红光下凝露最重;LED光源下先长愈伤组织再长腋芽,叶片变小且易碎,生长势弱,蓝光光源下节间伸长有明显的徒长现象;而荧光灯光源愈伤组织少,腋芽生长正常,没有出现以上现象。     

哈密大枣叶片不定芽再生体系研究

建立哈密大枣叶片离体再生体系,为遗传转化奠定基础.采用哈密大枣叶片为外植体,研究基本培养基、激素浓度、暗培养时间、AgNO3等因素对离体叶片不定芽诱导的影响,并获得再生植株.MS、NN69、WPM三种培养基相比较,NN69更适合做为诱导愈伤组织的基本培养基;TDZ诱导叶片再生不定芽的效果显著优于 BA;再生培养基中添加1 mg/L AgNO3对不定芽的形成有显著的影响（P ＜0．05）;培养初期经过2周避光培养更有利于提高再生效率;采用10 mg/L维生素 C浸泡15 min可以防止褐化,并能提高不定芽再生率;培养基中添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）或者维生素C,不定芽再生率无显著提高（P ＞0．05）;培养基添加活性炭（AC）会抑制外植体的分化.叶片在 NN69＋1．0 mg/L TDZ＋0．20 mg/L IBA＋AgNO31．0 mg/L培养基上,暗培养2周后转入光照培养,出芽外植体转入 MS＋1 mg/L 6GBA＋0．20 mg/L IBA 不定芽再生效果最好.不定芽生长至3 cm 以上时,转至0．40 mg/L IBA的1/2MS培养基上进行诱导生根.     

白沙枇杷成熟胚子叶诱导不定芽再生

枇杷(Eriobotrya japonica L.)是原产中国的特色树种,分红沙、白沙两大品系.因其基因型高度杂合,童期长,传统的育种方法周期长,所以采用现代生物技术手段育种显得尤为重要.基因工程是品种改良快速和有效的育种手段,而基因工程的遗传转化操作系统的建立依赖于不同类型的外植体高频植株再生.枇杷的离体培养植株再生主要集中在幼胚、胚乳、花药以及原生质体等方面 [1～6],目前存在再生频率低下、培养难度较大等问题[7].近几年在枇杷成熟胚子叶诱导再生方面相继展开了一些研究,但诱导产生不定芽仅限于红沙系品种[8,9],白沙系品种至今未有报道.为此,本试验拟进行白沙枇杷成熟种子子叶再生不定芽研究,试图建立白沙枇杷成熟子叶再生体系,为以后通过基因工程改良枇杷品种奠定基础.     

马铃薯不同品种叶片再生体系的建立

以马铃薯6个品种为材料,建立叶片再生体系。结果表明,6-BA和GA3对马铃薯叶片愈伤组织生长量和不定芽分化率均有显著影响。不同马铃薯愈伤组织生长最高的6-BA质量浓度分别是"大西洋"、"底西瑞"和"虎头"1mg/L,"费乌瑞它"和"夏坡蒂"2mg/L,"紫花白"3mg/L;愈伤组织生长最高的GA3质量浓度分别是"大西洋","费乌瑞它","夏坡蒂"和"紫花白"5mg/L,"底西瑞"0.02和0.15mg/L,"虎头"0.02,0.05和0.1mg/L。在不同培养基中获得的最大愈伤组织生长量分别为"大西洋"0.039 5g,"费乌瑞它"0.037 5g,"夏坡蒂"0.041g,"紫花白"0.0396g,"底西瑞"0.042 5g和"虎头"0.039 5g。不同马铃薯不定芽分化最高的6-BA质量浓度分别是"大西洋","费乌瑞它"和"夏坡蒂"2mg/L,"紫花白"和"底西瑞"1mg/L,"虎头"0.1mg/L;不定芽分化最高的GA3质量浓度分别"大西洋"0mg/L,"费乌瑞它"2mg/L,"夏坡蒂"1mg/L,"紫花白"5mg/L,"底西瑞"和"虎头"0.1mg/L。在不同培养基中获得的最高不定芽分化率分别是"大西洋"18.18%,"费乌瑞它"13.04%,"夏坡蒂"17.86%,"紫花白"15.00%,"底西瑞"44.44%和"虎头"47.83%。诱导6个马铃薯品种生根的最佳培养基为1/2MS+0.1mg/LNAA,生根率分别为"大西洋"95.2%,"费乌瑞它"83.3%,"夏坡蒂"92.4%,"紫花白"94.8%,"底西瑞"96.7%和"虎头"95.6%。6个马铃薯品种的移栽成活率均为90%以上。     

喀什哈尔葡萄组织培养及再生体系的建立

以喀什哈尔葡萄单芽茎段为材料,进行了离体组织培养并以实验获得的喀什哈尔葡萄组培苗进行了外植体器官直接再生研究.结果表明:喀什哈尔葡萄单芽茎段最适初始培养基是:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L,侧芽萌芽率达100;;最适继代培养基是:MS+KT 0.1 mg/L+IBA 0.4 mg/L,同时伸长生长与生根生长,生根率达100;.探讨了喀什哈尔葡萄器官再生的影响因素,并以叶片为试材,建立了植株再生体系.叶片不定芽再生的最佳培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L ,再生率为14.3;;最佳生根培养基是MS+KT 0.1 mg/L+IBA 0.4 mg/L,生根效果良好,生根率为92;.