犬瘟热,猫细小病毒,犬腺病毒弱毒株的理化特性及生物学试验

以鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）、猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）、狗肾传代细胞（ＭＤＣＫ）从引进的疫苗中分别分离到犬瘟热ＣＤＶ－Ａ株、猫细小病毒ＦＰＶ株、犬腺病毒ＣＡＶ１株。对三个弱毒株的细胞病变规律,形态特征,病毒滴度,理化特性,核酸型,血清学交叉反应,本动物的安全性及免疫原性等内容进行了试验。鉴定结果表明,３个弱毒株均可作为制苗用毒种     

水貂病毒性肠炎弱毒疫苗株的选育及实验免疫研究

从自然发病死亡貂体内分离到１株水貂病毒性肠炎（ＭＶＦ）强毒株－ＭＥＶ，将该株病毒在犊牛睾丸（ＣＴ）细胞和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）上混合培养进行适应。当传至５６代时，在ＣＴ细胞上出现细胞病变（ＣＰＥ），而后单独在ＣＴ细胞上传至７０代，经终点稀释克隆和鉴定获得一弱毒株。以其制备的ＣＴ细胞弱毒疫苗，给每只貂注射或口服１～５ｍＬ均未见任何不良反应。注苗后１２、６０、７２、１８０ｄ攻毒，保护率均为１００％。     

动物细胞系的染色体组型分析和致癌／致瘤性

为确定供生物制品和生物工程产品生产所用动物传代细胞系有无致癌／致瘤性,对研制生产犬、貉、狐用五联病毒,即犬狂犬病病毒（ＲＶ）、犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＤＶ）、犬腺病毒２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）的活疫苗以及猫、狮、虎、豹用三联病毒,即泛白细胞减少症病毒（ＦＰＬＶ）、猫疱疹病毒１型（ＦＨＶ１）和猫杯状病毒（ＦＣＶ）的活疫苗,所用猫肾细胞系（Ｆ８１,ＣＲＦＫ）、犬肾细胞系（ＭＤＣＫ）、非洲绿猴肾细胞系（Ｖｅｒｏ,Ｖｅｒｏ２）、恒河猴肾细胞系（ＭＡ１０４）和叙利亚金…     

我国水貂肠炎细小病毒主要流行型的研究

应用抗水貂肠炎细小病毒（ＭＥＶ）单克隆抗体，对我国ＭＥＶ流行毒株进行了鉴定。结果表明，我国流行的ＭＥＶ主要属Ｂ型，并选出１株免疫原性强的ＭＥＶ为制苗毒株，为研制ＭＥＶ疫苗奠定了基础     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

抗水貂肠炎细小病毒单克隆抗体的建立

以我国分离的水貂肠炎细小病毒（ＭＥＶ）为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠获得的脾细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞融合，筛选出８株分泌抗ＭＥＶ的单克隆抗体杂交瘤细胞。经鉴定，８株杂交瘤细胞都属于Ｂ型抗ＭＥＶ单克隆抗体。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）分离鉴定及其与欧,美PRRSV …

在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ,间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应,而分离株与ＨＣＶ,ＰｒＶ,ＰＰＶ,ＴＧＥＶ,ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲ     

貂病毒性肠炎睾丸细胞弱毒疫苗株的安全性和免疫原性研究

用从患貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）死亡水貂分离的强毒株，经牛睾丸细胞（ＣＴ）和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）混合培养，强迫传代、克隆培育的ＭＶＥ弱毒株扩增制苗，给不同品系水貂注射或口服１￣５ｍｌ，未发生临床反应。注苗后１２、６０、７０天和６个月攻毒，１００％保护；对照水貂全部发病，５０％死亡。通过对６５１只（次）水貂的安全性、免疫原性、遗传稳定性试验和中和抗体测定及同居感染试验，证明该弱素株具有良好的安全性、     

多聚酶链反应区分血清Ⅰ型MDV强弱毒株

选用血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ＿１）基因组中位于１３２ｂｐ正向重复序列两侧的２段寡聚核苷酸为多聚酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对Ⅰ型ＭＤＶ强毒株（京－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５Ｃ株）的核酸进行基因扩增。结果显示：该弱毒株核酸基因中含６个或更多个拷贝数的１３２ｂｐ正向重复序列，而强毒株核酸基因中仅含２个，相同引物对Ⅱ型、Ⅲ型ＭＤＶ（ＳＢ－１株，Ｆｃ１２６株）和禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）核酸作ＰＣＲ扩增，未检出任何核酸片段。     

表达马立克氏病病毒CV1988／Rispens糖蛋白B重组鸡痘病毒的免？…

用表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ（Ｉ型疫苗株ＣＶ１９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因的重组鸡痘病毒（ｒＦ－ＰＶ－ｇＢ／Ｒ）和鸡痘病毒（ＦＰＶ）疫苗株２８２Ｅ４免疫１日龄不同品种的鸡,来评价２种病毒株的安全性及免疫母源抗体的商品是我毒性,而对无毒源抗体的ＳＰＦ鸡的毒性则不同。斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交产,ｆＦＰＶ－ｇＢ／Ｒ中无氨苄青霉素的抗性基因。     

绵羊进行性肺炎病毒实验感染引起新疆美利奴羊的淋巴细胞性滑膜炎

绵羊慢病毒（ｏｖｉｎｅｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ,ＯｖＬＶ）根据其体外培养的ＣＰＥ和蛋白质与核酸分析可分为３型［１,２］。１型为溶解型,使胎羊脉络丛（ＦＯＣ）细胞或山羊滑膜细胞（ＧＳＭＣ）单层的成纤维细胞形成众多的合胞体的特征性ＣＰＥ,最终细胞溶解,属于这一型的有梅迪维思纳病（ｍｅｄｉｖｖｉｓｎａｖｉｒｕｓ,ＭＶＶ）或ＯｖＬＶ冰岛株以及绵羊进行性肺炎病毒（ｏｖｉｎｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｐｎｅｕｍｏｎｉａｖｉｒｕｓ,ＯＰＰＶ）或ＯｖＬＶ美国株。２型为不溶解型或持久感染型,即持久感染细胞培养,但不溶…     

聚合酶链反应,病毒分离和血凝试验检测犬粪样中细小病…

对聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增犬细小病毒（ＣＰＶ）衣壳基因的诊断方法与用Ｇｒａｎｄｅｌｌ猫肾细胞（ＣＲＦＫ）或Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙ犬肾细胞（ＭＤＣＫ）分离病毒和能被ＣＰＶ特异性抗血清抑制的粪便血凝（ＨＡ）试验进行了比较；ＰＣＲ检测的５９例粪样中有１例假阴性（１．７％）。它与用ＭＤＣＫ细胞分离病毒同样敏感，而比用ＣＲＦＫ细胞分离病毒或ＨＡ试验更敏感。这些结果表明，ＰＣＲ可作为粪样ＣＰＶ检测的常     

PCR法检测血清I型马立克氏病病毒及其敏感性试验的研究

以人工合成的针对血清Ｉ号马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）Ａ抗原基因（ｇＡ）部分序列的两端寡聚核苷酸为聚合酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对马立克氏病病毒血清Ｉ型（京－１株，ＭＤ１１／７５Ｃ株）；２型（ＳＢ－１株）；３型（火鸡疱疹病毒的ＦＣ１２６株）毒株和ＧＡ株ＢａｍＨＩ Ｂ片段的ＰＡＣＹ１８４克隆重组质粒ＤＮＡ进行基因扩增反应及其敏感性试验。结果表明，该引物不仅对ＭＤＶ１具有较强的特异性，而且由此引物引导     

水貂病毒性肠炎CT细胞弱毒疫苗株的选育,驯化及鉴定

应用从唐山地区ＭＶＥ病死水貂中分离强毒，经牛睾细胞（ＣＴ细胞）和ＣＲＦＫ细胞混合培养，强迫感染，传至５８代后，ＣＴ细胞出现ＣＰＥ变化，除去ＣＲＦＫ细胞，单用ＣＴ细胞传毒，传至７０代，经电镜、ＨＡ和ＨＩ试验证明，驯化弱毒株为典型细小病毒，经终点衡释克隆和致病性试验结果，对貂未发生致病性反应，注射和口服弱毒株的貂ＨＩ比对照貂有明显升高。     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ０ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１１２弱毒株；从狂犬病毒株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因光敏生物素探针的制备及初步应用

将重组质粒ｐＵＣＬａＦｃ和ｐＵＣＦ４６Ｆｃ用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ酶切,回收新城疫病毒融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因,将此Ｆｃ片段用光敏生物素标记,制备出Ｆｃ探针。该探针能够与新城疫病毒（ＮＤＶ）的强毒株Ｆ４６Ｅ９、中毒株Ｍ株和弱毒株ＬａＳｏｔａＥ４株杂交,而不与对照的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒杂交,说明探针是特异的。用ｐＵＣＬａＦｃ的Ｆｃ探针检测了各５份ＮＤＶ强中弱毒株的尿囊液,均为阳性。但强毒株和弱毒株的Ｆｃ探针都能与所用的强、中、弱毒株杂交,说明该Ｆｃ探针尚不能区分强、弱毒株。     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。     

鸡胚绒毛膜源和鸡肾细胞源禽腺病毒抗原用于AGP试验检测…

将不同血清型的禽腺病毒（ＦＡＶ）毒株分别接种鸡胚绒毛膜（ＣＡＭ）和鸡肾细胞（ＣＫＣ）制成抗原，用琼扩试验（ＡＧＰ）比较这两种不同来源ＦＡＶ毒株的抗原反应。结果表明，两种抗原对同株ＦＡＶ的抗血清反应比对异株的抗血清敏感，且血清型间在敏感性上存在量的差异。ＣＡＭ源抗原对异株抗血清反应比ＣＫＣ源抗原敏感。多价ＣＡＭ源抗原（２￣３种抗原），可以提高敏感性，检测田间血清样品得到较高的阳性检出率。     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的…

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒）、对病毒进行纯一提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆人ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／Ｓａｌ Ｉ双酶切法、ＰｓｔＩ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，ａｑｔ