山羊源副流感病毒3型的分离与分子鉴定

2013年下半年至2014年3月,江苏多地育肥羊出现呼吸道症状为主的疾病。采集不同发病场鼻拭子和血清样品,检测呼吸道相关病原,在大部分样品中检测到副流感病毒3型。将阳性病料接种于MDBK细胞,连续传代5代,经RT-PCR和血凝试验检测证实分离到病毒,命名为JS2013。扩增完整的M基因,进行进化分析表明该毒株不同于牛和人副流感病毒3型,具有独特的基因特征。这是国内外首次报道山羊源副流感病毒3型的分离鉴定。     

山羊副流感病毒3型人工感染山羊的致病性

为了明确新分离的山羊副流感病毒3型(CPIV3)JS2013株的致病性,本试验采用动物感染试验的方式研究该病毒在本属动物体内的复制、排毒以及组织病理损伤等情况。通过病毒血症、临床症状、病理组织学检测、HI抗体及中和抗体检测综合分析病毒对山羊的致病性。结果表明,攻毒后的山羊出现以喷嚏、咳嗽、流鼻涕、眼分泌物增多以及呼吸困难为主的临床症状;攻毒后1d即可检出病毒血症,持续到攻毒后7d,且从攻毒后1~7d可以从鼻拭子中检测到排毒。剖检观察攻毒组山羊肺组织出现增生实变、肿大,组织病理学检测发现肺组织出现肺泡间隔增宽、肺泡结构消失、炎性细胞浸润等变化。HI和中和试验表明,山羊感染后7d开始出现血凝抑制抗体,14d出现中和抗体,并持续升高至28d。以上结果证实CPIV3JS2013株对山羊具有较强的致病性,为后续研究奠定基础。     

湖南省部分地区山羊弓形虫血清学调查

为了解湖南省羊弓形虫病流行情况,2017年采用间接血凝试验(IHA),对邵阳、常德、湘潭、岳阳、株洲、郴州、张家界、娄底等8个地区进行山羊弓形虫血清学调查。结果显示:共采集的5 600份羊血清中,检出弓形虫血清抗体阳性468份,样品阳性率为8.36%,其中2017年上半年阳性率为8.75%,下半年为7.96%,无明显季节性差异(P 0.05);在抽检的216个场户中,检出阳性场户102个,场群阳性率为47.22%,其中散养户的场阳性率与样品阳性率(分别为64.61%、12.04%)高于规模场(分别为39.73%、7.14%),差异显著(P 0.05);1岁以上成年羊(10.77%)和1～6月龄(9.28%)幼年羊的样品阳性率明显高于7～12月龄的青年羊(5.93%),差异极显著(P 0.01);8个地区的样品阳性率有差异,其中邵阳市最高(10.00%),常德市最低(6.42%)。调查结果表明,弓形虫感染在湖南省羊群中较为普遍,各地区羊群中均存在不同程度的感染,因此湖南省应注意加强弓形虫监测与防控,尤其是散养和1岁以上成年羊群,以确保公共卫生安全。     

广西部分地区猪流感病毒的血清学调查

为了解广西猪群中猪流感(SI)的流行情况,以猪流感病毒H3N2亚型作为诊断抗原,采用微量血凝抑制试验(HI)方法,对广西部分市(县)的猪群进行猪流感的血清学调查.在12个市(县)采集的1000份血清中,有10个市(县)检出H3N2抗体,共有257份血清呈H3N2抗体阳性,平均阳性率为25.7%.百色的阳性率最高,达到82.9%,贵港和南宁市郊两地没有检出阳性,其它9个市(县)的阳性率在13.0%～45.7%之间.结果表明我区猪群中很可能存在H3N2亚型猪流感感染,其中百色地区猪流感的感染率比较高.     

IFN-α对山羊副流感病毒3型的抗病毒活性

旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta (DE3),IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作用于牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cell, MDBK cell)后6种干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes, ISGs)的相对表达水平;同时,利用TCID₅₀及Western blot测定其对CPIV3的抗病毒活性。结果表明,原核表达的山羊IFN-α蛋白含量为0.20 mg·mL^-1,Western blot结果表明表达产物相对分子质量约为20 ku,与预期结果相符。RT-qPCR结果显示,山羊IFN-α孵育MDBK细胞后,可显著刺激RSAD2、STAT1及ISG15等6种ISGs基...     

广西山羊布鲁氏菌病血清学调查

我国的羊布鲁氏菌病主要流行于东北、西北及内蒙古牧区。近年来,广西大力发展山羊养殖,各地引种频繁,在引种中疏忽了对该病的检疫,造成了一定的隐患。为摸清疫情,消除隐患,从2003年8月到2005年10月对全区山羊传统主产区和新养殖区的11市28县(区)进行山羊布鲁氏菌病血清学调查,结果报告如下。1材料和方法1.1血清现场采血,分离血清后,冷冻保存待检。1.2抗原及标准阳性血清试管凝集抗原购自中国流行病学研究所,批号2004-03,有效期2006.03。阴性血清自备,批号2003-1,有效期2008.06。1.3方法具体操作按《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T18646—2002)的规定进行。血清先做虎红平板凝集试验筛选,阳性和可疑样品再做试管凝集试验进一步确认,判断标准为:血清稀释1∶50出现“ ”以上凝集,判为阳性。2结果检测南宁、崇左、北海、梧州、贺州、桂林、河池、防城港、来宾、百色和柳州11市的28县(区)共1469份血清,检测结果如表1。3小结检测区内11个市28个县(区)共1469份血清,结果阳性18份,阳性率为1.23%。检出的18份阳性血清均来自柳州市的一个养羊点,经现场重新采血,试管凝集试验确...     

MiR-222对山羊副流感病毒3型复制的影响

为探讨miR-222对山羊副流感病毒3型(CPIV3)复制的影响及其机制。本研究将miR-222模拟体转染MDBK细胞,接种CPIV3病毒液,收集上清和细胞,测定病毒效价和干扰素(IFN)含量;通过Target Scan和miRanda等生物信息学软件预测miR-222调控的靶基因,用双荧光素酶报告系统验证其靶基因,RNA干扰技术研究靶基因对CPIV3复制的影响。结果显示,miR-222模拟体能抑制CPIV3复制,转染miR-222组IFN的表达水平较高,且病毒复制效价(10~(2. 5)TCID_(50)·0. 1 mL~(-1))显著低于miRNA阴性对照组(10~(3. 3)TCID_(50)·0. 1 mL~(-1));双荧光素酶报告系统验证和qPCR检测得出,miR-222可靶向结合IRF2的3'-UTR,并降解IRF2的mRNA和抑制IRF2蛋白表达;敲除IRF2的MDBK细胞感染CPIV3后,病毒复制效价(10~(2. 0)TCID_(50)·0. 1 mL~(-1))低于正常MDBK细胞组(10~(3. 2)TCID_(50)·0. 1 mL~(-1))。本研究表明,miR-222通过靶向降解IRF2 mRNA提高IFN表达水平来抑制CPIV3复制,为基于miR-222研制潜在抗病毒药物提供基础资料。     

江西省部分地区副猪嗜血杆菌血清学调查

为了明确江西省部分地区猪场的副猪嗜血杆菌感染率,采用副猪嗜血杆菌间接血凝方法对江西不同区域(赣东、赣南、赣西、赣北、赣中)猪群进行血清学调查,共提取到278份猪血清样品,经过检测发现平均阳性率为33.1%,其范围从15.0%～45.0%,表明该地区猪场有副猪嗜血杆菌不同程度的感染。     

广西山羊衣原体病血清学调查

采集了广西的百色、南宁、桂林、柳州和贵港等５个地（市）、１４个县的２１６８份山羊血清,应用衣原体滤ＩＨＡ试验,进行山羊衣原体病血清学调查,平均阳性率为１．９８％（４３／２１６８）。此外,还统计分析了隆林、来宾、扶绥和武宣四个县的５１９头不同性别和不同年龄的百衣原体ＩＨＡ检测结果,公、母山羊感染差异不显著,公羊平均阳性率为５．３２％（５／９４）,母羊平均阳性率为３．５４％（１５／４２４）,（Ｐ〉０．     

山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的转录组分析

本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组与对照组进行高通量测序,并用测序评估、基因注释等生物信息学方法进行分析。结果显示,差异表达基因共261个,其中表达上调140个,表达下调121个,经RT-qPCR方法验证8个差异表达的干扰素信号通路相关基因,结果与高通量测序一致。进一步GO分类结果显示,差异表达基因主要涉及细胞生物学进程、构成细胞的组分以及实现的分子功能三个方面,KEGG分析显示这些基因参与代谢、生物系统、细胞进程、基因信息进程和环境信息进程。本研究为深入探究CPIV3的致病机制奠定了基础。     

山东省部分地区规模化奶牛场副结核病.血清学调查

为了解山东部分地区奶牛副结核病的感染情况,采用ELISA方法对2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区18个不同规模奶牛养殖场2岁以上所有泌乳奶牛进行副结核病的血清抗体水平检测,并运用统计学软件进行数据分析.结果显示,2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区总体抗体阳性率为17.80％(579/32...     

天津部分地区副猪嗜血杆菌病血清学调查

为了解天津部分地区副猪嗜血杆菌病感染情况,采集天津宁河区、宝坻区、武清区、静海区规模化猪场及个体养殖户的母猪、保育猪、哺乳仔猪、生长育肥猪未做副猪嗜血杆菌菌苗的猪血清共420份进行调查。结果表明:天津部分地区均存在不同程度副猪嗜血杆菌病感染,统计结果为天津地区有效防治副猪嗜血杆菌病提供了参考依据。     

广西部分地区鸡群10种疫病的血清学调查

随着广西养鸡业的发展以及种鸡、种蛋的不断引进,鸡群流动加快,鸡的疫病也随之扩散,对广西养鸡业的危害日益严重,带来很大的经济损失。为了摸清广西鸡疫病的感染状况,１９９５～１９９６年期间,笔者对广西部分地区鸡场的非免疫鸡群进行了传染性支气管炎（ＩＢ）、传...     

山羊副流感病毒3型通过Caspase途径诱导气管上皮细胞凋亡

旨在揭示山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染气管上皮细胞后是否可诱导细胞发生凋亡,并对细胞凋亡的信号通路进行初步探究。本研究将CPIV3病毒液接种气管上皮细胞,在12、24、36、48、72和96 h收集培养物上清检测病毒增殖滴度;通过形态学观察CPIV3诱导气管上皮细胞病变(CPE)情况;采用Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒和Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性检测试剂盒检测凋亡水平及相关指标;荧光定量PCR检测细胞凋亡分子mRNA表达水平;Western blot分析激活型Caspase-3蛋白表达变化情况。结果显示,CPIV3在气管上皮细胞中的增殖呈上升趋势,96 h能达到10~(4.50)TCID_(50)·mL~(-1);形态学观察发现,病毒接种后48 h出现细胞收缩变圆、脱落等CPE现象;流式细胞术检测及Caspase活性检测表明,感染组细胞出现细胞凋亡,48 h后细胞凋亡率达19.66%,且Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性随着时间延长逐渐升高;死亡受体凋亡途径和线粒体凋亡途径细胞凋亡因子mRNA表达上调。Western blot分析揭示,激活型Caspase-3蛋白在病毒感染过程中被活化。本研究证实CPIV3感染可诱导气管上皮细胞凋亡,且Caspase途径在病毒诱导细胞凋亡的过程中发挥重要作用。     

宁夏部分地区副猪嗜血杆菌病的血清学调查

<正>为了解宁夏地区副猪嗜血杆菌病感染情况,白刚(2010)等采用间接血凝法对银川市永宁县、石嘴山市平罗县、吴忠市盐池县及中卫市中宁县403份血清进行调查。结果表明,宁夏地区副猪嗜血杆菌阳性率25.31%(102/403),其中永宁县11.76%     

宁夏部分地区副猪嗜血杆菌病的血清学调查

为了了解宁夏部分地区副猪嗜血杆菌病感染情况,采用副猪嗜血杆菌间接血凝对宁夏4个不同地区猪场的403份血清样品进行了血清学调查,结果为该菌阳性检出102份,阳性检出率25.31%,该病的发生与季节,猪的日龄和地区有关,本研究表明宁夏部分地区副猪嗜血杆菌病存在不同程度的感染,统计结果为该地区防治本病提供理论依据。     

遵义地区H3N2亚型犬流感病毒血清学调查

为了解遵义地区H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)感染情况,本研究采用酶联免疫吸附试验对遵义市区及周边农村收集的320份血清样本进行了抗体检测。结果显示,遵义地区H3N2亚型CIV抗体整体阳性率为8.44%(27/320);农村田园犬抗体阳性率(9.24%)高于市区宠物犬(7.96%),但差异不具有显著统计学意义(P0.05);雄性犬的抗体阳性率(8.79%)高于雌性(7.97%),差异不显著,不具有统计学意义(P0.05);1～3岁的青年犬抗体阳性率最高(9.63%),其次为幼犬(8.62%),3岁以上犬最低(6.25%),差异不显著,不具有统计学意义(P0.05)。结果表明,遵义地区存在H3N2亚型犬流感病毒感染,相关部门应加强防范。     

广西马源H9亚型流感病毒的血清学调查

为了解广西马源H9亚型流感病毒的感染情况,本研究从广西4个主要养马地区采集马血清样品共计1 110份,采用血凝抑制(HI)试验方法进行抗体检测。结果显示,1 110份血清样品中共检测出阳性血清7份,平均抗体阳性率为0.54%。本实验结果表明,广西马群已受到H9亚型流感病毒的感染。