BDNF和TrkB蛋白在5月龄和10月龄雌猫子宫和卵巢表达的研究

为探讨脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在幼龄和初情期猫子宫和卵巢的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF和TrkB在5月龄、10月龄雌猫子宫和卵巢上的表达差异。结果表明:BDNF和TrkB在原始卵泡和各级卵泡中均有表达,BDNF在窦状卵泡的颗粒细胞、膜细胞和卵母细胞中表达明显,10月龄蛋白表达强度强于5月龄,颗粒细胞的蛋白表达增强明显;TrkB表达部位与BDNF基本一致,但卵泡液和卵母细胞表面出现强表达,10月龄表达强度与5月龄基本一致。此外在猫卵巢发现含有多个卵母细胞的卵泡。BDNF在子宫内膜、腺体和小血管均有表达,10月龄子宫的蛋白表达强度高于5月龄,BDNF在10月龄子宫肌层有表达、5月龄无表达;TrkB在10月龄子宫内膜、腺体、肌层弱表达,小血管强表达,TrkB蛋白除了在5月龄子宫的小血管强表达外其他部位几乎无表达。     

幼龄小麂子宫组织结构及BDNF和TrkB蛋白表达的研究

为了探讨幼龄小麂子宫组织结构,并研究脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶(TrkB)蛋白在幼龄小麂子宫中的表达情况,试验采集意外死亡小麂子宫样品,运用H. E.染色方法对其子宫结构进行观察,同时采用免疫组织化学方法分析BDNF和TrkB蛋白在子宫中的分布情况。结果表明:小麂两侧子宫角存在体积较大的子宫肉阜凸伸向子宫腔,子宫组织结构与其他动物相似,包含四层结构,固有层可见不同形态的子宫腺,上皮和固有层有数量不等的淋巴细胞; BDNF和TrkB蛋白在小麂子宫内膜上皮、腺上皮、肌层和血管内皮都可见强度不等的表达,BDNF表达强度高于TrkB蛋白。     

BDNF和TRKB蛋白在妊娠期山羊子宫和胎盘的表达

为探讨脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶受体B(TRKB)在妊娠期山羊子宫和胎盘中的表达情况,本实验分别于妊娠15、25、65 d采集子宫和胎盘样品,免疫组织化学方法分析BDNF和TRKB蛋白的分布情况。结果表明:妊娠15 d时,BDNF和TRKB蛋白在子宫内膜上皮和腺上皮细胞中强表达,BDNF在肌层弱表达,而TRKB强表达;妊娠25 d和65 d时,2种蛋白在子宫内膜上皮和腺上皮细胞中维持强表达,同时在胎儿绒毛膜滋养层细胞中表达强烈;与妊娠15 d相比,妊娠25 d和65 d时2种蛋白均在浅层子宫腺强烈表达,深层子宫腺弱表达。综上可知,随着妊娠的进行,BDNF和TRKB蛋白的表达情况也发生变化,提示BDNF对山羊妊娠活动有一定的调节作用,与妊娠期山羊子宫和胎盘的组织结构变化相关联,可能通过与其受体TRKB的特异性结合来实现其功能。     

哺乳动物胚胎着床前的基因表达与调控

综述近年来哺乳动物胚胎着床前这一发育阶段基因表达与调控的研究进展。早期胚胎发育受母源型 ,即卵母细胞内 m RNA和蛋白质的调控 ,随着母型 m RNA的消耗 ,合子型基因取而代之进行合子型调控 ;其中合子型基因激活是调控过渡的关键事件。     

哺乳动物胚胎着床前的基因表达与调控

综述近年来哺乳动物胚胎着床前这一发育阶段基因表达与调控的研究进展，早期胚 育受母源型，即卵母细胞内mRNA和蛋白质的调控，随着母型mRNA的消耗，合子型基因取而代之进行合子型调控；其中合子型基因激活是调控过渡的关键事件。     

哺乳动物着床前胚胎细胞凋亡的研究进展

细胞程序化死亡就是在预定的时间和位点去除一些特殊的细胞,这些被去除的细胞所表现出的形态和生化方面的变化就定义为"凋亡".     

哺乳动物着床前胚胎的体外培养营养体系的研究

胚胎的体外培养是哺乳动物胚胎工程的基础环节。近年来,为了克服胚胎体外发育所存在的缺陷,国内外对不同动物胚胎的体外发育所需营养进行了系统的研究,大力地推动了胚胎体外生产的进程,对保护濒危野生动物种质资源也具有重要的意义。本文就哺乳动物着床前胚胎体外发育培养液中的重要成分进行了分析。     

MMPs及其在胚胎着床中作用的研究进展

20世纪70年代以来,基因的体外重组和克隆技术的诞生,使以DNA重组技术为核心的现代生物技术蓬勃发展,从而推动了农业现代化的发展.传统的农业生产技术被高新的生物技术取代,基因药物、具有优良性状的转基因动物、克隆动物等出现使农业进入前所未有的现代化时代.作为克隆动物技术手段--胚胎移植技术是目前生物技术领域研究的热点之一,其科学意义和应用价值重大.通过此技术,不仅可以生产克隆动物,而且对于研究动物胚胎的发育机理也具有重要的作用.     

番茄红素对限制应激着床期孕鼠子宫内膜发育和胚胎着床的影响北大核心

试验旨在探究番茄红素(LYC)对限制应激孕鼠着床期子宫内膜发育和胚胎着床数目的影响。选择8周龄昆明系孕鼠80只,在妊娠第1 d随机分为4组,每组3个重复,每个重复10只,分别为对照组、限制应激组(RS组)、玉米油+应激组(CRS组)、LYC+应激组(LRS组)。将LYC按10 mg/kg (体重)剂量给孕鼠灌胃(0.5 mL/只),灌胃2 h后进行限制应激处理(4 h/d),连续处理5 d,即胚胎着床期第5 d时,取血清和子宫组织。结果显示,与RS组相比,LRS组孕鼠血清中去甲肾上腺素含量降低10.00%,胚胎着床数增加47.92%,子宫指数增加83.36%(P<0.05),子宫内膜结构趋向对照组,表现为子宫内膜疏松,在靠近子宫腔附近细胞出现明显蜕膜化,子宫腺数量增多。进一步经荧光定量PCR和分光光度法检测发现,LYC预处理能够显著增加应激孕鼠子宫核因子红细胞相关因子2 (Nrf2) mRNA表达,改变Nrf2下游信号抗氧化酶水平。与RS组相比,LRS组着床期子宫中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性分别增加21.10%、82.60%,总抗氧化能力(T-AOC)显著增加64.50%,而丙二醛(MDA)含量显著降低65.60%(P<0.05)。研究表明,LYC可增加限制应激孕鼠着床期子宫中Nrf2表达,降低子宫局部氧化应激水平,提高子宫局部免疫水平,进而缓解应激对子宫内膜蜕膜发育的不利影响,增加胚胎着床数目。     

水通道蛋白7和8在牛早期胚胎发育过程中的表达规律

以牛卵母细胞为研究对象,体外成熟后孤雌激活,收集各个时期的卵母细胞和不同发育阶段的早期胚胎,提取总RNA。根据GenBank公布的mRNA序列设计引物,进行RT-qPCR,检测不同阶段AQP7与AQP8的时空表达规律,结果表明:AQP7与AQP8在不同时期卵母细胞和早期胚胎中具有相似的表达规律,在8Cell达到峰值,而到16Cell期表达量均有显著下降。在牛早期胚胎发育阻滞期(8-16Cell期),胚胎发育由母源基因主导调控转向依赖合子自身遗传物质,这期间AQP7与AQP8表达变化说明其在转变过程中具有重要作用,本试验为AQP7与AQP8在牛早期胚胎发育过程中的功能研究奠定基础。     

年龄对小鼠植入前胚胎Dnmts表达量的影响

为了研究老化对小鼠植入前不同时期胚胎DNA甲基转移酶(Dnmts)表达量的影响,试验利用Western-blot方法分别检测了青、老年小鼠2细胞/4细胞、8细胞/桑椹胚、囊胚三种胚胎的Dnmts(Dnmt3a、Dnmt1、Dnmt3b、Dnmt3L)表达量。结果表明：青年和老年小鼠2细胞/4细胞胚胎除Dnmt3a表达量差异不显著(P>0.05)外,其余3种DNA甲基转移酶(Dnmt1、Dnmt3b、Dnmt3L)表达量均随年龄增加呈显著下降趋势(P<0.05);在8细胞/桑椹胚和囊胚中青年和老年小鼠4种DNA甲基转移酶表达量均无显著差异(P>0.05)。说明老化会导致小鼠2细胞和4细胞胚胎Dnmts表达量产生波动,对其他时期胚胎影响不大。     

膜联蛋白A8在小鼠早期妊娠子宫中表达研究

膜联蛋白A8(Annexin A8,ANXA8)是一种磷脂结合蛋白,与炎症反应、癌症的发生以及血管生成有密切联系。本实验旨在利用实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫组织化学的方法研究ANXA8 mRNA与蛋白在小鼠早期妊娠和人工蜕膜子宫中的表达。原位杂交结果表明:ANXA8 mRNA在小鼠早期妊娠第1～4天子宫腔上皮和腺上皮有微弱表达,ANXA8 mRNA在妊娠第5、6天的初级蜕膜区与第7、8天的次级蜕膜区表达,并随妊娠进行逐渐增强;人工蜕膜化模型中ANXA8 mRNA表达在蜕膜区。实时荧光定量PCR证明:ANXA8 mRNA的表达量在早期妊娠模型中的第7、8天显著提高,人工蜕膜侧子宫与对照侧相比也显著提高。免疫组织化学结果表明:ANXA8蛋白与ANXA8 mRNA表达规律相似。体外分离培养小鼠子宫基质细胞,并诱导蜕膜化,实时荧光定量PCR结果表明ANXA8随着基质细胞的蜕膜化表达升高。以上体内和体外实验表明,ANXA8在小鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,ANXA8参与小鼠子宫蜕膜化过程。     

p53在哺乳动物胚胎着床和分娩中的作用

近年来研究发现,p53家族成员在哺乳动物生殖过程中发挥重要的作用。本文对p53在哺乳动物胚胎着床和分娩中的作用及分子机制进行了全面的综述。     

铁与维生素A水平对小鼠子宫分泌蛋白及胚胎存活率影响

探讨铁与维生素A水平对小鼠子宫分泌蛋白及胚胎存活率影响。选取21日龄昆明种小鼠,随机分为9个处理组,每个处理3个重复,饲喂商品日粮2周,随后采用试验饲粮饲喂。试验采用3×3(铁、维生素A)2因子3水平有重复设计(铁添加水平为3.5、35和175 mg/kg,维生素A水平为400、4000和20000 IU/kg),饲喂第11周时,进行交配,此后选有阴栓的小鼠162只,每个处理3个重复,每个重复6只。结果表明:(1)妊娠3 d,与对照组(Fe1-VA1)相比,5组(Fe1-VA2、Fe1-VA3、Fe2-VA2、Fe2-VA3、Fe3-VA1)添加铁与维生素A对胚胎存活率影响显著(P<0.05),分别提高了20.0%、22.7%、24.7%、19.5%和7.7%。妊娠6 d,添加3.5 mg/kg Fe 4000 IU/kgVA、3.5 mg/kg Fe 20000 IU/kg VA、35 mg/kg Fe 4000 IU/kg VA和35 mg/kg Fe 20000 IU/kg VA效果较好(P<0.05)。妊娠18 d,与对照组相比,添加35 mg/kg Fe 4000 IU/kg VA组显著提高了47.4%(P<0.05);(2)铁与维生素A水平组合在对胚胎存活率、酸性磷酸酶含量、视黄醇结合蛋白含量影响显著(P<0.05)。添加35 mg/kg Fe 4000 IU/kg VA可使胚胎存活率、酸性磷酸酶含量、视黄醇结合蛋白含量和子宫总蛋白分泌含量最高;(3)175 mg/kg铁水平组降低了胚胎存活率、酸性磷酸酶、视黄醇结合蛋白和子宫总分泌蛋白含量。35 mg/kg铁水平组使胚胎存活率、酸性磷酸酶含量、视黄醇结合蛋白含量最高,提高了子宫总分泌蛋白含量;(4)4000 IU/kg维生素A组使胚胎存活率、酸性磷酸酶含量、视黄醇结合蛋白含量最大,提高了总分泌蛋白含量;(5)铁对子宫酸性磷酸酶含量影响显著(P<0.05),维生素A对视黄醇结合蛋白含量影响显著(P<0.05)。适量的铁和维生素A有利于胚胎发育;铁与维生素A水平组合对胚胎存活率、酸性磷酸酶含量、视黄醇结合蛋白含量影响存在互作效应。随着铁在3.5~35.0 mg/kg、维生素A在400~4000 IU/kg范围内增加,子宫铁蛋白、视黄醇结合蛋白增加,更好地促进胚胎存活。     

SerpinB6b在大鼠着床期子宫及蜕膜的表达与调控

SerpinB6b是丝氨酸蛋白酶抑制剂亚家族B成员之一。本实验旨在利用荧光定量PCR、原位杂交、免疫组织化学与蛋白质印迹分析等实验技术,研究SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~9 d、人工诱导蜕膜化及体外诱导蜕膜化模型子宫中的表达规律。结果显示:SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~5 d腔上皮、腺上皮有微弱表达;在6~9 d,表达主要集中在胚胎和蜕膜区,且随蜕膜化程度增加,表达量逐渐增强,且在第8天达到最高;在大鼠人工诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b在蜕膜区的表达均显著高于非蜕膜区;在大鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b随着诱导蜕膜化天数的增加呈上升趋势。以上体内和体外实验结果表明,SerpinB6b在大鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,SerpinB6b参与大鼠子宫蜕膜化过程。     

小鼠超数排卵和小鼠胚胎体外培养的研究

本研究用PMSG与HCG对昆明白小白鼠进行超排。经t检验,PMSG与HCG注射时间间隔48h比50h排卵总数少（差异显著）,但两种方法的获胚胎数差异不显著。同时,用处于5％CO2和空气中的TCM199－HCO3^-,M199－HEPES培育液在简易培养条件下对受精96h的小鼠胚胎进行体外培养48h。经卡方（x^2）检验,得出在5％CO2中的M199－HEPES培养液培养效果最好。     

低氧对BDNF和TrkB受体及其信号通路影响的研究进展

探析了急性低氧损伤与适度低氧或低氧预适应(HPC)神经保护作用的相关机制及其涉及的信号通路研究进展,回顾了脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)及BDNF/TrkB信号通路在神经生理及神经病理过程中的作用,并对急性低氧与低氧预适应分别影响BDNF、TrkB受体的表达和BDNF/TrkB信号通路的相关途径与机制进行了归纳。通过总结了解到低氧具有双重作用,既有严重缺氧导致损伤,又有适度低氧或低氧预适应对机体有益的保护作用,阐明其调节机制具有一定的参考价值。     

外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1表达的影响

应用免疫组织化学 SABC法 ,研究了外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜内转化生长因子 β1 (TGFβ1 )表达的影响。结果显示 :试验组皮下注射不同剂量孕酮 (2 mg/只 ,4 mg/只 )后 ,在孕 4 d,上皮内 TGFβ1 阳性着色 ,有的腺导管内具有 TGFβ1 阳性着色 ;且随着孕酮剂量的增大 ,上皮内 TGFβ1 阳性着色由子宫腔面向基面延伸 ,而腺上皮的阳性着色则呈下降趋势 ,基质内 TGFβ1 阳性着色则呈上升趋势。在孕 5 d,上皮内 TGFβ1 阳性着色呈现随孕酮剂量增大而下降的趋势 ,腺上皮和基质的 TGFβ1 动态变化如同孕 4 d。在孕 6 d,上皮、腺上皮及基质 TGFβ1 阳性着色均与孕 5 d的变化趋势相同。由此认为 ,外源性孕酮对小鼠子宫内膜各组织 TGFβ1 蛋白表达有影响。主要表现为 ,外源性孕酮可促进基质中 TGFβ1 的产生 ,对腺上皮 TGFβ1 的表达则具有下调作用     

RAD18基因在小鼠胚胎中的表达分析

为了研究RAD18基因在小鼠胚胎发育过程中的表达模式,试验以体外培养的FVB小鼠胚胎为材料,采用定量RT-PCR及免疫荧光技术分析RAD18基因在小鼠胚胎中的表达水平。qRT-PCR结果表明,RAD18基因在小鼠植入前各时期胚胎中均有表达,其中与1-细胞期胚胎相比,其在2-细胞、8-细胞期胚胎中表达水平较高(P0.01),在桑葚期和囊胚期胚胎中表达量显著下降(P0.01)。免疫荧光方法检测结果表明RAD18蛋白在在小鼠植入前各时期胚胎中均有表达。说明RAD18基因在小鼠植入前胚胎中均有表达,推测其与小鼠胚胎的早期发育密切相关。