热应激蛋白(HSPs)的表达

热应激蛋白 (HSPs)是存在于正常和非正常细胞中的一组结构高度保守的蛋白质。它不仅参与细胞的发育、生长和分化 ,而且在增强细胞对有害刺激的抵抗力、加速细胞自身修复等方面起关键作用。文章综述了各类不同HSPs在不同细胞、组织以及肿瘤中表达的研究进展 ,同时也论述了HSPs的分类和HSPs表达的作用和意义     

热应激蛋白(HSPs)研究进展

1962年,Ferruccio Ritossa 等人发现将果蝇的培养温度提高到30℃时,其幼虫的唾液腺的染色体上某一部位会出现＂蓬松＂的现象.热所诱导的蓬松现象产生的产物是一组蛋白质.然而,直到1974年这些产物才第一次得到确定,并定义为热应激蛋白。     

骨形态发生蛋白15基因mRNA在牛不同组织中的表达分析

由于BMP15基因对卵泡发育、优势卵泡的选择及排卵等雌性生殖过程的许多环节都起着关键作用,因此该研究应用RT-PCR技术检测了BMP15基因mRNA在蒙古牛卵巢、子宫、输卵管和肾脏组织中的表达情况.结果表明,BMP15基因在这4种组织中均有表达,只是在不同组织中的表达丰度不同,蒙古牛BMP15基因在卵巢组织中的mRNA水平极显著高于子宫组织(P＜0.01),显著高于肾脏组织(P＜0.05);说明BMP15基因在卵巢和输卵管中高度表达,在子宫和肾脏组织中表达丰度较低.     

热应激绍兴鸭不同组织HSP70基因mRNA表达研究

研究蛋鸭热应激条件下不同组织中热休克蛋白70(HSP70)基因mRNA表达规律,为揭示蛋鸭热应激反应机理提供参考。60只绍兴蛋鸭25℃饲养20d,其中30只进行40℃热应激处理1h,采取荧光定量PCR方法分别测定不同组织中HSP70mRNA的表达水平。试验组与对照组相比,肝脏、脾脏和胰腺组织HSP70mRNA表达差异不显著,其他6种组织HSP70基因表达量均有不同程度的增加,试验组心脏、腿肌、垂体、下丘脑、胸肌、肾脏中HSP70基因表达量分别高于对照组3.6倍、2.8倍、2.7倍、2.4倍、2.2倍和1.57倍。     

不同运输时间运输应激对肉牛组织中急性期蛋白的影响

为研究不同时间运输应激对肉牛肝脏和脾脏中急性期蛋白的影响,选取15头体质量相近健康肉牛作为实验动物,并将其随机分为运输0h组、运输应激3h组和运输应激6h组,每组5头肉牛。以速度为80km/h公路运输。运输刺激后,立即采集试验肉牛肝脏和脾脏。采用酶联免疫吸附试验和荧光定量PCR方法分别测定肝脏和脾脏中急性期蛋白SAA和HP的水平。结果表明:qRT-PCR方法检测结果显示,与运输0h组相比,运输3,6h后,肝脏组织中SAA的mRNA的表达量均显著升高(P0.05);而脾脏组织中SAA只在运输应激6h后,表达量显著增加(P0.05)。与0h组相比,在运输应激3h后,肝脏组织中HP的mRNA显著升高。在运输应激6h后,脾脏组织中HP的mRNA的表达量呈极显著性水平升高(P0.01)。使用ELISA方法检测结果显示,与0h组相比,运输应激后,肝脏组织中SAA浓度呈递增显著性水平升高(P0.05)。与运输0h组相比,运输应激6h后,肝脏和脾脏组织中SAA、HP均极显著性升高(P0.01)。说明不同运输时间可以引起不同组织中SAA和HP的变化,机体可以通过改变肝脏和脾脏中SAA和HP的含量来应对应激反应。     

骨形态发生蛋白基因mRNA在牛卵巢组织中的表达研究

骨形态发生蛋白(BMP15)基因主要在哺乳动物卵巢中表达,对卵泡的发育和分化起重要作用.研究根据其他物种BMP15基因的保守序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术,从牛卵巢中提取总RNA,扩增出BMP15 cDNA序列;将此片段克隆到pGM-T载体中,经PCR鉴定和DNA序列测定分析验证,符合BMP家族基因结构特征,然后根据此序列构建cRNA探针,利用原位杂交技术检测牛卵巢BMP15基因 mRNA的表达情况.原位杂交结果显示,牛BMP15基因,在初级卵泡和次级卵泡早期表达,在初级和次级卵泡的颗粒细胞中也表达,在次级卵泡晚期也有表达,同时BMP15基因在透明带周围表达,这可能是透明带周围细胞中的BMP15基因渗透到透明带中.     

骨形态发生蛋白基因mRNA在牛卵巢组织中的表达研究

骨形态发生蛋白(BMP15)基因主要在哺乳动物卵巢中表达,对卵泡的发育和分化起重要作用。研究根据其他物种BMP15基因的保守序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术,从牛卵巢中提取总RNA,扩增出BMP15cDNA序列;将此片段克隆到pGM-T载体中,经PCR鉴定和DNA序列测定分析验证;符合BMP家族基因结构特征,然后根据此序列构建cRNA探针,利用原位杂交技术检测牛卵巢BMP15基因mRNA的表达情况。原位杂交结果表明:牛BMP15基因,在初级卵泡和次级卵泡早期、初级和次级卵泡的颗粒细胞次级卵泡晚期都有表达,同时BMP15基因在透明带周围也表达,这可能是透明带周围细胞中的BMP15基因渗透到透明带中。     

急性冷、热应激对肉鸡肝脏和心脏组织中HSPs表达的影响

将45只28日龄罗斯308肉鸡随机均分为三组进行急性应激处理:热应激组在急性热应激下持续饲养6 h(温度为39℃,湿度为90%);冷应激组在急性冷应激刺激下持续饲养6 h(温度为11℃,湿度为90%);对照组鸡群在正常饲养条件下饲养(温度为26℃,湿度为60%)。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分别对肝脏和心脏组织中的4种热应激蛋白基因(HSP60、HSP70、HSP90、HSP110)的表达量进行对比分析。结果表明:在心脏组织中,HSP60表达量在冷、热应激下均无显著变化(P0.05);HSP90表达在冷应激下显著下降(P0.05);HSP70表达在冷、热应激下均显著上升(P0.05、P0.01);HSP110表达在冷应激下无显著变化,在热应激下极显著上升(P0.01)。在肝脏组织中,HSP60在冷应激下表达量显著下降(P0.05),热应激下表达无显著变化(P0.05);HSP70和HSP110在热应激条件下表达量极显著上升(P0.01);HSP90表达量在冷、热应激下均无显著变化(P0.05)。结果揭示:急性热应激相比于急性冷应激对应激蛋白的表达影响更显著;在急性热应激条件下,心脏和肝脏组织中HSP70和HSP110表达量均极显著上升。     

运输应激对大鼠空肠形态与热休克蛋白家族mRNA表达的影响

本试验以SD大鼠为试验动物,利用摇床模拟公路运输过程中的摇晃、高温、噪音、饥渴、拥挤、碰撞6个主要的刺激因子,构建了大鼠运输应激模型.应激条件为60 r/min,35℃,每天应激2h.体重为270±20 g,20只SD大鼠被随机均分为4组:对照组、应激1d组、应激2d组、应激3d组.在应激结束后,应激组大鼠体温均显著升高(P＜0.05),体重显著下降(P＜0.05),血清中皮质醇含量显著升高(P＜0.05).试验结果与实际公路运输结果一致,表明运输应激模型构建成立.形态学研究显示,运输应激造成了大鼠空肠组织损伤,与对照组相比从应激第1天到应激第3天空肠绒毛脱落逐渐加剧.荧光定量PCR研究结果则显示,Hsp27,Hsp70和Hsp90 mRNA的表达量也剧烈的升高.本试验研究表明,随着应激时间增加,大鼠空肠损伤逐渐加重,且Hsps mRNA表达量升高,表明Hsps的表达量与运输应激造成空肠的损伤严重程度有关.运输应激后表达量急剧升高的保护性分子Hsps,是动物抵抗运输应激的重要机制之一.     

不同品种仔猪运输应激后组织损伤与Hsp47表达

选取12头皮特兰和24头二花脸仔猪,体重达到（20±1）kg时,随机选取6头皮特兰和12头二花脸进行2h运输,其余仔猪作为对照组。采用HE染色、免疫组织化学以及酶联免疫吸附试验技术,通过对不同品种仔猪运输前后肝脏、肾脏、胃的损伤以及Hsp47的定位、定量观察,研究运输应激与Hsp47表达之间的关系。结果表明：2h运输应激后,二花脸和皮特兰仔猪各组织的实质细胞均有不同程度的损伤;Hsp47主要分布在肝脏的中央静脉和窦状隙内皮细胞、肾小球和远曲小管上皮细胞、胃的黏膜层和黏膜下层结缔组织内;在肾脏和胃组织中,皮特兰仔猪在运输后Hsp47含量增加（P〈0．05）,但二花脸仔猪的相应值未见显著差异,2个品种肝脏中Hsp47含量在运输前后的变化无差异。Hsp47在受检组织中尽管有表达增加的趋势,但2个不同品种仔猪组织中Hsp47含量升高的程度不同,说明二者对运输应激的敏感性不同,二花脸仔猪具有更强的抗应激能力。     

牛运输应激综合症的防控

畜牧业市场中牛肉占比日益增长,养殖健康牛是首要,但是近年来,渝东北地区不少养殖户为了摆脱良种牛或数量少等束缚,采取长途运输牛再饲养也成了首要问题,如何克服运输途中无法避免的碰撞、拥挤,以及运输空间的温差变化、空气湿度巨变、地理气候因素影响,如何让牛克服运输应激或水土不服,尽快适应新的气候条件、饲养方式、减少经济损失等都成了棘手的问题.本文主要研究了如何对运输过程中牛的应激性病理现象的预防和控制.     

牛运输应激综合征的诊治

本文结合牛运输应激综合征的发病原因和临床症状对疾病进行诊治,并提出相关预防措施。     

关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达分析

为了研究关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达水平及相关功能,试验以关岭牛为实验动物,分别提取心脏、肝脏、小肠、脂肪、大腿肌、背最长肌组织的总RNA,以不同组织的总RNA为模板,逆转录合成cDNA,以GAPDH基因作为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPAP2B基因mRNA在不同组织中的相对表达量。结果:关岭牛PPAP2B基因mRNA在脂肪中表达量最高,在其他组织中表达量很少甚至几乎不表达。结论:PPAP2B基因可能在牛的脂肪沉积过程中发挥作用。     

生物活性制剂抗牛运输应激试验研究

为了探讨以褪黑素为主要成分的生物活性制剂抗牛运输应激的效果,试验选择健康西门塔尔杂交牛36头,随机分为试验组和对照组,试验组在运输前1小时和途中分别肌肉注射生物活性制剂10 mL,对照组同时肌肉注射生理盐水10 mL,于运输前1天和运输后1天采集试验牛的血样,测定相关生理生化指标,统计发病率、死亡率,计算发病损失。结果表明:两组牛运输前与运输后体温未见明显差异(P0.05);运输后两组牛体重极显著降低(P0.01),但对照组牛体重损失较试验组牛大,两组间体重差异显著(P0.05)。运输前两组牛血液中中性粒细胞比率(NEUT)、淋巴细胞比率(LYMPH)差异不显著(P0.05);运输后两组牛血液中中性粒细胞比率极显著降低(P0.01),淋巴细胞比率极显著升高(P0.01);运输后试验组牛血液中中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比差异显著高于或低于对照组牛(P0.05)。试验组牛血清生化指标中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和皮质醇(COR)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)含量得到显著改善(P0.05),有利于提高机体的抗氧化能力和维持氧化-抗氧化状态的平衡。试验组牛发病率、死亡率明显低于对照组;对照组牛治疗成本为试验组的10.19倍。说明生物活性制剂能改善运输应激牛免疫功能,有利于降低牛运输应激反应。     

南江黄羊不同组织FSHR和GnRHR mRNA表达水平研究

为进一步了解FSHR和GnRHR基因的功能,揭示其对山羊繁殖性状的影响。本研究采用荧光定量PCR技术分析了南江黄羊不同组织FSHR和GnRHR基因的表达差异。结果表明:FSHR和GnRHR在下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、睾丸组织中均有表达,其中,FSHR和GnRHR在母羊子宫组织中表达水平较高,而在其他组织中表达水平相差不大;FSHR基因和GnRHR基因在子宫中的表达量均极显著高于其他组织(P0.01);GnRHR基因在卵巢组织中的表达量显著高于垂体、下丘脑、输卵管(P0.05);公羊睾丸组织FSHR和GnRHR基因的表达量显著高于下丘脑和垂体(P0.05)。本研究结果将会为进一步研究该基因对山羊繁殖相关功能影响的研究奠定基础。     

黄芪生脉饮对模拟运输应激大鼠肺脏组织TLR4和NF-kB p50 mRNA表达的影响

为了探讨模拟运输应激对大鼠肺脏组织TLR4和NF-kB p50 mRNA表达的影响及黄芪生脉饮的调控作用,本文将30只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和中药组,给中药组大鼠连续灌服黄芪生脉饮7 d,对照组、模型组灌服等量生理盐水,然后将模型组和中药组大鼠每日置于35℃、60r/min的水平摇床摇晃2 h,连续3 d,模拟运输过程中的摇晃、高温、拥挤等因素,构建大鼠运输应激模型,实时荧光定量PCR法测定大鼠肺组织TLR4和NF-kB p50 mRNA表达的变化。结果表明：模型组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达量显著低于对照组和中药组(P<0.05),中药组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05),模型组大鼠肺组织NF-kB p50 mRNA表达量显著低于对照组和中药组(P<0.05),且对照组和中药组NF-kB p50 mRNA表达量无显著差异(P>0.05)。因此,黄芪生脉饮可通过降低大鼠肺脏组织中TLR4 mRNA的表达、增强NF-kB p50 mRNA表达来达到抑制TLR4-NF-kB信号通路的激活,进而控制下游的炎性信号通路及炎性细胞因子的表达,起到抑制运输应激大鼠肺组织炎症的作用。     

牛运输应激的危害及防控

牛运输应激是常见应激反应的一种,主要发生于长途转群的育肥犊牛,可导致机体出现免疫力下降,继发感染呼吸道病、肠道病,不采取有效措施的情况下很容易影响后期生长;对此,本文从运输前采取抗应激措施,运输途中力求稳、平、快,做好牛群落地后的抗应激以及运输后的调理工作等几个方面详述了运输应激的具体预防方法,也阐述了反应过激的病牛的治疗方案,以期为广大养牛朋友带来帮助。     

急性热应激鹅心和肝和肺及肾脏组织中HSP70 mRNA及蛋白的表达

选取1日龄健康雁鹅60只,随机分为6组,单笼饲养于环控仓内。6周龄时,A组置于(22±1)℃作为对照,B、C、D、E、F组分别施于2、4、6、8 h和10 h(40±1)℃的急性热应激处理,处理后立即剖杀,取心、肝、肺和肾脏组织,实时荧光定量PCR测定HSP70 mRNA表达量,免疫组织化学方法测定HSP70表达量。结果表明:急性热应激处理可显著提高各组织中HSP70 mRNA及HSP70蛋白的表达水平,但不同组织出现显著变化的时间以及随热应激时间延长的变化规律存在差异。心脏组织HSP70 mRNA和蛋白表达量均在热应激2 h后出现显著升高(P0.05),热应激4 h后达到最高值,8 h后降至对照组水平,遵循二次曲线回归模式;肝脏热应激4~10 h间HSP70及其mRNA均显著高于对照组(P0.05),但未表现出显著的线性与二次回归趋势;肺脏HSP70 mRNA表达水平在热应激2~10 h间显著高于对照组(P0.05),HSP70则从热应激4 h起才显著升高,但二者随热应激时间延长均呈显著的线性升高规律;与肺相似,肾脏HSP70及其mRNA表达量随热应激时间的变化趋势也遵循线性回归模式,两者均在热应激4~10 h显著升高(P0.05)。     

黄芪生脉饮对模拟运输应激大鼠肺脏组织TLR4和NF-κB p50 mRNA表达的影响

为了探讨模拟运输应激对大鼠肺脏组织TLR4和NF-κB p50 mRNA表达的影响及黄芪生脉饮的调控作用,本文将30只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和中药组,给中药组大鼠连续灌服黄芪生脉饮7 d,对照组、模型组灌服等量生理盐水,然后将模型组和中药组大鼠每日置于35℃、60 r/min的水平摇床摇晃2 h,连续3 d,模拟运输过程中的摇晃、高温、拥挤等因素,构建大鼠运输应激模型,实时荧光定量PCR法测定大鼠肺组织TLR4和NF-κB p50 mRNA表达的变化。结果表明:模型组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达量显著低于对照组和中药组(P0.05),中药组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达量显著高于对照组(P0.05),模型组大鼠肺组织NF-κB p50 mRNA表达量显著低于对照组和中药组(P0.05),且对照组和中药组NF-κB p50 mRNA表达量无显著差异(P0.05)。因此,黄芪生脉饮可通过降低大鼠肺脏组织中TLR4 mRNA的表达、增强NF-κB p50 mRNA表达来达到抑制TLR4-NF-κB信号通路的激活,进而控制下游的炎性信号通路及炎性细胞因子的表达,起到抑制运输应激大鼠肺组织炎症的作用。     

牛组织高质量总RNA和mRNA的提取

实验以牛肌肉、肝脏等组织为材料,分别应用一步法和磁珠法提取总RNA和mRNA,通过反复试验分别改进提取过程中的部分操作步骤。结果表明：提取的的RNA和mRNA具有较好的均一性和完整性,符合进一步研究的需要。为不具备专用RNA操作间的实验室开展此方面的工作提供参考。